Name: Evaluación glicocualitativa rápida de proteínas recombinantes mediante un sistema totalmente automatizado (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Aprende a realizar análisis glicocualitativo de proteínas recombinantes mediante un sistema automatizado con tecnología de lectinas. Este método reduce el trabajo manual y facilita la validación de biomarcadores glicosílicos específicos de enfermedades.

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<meta charset="utf8"></head><body>Perfilado automatizado de glicanos basado en lectinas mediante una matriz de perlas en una sola punta (BIST)

<ol><li>Butler, M., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+cell+expression+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal cell expression systems.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 175, 1-36 (2021).</li>
<li>Silva, M. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+One+-+Lectin+biosensors+in+cancer+glycan+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Chapter One - Lectin biosensors in cancer glycan biomarker detection.</a> Adv Clin Chem. 93, 1-61 (2019).</li>
<li>Hiono, T., Nagai-Okatani, C., Kuno, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4.07+-+Application+of+glycan-related+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Glycoscience+%28Second+Edition%29%22%5BJournal%5D)">4.07 - Application of glycan-related microarrays.</a> Comprehensive Glycoscience (Second Edition). , 134-148 (2021).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lectin+bead+array+in+a+single+tip+facilitates+fully+automatic+glycoprotein+profiling%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Lectin bead array in a single tip facilitates fully automatic glycoprotein profiling).</a> Anal Chem. 91 (17), 11162-11169 (2019).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GlycoBIST%3A+A+System+for+automatic+glycan+profiling+of+a+target+protein+using+milli-bead+array+in+a+tip%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">GlycoBIST: A System for automatic glycan profiling of a target protein using milli-bead array in a tip.</a> Curr Protoc Protein Sci. 99 (1), e103(2020).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Bojar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+to+lectin+binding%3A+machine-learning+directed+annotation+of+57+unique+lectin+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide to lectin binding: machine-learning directed annotation of 57 unique lectin specificities.</a> ACS Chem Biol. 17 (11), 2993-3012 (2022).</li>
<li>Nagai-Okatani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2.0%3A+An+integrated+visualization+for+lectin+microarray-based+mouse+tissue+glycome+mapping+data+with+lectin+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">2.0: An integrated visualization for lectin microarray-based mouse tissue glycome mapping data with lectin histochemistry.</a> J Proteome Res. 20 (4), 2069-2075 (2021).</li>
<li>Geisler, C., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+glycoanalysis+with+Maackia+amurensis+lectins+requires+a+clear+understanding+of+their+binding+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Effective glycoanalysis with Maackia amurensis lectins requires a clear understanding of their binding specificities.</a> Glycobiology. 21 (8), 988-993 (2011).</li>
<li>Noro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N+-glycan+structures+of+Wisteria+floribunda+agglutinin-positive+Mac2+binding+protein+in+the+serum+of+patients+with+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">N -glycan structures of Wisteria floribunda agglutinin-positive Mac2 binding protein in the serum of patients with liver fibrosis.</a> Glycobiology. 31 (10), 1268-1278 (2021).</li>
<li>Rawitch, A. B., Pollock, H. G., Yang, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thyroglobulin+glycosylation%3A+Location+and+nature+of+the+N-Linked+oligosaccharide+units+in+bovine+thyroglobulin%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Thyroglobulin glycosylation: Location and nature of the N-Linked oligosaccharide units in bovine thyroglobulin.</a> Arch Biochem Biophys. 300 (1), 271-279 (1993).</li>
<li>Dang, K., Zhang, W., Jiang, S., Lin, X., Qian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+lectin+microarrays+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Open%22%5BJournal%5D)">Application of lectin microarrays for biomarker discovery.</a> Chemistry Open. 9 (3), 285-300 (2020).</li>
<li>Chen, S., Qin, R., Mahal, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweet+systems%3A+Technologies+for+glycomic+analysis+and+their+integration+into+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Sweet systems: Technologies for glycomic analysis and their integration into systems biology.</a> Crit Rev Biochem Mol Biol. 56 (3), 301-320 (2021).</li>
<li>Dwivedi-Agnihotri, H., Srivastava, A., Shukla, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+biotinylation+of+purified+proteins+for+measuring+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reversible biotinylation of purified proteins for measuring protein-protein interactions.</a> Methods Enzymol. 633, 281-294 (2020).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auto-lectin+dotcoding+by+two+octopuses%3A+Rapid+analysis+of+fluorescence-labeled+glycoproteins+by+an+8-channel+fully-automatic+bead+array+scanner+with+a+rolling-circle+detector%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Auto-lectin dotcoding by two octopuses: Rapid analysis of fluorescence-labeled glycoproteins by an 8-channel fully-automatic bead array scanner with a rolling-circle detector.</a> Anal Chem. 95 (32), 11868-11873 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,2 mL 8 tubos de PCR + tapa plana</td><td>FastGene</td><td>FG-0028FC/SE</td><td>Para la dispensación y el almacenamiento de reactivos de marcado de biotina</td></tr><tr><td>2,0 mL SC Micro Tube protein LB</td><td>SARSTEDT AG&Co. KG</td><td>72.694.600</td><td>Para cargar muestras en el software de análisis LuBEA-VIII</td></tr><tr><td>SAS</td><td>Institute Inc.</td><td>JMP 17</td><td></td></tr><tr><td>Ionizador antiestático. 110 voltios</td><td>Plas-Labs</td><td>800-AS/SPI</td><td>Úselo mientras inserta perlas en la punta BIST.</td></tr><tr><td>Pinzas antiestáticas NK2A</td><td>RUBIS&nbsp;</td><td>9-5681-01</td><td>Úselo mientras inserta cuentas en la punta BIST.</td></tr><tr><td>Dispositivo de medición de reacción automatizado</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>LuBEA</td><td>Todos los datos de este estudio se obtuvieron utilizando LuBEA-VIII. Mientras que LuBEA se comercializa, LuBEA-VIII se encuentra actualmente en la fase de desarrollo. El sitio web para obtener información detallada sobre los productos de LuBEA y LuBEA-VIII se puede encontrar en la siguiente URL (https://www.pss.co.jp/english/technology/apit/bist02.html).</td></tr><tr><td>Biotina-(AC5)2 Sulfo-Osu</td><td>Dojindo</td><td>341-06801</td><td>Como reactivo de biotinilación</td></tr><tr><td>BIST espaciador perla- V-11</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>F4938000</td><td>Diámetro: 1 mm</td></tr><tr><td>Punta y funda BIST</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>F4930-000</td><td>Llene esta punta vacía con cuentas.</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio</td><td>Wako</td><td>039-00475</td><td>Para la preparación de soluciones tampón</td></tr><tr><td>Puede obtener la solución de señal 2</td><td>TOYOBO</td><td>NKB-301</td><td>Este reactivo de bloqueo es bueno para este método</td></tr><tr><td>Concentradores de vacío de sobremesa CentriVap</td><td>Labconco 7810010</td><td></td><td>Para reactivo seco de biotinilación. La sustitución proporcionada por otras empresas es posible.</td></tr><tr><td>Claridad Sustrato ECL Occidental&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1705060</td><td>Para la medición de las muestras mediante LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Trampa fría de la serie CentriVap</td><td>Labconco</td><td>7460040</td><td>Para seco de reactivo de biotinilación. La sustitución proporcionada por otras empresas es posible.</td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Wako</td><td>077-00735</td><td>Para la preparación de soluciones tampón</td></tr><tr><td>Cloruro de manganeso (II) Tetrahidrato</td><td>Wako</td><td>139-00722</td><td>Para la preparación de soluciones tampón</td></tr><tr><td>Milli-Q referencia</td><td>MERCK</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Como agua desionizada para la dilución de reactivos y tampones</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wako</td><td>162-19321</td><td>Para la preparación de soluciones tampón</td></tr><tr><td>Peroxidasa Estreptavidina</td><td>Jackson</td><td>016-030-084</td><td>Este anticuerpo es bueno para el análisis de GlycoMIST. Es útil para la detección de la Western blot, aunque otras empresas pueden proporcionar sustituciones.</td></tr><tr><td>Cordón de la sonda</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>FP4936000</td><td>Para la preparación de perlas fijadas con lectina. Véase Shimazaki, H. et al., Current Protocols in Protein Science, 2020 en la sección de referencia para obtener más detalles.</td></tr><tr><td>Tubos LoBind de proteínas 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>0030108442</td><td>Utilizar durante la preparación de las muestras, como la biotinilación.</td></tr><tr><td>Gel de sílice (para deseccán)</td><td>Kanto chemical</td><td>37039-02</td><td>Úselo mientras almacena la punta de GlycoBIST y el reactivo de biotinilación seco.</td></tr><tr><td>Hoja de eliminación de electricidad estática M</td><td>TRUSCO NAKAYAMA</td><td>SD5050</td><td>Úselo mientras inserta cuentas en la punta BIST.</td></tr><tr><td>Cartucho SV II</td><td>Daido Industria Química</td><td>ED041</td><td>Para la medición de las muestras por LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Microcentrífuga de mesa-CAPSULEFUGE</td><td>TOMY</td><td>PMC-060</td><td>Para la centrifugación de la mezcla en cada proceso</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Nacalai tesque</td><td>35501-15</td><td>Para la preparación de soluciones tampón</td></tr></tbody></table>

evaluación glicocualitativa rápida de proteínas recombinantes mediante un sistema totalmente automatizado

Rapid Glyco-Qualitative Assessment of Recombinant Proteins Using a Fully Automated System

Evaluación glicocualitativa rápida de proteínas recombinantes mediante un sistema totalmente automatizado

Protein glycosylation, a critical post-translational modification, influences the stability, efficacy, and immunogenicity of recombinant proteins, ...

rapid-glyco-qualitative-assessment-recombinant-proteins-using-fully

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

En este estudio, se describe un protocolo mejorado para una micromatriz anticuerpo multiplexado de alto rendimiento con el método de detección de lectina que se puede utilizar en perfiles de glicosilación de proteínas específicas. Este protocolo incluye nuevos reactivos fiables y reduce significativamente el tiempo, el coste y los requisitos de equipos de laboratorio, en comparación con el procedimiento anterior.

Anticuerpos, químicamente bloqueado Microarray de multiplexado de alto rendimiento de perfiles de glicosilación de proteínas específicas en muestras complejas

En este estudio se comparó la expresión de una proteína recombinante humana diana en diferentes plataformas de producción. Nos centramos en los cultivos tradicionales basados en fermentadores y en las plantas, describiendo la configuración de cada sistema y destacando, sobre la base de los resultados informados, los límites y ventajas inherentes a cada plataforma.

Un Análisis Comparativo de Expresión recombinante de proteínas en diferentes Biofactorías: Las bacterias, células de insecto y Plant Systems

Presentamos un método modular automatizado de alto rendimiento para la identificación y caracterización de exopolisacáridos microbianos a pequeña escala. Este método combina una preselección rápida para analizar la cantidad total de polisacáridos secretados con una huella digital detallada de carbohidratos para permitir el cribado rápido de cepas bacterianas recién aisladas o colecciones completas de cepas.

Plataforma modular de selección automatizados de alto rendimiento de exopolisacáridos Junto con el análisis de carbohidratos de la huella digital de alta sensibilidad

Se desarrolló un protocolo de alto rendimiento para la purificación combinada de proteómica y glicómica y la cuantificación de LC-MS/MS en plasma. El análisis de desamidación de los motivos de glicosilación ligados a N fue específico para los sitios desglicosilados. La cuantificación precisa de N-glicanos se logró acoplando la separación de N-glicanos asistida por filtro a la normalización de la individualidad al marcar con la estrategia de etiquetas de hidrazida de glicano.

Un Glicómica cuantitativa y Proteómica estrategia de purificación combinada

Este documento describe una metodología para preparar muestras de tejido cardiovascular para el análisis de MS que permite (1) el análisis de composición de proteínas ECM, (2) la identificación de los sitios de glicosilación, y (3) la caracterización de la composición de formas de glicano. Esta metodología se puede aplicar, con modificaciones menores, para el estudio de la ECM en otros tejidos.

Glycoproteomics de la matriz extracelular: Un método para el análisis glucopéptidos Intacto El uso de la espectrometría de masas

Este trabajo muestra el potencial de la tecnología de glicanos impreso array (PGA) para el análisis de la circulación de los anticuerpos anti-hidratos de carbono en pequeños animales.

Variedad de glicanos impresos: Una técnica sensible para el análisis del repertorio de circulación de los anticuerpos anti-hidratos de carbono en pequeños animales

Se presenta un protocolo detallado para la operación concurrente de culturas de célula paralelo 48 bajo variadas condiciones en un sistema de microbioreactor. Proceso de cultivo celular, la cosecha y el análisis del título de anticuerpos posterior se describen.

Microbioreactor uso de alto rendimiento automático para la producción de IgG1 modelo en células CHO

Se ha descrito un protocolo detallado para la purificación y posterior análisis posterior de un anticuerpo monoclonal a partir del fluido de cultivo celular cosechado (HCCF) de microbiorreactores automatizados. También se presenta el uso de análisis para determinar los atributos de calidad críticos (CQA) y maximizar el volumen de muestra limitado para extraer información vital.

Purificación y análisis de un anticuerpo monoclonal de células de ovario de hámster chino utilizando un sistema automatizado de microbiorreactores

La inmunoglobulina G (IgG) N-glicano se caracteriza mediante cromatografía de interacción hidrófila UPLC. Además, la estructura de IgG N-glicano está claramente separada. Presentado aquí es una introducción a este método experimental para que pueda ser ampliamente utilizado en entornos de investigación.

Inmunoglobulina G Análisis de N-Glycan por Cromatografía Líquida Ultra-Performance

El patrón de glicosilación de un anticuerpo determina su rendimiento clínico, por lo que persisten los esfuerzos industriales y académicos para controlar la glicosilación. Dado que las campañas típicas de glicoingeniería requieren mucho tiempo y mano de obra, la generación de un protocolo rápido para caracterizar el impacto de los genes de glicosilación utilizando silenciamiento transitorio resultaría útil.

Glicoingeniería rápida de anticuerpos en células de ovario de hámster chino

Este protocolo describe la producción de ribonucleasa recombinante humana SLFN14 y su análisis estequiométrico mediante fotometría de masas.<br...

Producción rápida de ribonucleasa humana SLFN14 recombinante y análisis estequiométrico mediante fotometría de masas

Aprende a realizar análisis glicocualitativo de proteínas recombinantes mediante un sistema automatizado con tecnología de lectinas. Este método reduce el trabajo manual y facilita la validación de biomarcadores glicosílicos específicos de enfermedades.

Evaluación glicocualitativa rápida de proteínas recombinantes mediante un sistema totalmente automatizado

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