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Evaluación glicocualitativa rápida de proteínas recombinantes mediante un sistema totalmente auto...
Evaluación glicocualitativa rápida de proteínas recombinantes mediante un sistema totalmente auto...
JoVE Journal
Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Rapid Glyco-Qualitative Assessment of Recombinant Proteins Using a Fully Automated System

Evaluación glicocualitativa rápida de proteínas recombinantes mediante un sistema totalmente automatizado

Full Text
1,338 Views
05:19 min
June 28, 2024

DOI: 10.3791/66571-v

Sayaka Fuseya1, Ayaka Ono1, Hiromi Ootani1, Saho Mizukado1, Tomomi Obayashi2, Nana Tanaka2, Hiroko Shimazaki1,2, Kenji Kajiyama2, Moe Ashitomi2, Shiori Yasuda2, Takenori Miyabe2, Kazuhiro Nakamura2, Osamu Segawa2, Kazumi Sawakami2, Atsushi Kuno1

1Molecular & Cellular Glycoproteomics Research Group, Cellular and Molecular Biotechnology Research Institute,National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, 2Precision System Science Co., Ltd.

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Anteriormente se desarrolló un sistema para el análisis automatizado y rápido de glicanos en proteínas. Este artículo presenta el protocolo para el "análisis glicocualitativo", optimizado para un amplio espectro de usuarios, como los que se dedican al análisis de estructuras de glicanos en biofarmacéuticos y otros materiales glicoconjugados.

Nuestro ámbito de aplicación es la glicosilación de proteínas. Las estructuras de los glicanos están involucradas en cambios en la estabilidad y función de los productos biofarmacéuticos, y mucho más junto con las especies de células huésped y las condiciones de cultivo. En algunas condiciones de producción, puede estar contaminado hasta cierto punto.

Nuestro objetivo es crear herramientas fáciles de usar para dicha calificación de glicanos. Principalmente, LC y espectrometría de masas. Pero para pruebas simples, las tecnologías basadas en vectores son aplicables.

Los investigadores tienen disponibles muchos tipos de lectinas con diferentes especificidades, y cada lectina se une a algunos glicanos específicos. Por lo tanto, podemos estimar las estructuras de los glicanos utilizando el uso múltiple de la proteína lectina por lectina, el ELISA de lectina y el microarray de lectinas. Las glicosilaciones se producen en las proteínas funcionales de nuestro organismo.

La estructura de los glicanos se altera junto con las enfermedades. En la actualidad, hemos utilizado varias glicosilaciones específicas de enfermedades como biomarcadores diagnósticos, como C99 y FBL3. No solo se han descubierto nuevos candidatos a biomarcadores utilizando tecnologías basadas en la próxima generación, para la validación, necesitamos un sistema de calificación.

La glicocalificación es un trabajo duro. Necesitamos analizar cientos o miles de números en poco tiempo. Sin embargo, no existe un sistema que satisfaga las necesidades.

Nuestro método analítico es el único con un proceso de medición completamente automático, reduce drásticamente la mano de obra y nos permite realizar una validación efectiva. Nuestro trabajo tiene como objetivo mejorar aún más nuestro instrumento rápido, especialmente para la medición cuantitativa. Después de esto, esperamos realizar una herramienta de diagnóstico única con un panel de glico-biomarcadores medido por nuestro sistema de detección múltiple.

Por lo tanto, nos estamos centrando en el descubrimiento de glicobiomarcadores específicos de la enfermedad.

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Bioquímica Número 208 Productos biofarmacéuticos Micromatriz de lectina Sistema automatizado Perfil de glicanos Matriz de perlas en una sola punta (BIST) Proteínas calificadas para glico Conjugados de poliacrilamida-glicano Lectinas Etiquetado de muestras Visualización de código de puntos Control de calidad Evaluación de biomarcadores

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