Name: Técnica de cultivo in vitro para el estudio de la dinámica celular en escamas de pez cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T12:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 30 s
Description: Aprende una técnica de cultivo in vitro para estudiar la dinámica celular en escamas de pez cebra. Este método permite visualizar núcleos fluorescentes y células apoptóticas para investigar la homeostasis ósea.

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<meta charset="utf8"></head><body>Extracción de escamas de pez cebra para el cultivo y los estudios de biología ósea

<ol><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNusslein-Volhard%2C+C+%22Zebrafish%22">Zebrafish</a>. , Oxford University Press. New York. (2002).</li>
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<li>Brito, R. S., Canedo, A., Farias, D., Rocha, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+zebrafish+%28Danio+rerio%29+as+an+emerging+model+system+in+ecotoxicology+and+toxicology%3A+Historical+review%2C+recent+advances%2C+and+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Transgenic zebrafish (Danio rerio) as an emerging model system in ecotoxicology and toxicology: Historical review, recent advances, and trends.</a> Sci Total Environ. 848, 157665(2022).</li>
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<li>Pasqualetti, S., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblast+and+osteoclast+behavior+in+zebrafish+cultured+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoblast and osteoclast behavior in zebrafish cultured scales.</a> Cell Tissue Res. 350, 69-75 (2012).</li>
<li>Pasqualetti, S., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+scale+as+model+to+study+the+bone+mineralization+process%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Histol%22%5BJournal%5D)">The zebrafish scale as model to study the bone mineralization process.</a> J Mol Histol. 43, 589-595 (2012).</li>
<li>De Vrieze, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prednisolone+induces+osteoporosis-like+phenotype+in+regenerating+zebrafish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporos+Int%22%5BJournal%5D)">Prednisolone induces osteoporosis-like phenotype in regenerating zebrafish scales.</a> Osteoporos Int. 25, 567-578 (2014).</li>
<li>Iwasaki, M., Kuroda, J., Kawakami, K., Wada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+regulation+of+bone+morphogenesis+through+the+development+and+regeneration+of+osteoblasts+in+the+zebrafish+scale%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Epidermal regulation of bone morphogenesis through the development and regeneration of osteoblasts in the zebrafish scale.</a> Dev Biol. 437 (2), 105-119 (2018).</li>
<li>Aman, A. J., Fulbright, A. N., Parichy, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt%2F%CE%B2-catenin+regulates+an+ancient+signaling+network+during+zebrafish+scale+development%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Wnt/β-catenin regulates an ancient signaling network during zebrafish scale development.</a> Elife. 7, e37001(2018).</li>
<li>Carnovali, M., Luzi, L., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+hyperglycemia+affects+bone+metabolism+in+adult+zebrafish+scale+model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr%22%5BJournal%5D)">Chronic hyperglycemia affects bone metabolism in adult zebrafish scale model.</a> Endocr. 54, 808-817 (2016).</li>
<li>Burns, A. R., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scales+of+the+zebrafish%3A+Host-microbiota+interactions+from+proteins+to+populations%5BTitle%5D)+AND+%22COMICR%22%5BJournal%5D)">The scales of the zebrafish: Host-microbiota interactions from proteins to populations.</a> COMICR. 38, 137-141 (2017).</li>
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<li>Ighalo, J. O., Eletta, O. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+biosorption+of+pollutants+by+fish+scales%3A+A+mini-review%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Eng+Commun%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the biosorption of pollutants by fish scales: A mini-review.</a> Chem Eng Commun. 208 (9), 1301-1312 (2021).</li>
<li>Eletta, O. A. A., Ighalo, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+fish+scales+as+a+source+of+biosorbent+for+the+removal+of+pollutants+from+industrial+effluents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Res+Inf+Civ+Eng%22%5BJournal%5D)">A review of fish scales as a source of biosorbent for the removal of pollutants from industrial effluents.</a> J Res Inf Civ Eng. 16 (1), 2479-2510 (2019).</li>
<li>Hill, A. J., Teraoka, H., Heideman, W., Peterson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+vertebrate+for+investigating+chemical+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model vertebrate for investigating chemical toxicity.</a> Toxicol. Sci. 86 (1), 6-19 (2005).</li>
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<li>Hutchinson, J. J., Trueman, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+isotope+analyses+of+collagen+in+fish+scales%3A+Limitations+set+by+scale+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">Stable isotope analyses of collagen in fish scales: Limitations set by scale architecture.</a> J Fish Biol. 69 (6), 1874-1880 (2006).</li>
<li>Kumari, S., Rath, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+and+characterization+of+chitin+and+chitosan+from+%28Labeo+rohit%29+fish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Procedia+Mater+Sci%22%5BJournal%5D)">Extraction and characterization of chitin and chitosan from (Labeo rohit) fish scales.</a> Procedia Mater Sci. 6, 482-489 (2014).</li>
<li>Stepnowski, P., Ólafsson, G., Helgason, H., Jastorff, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+study+on+chemical+and+physical+principles+of+astaxanthin+sorption+to+fish+scales+towards+applicability+in+fisheries+waste+management%5BTitle%5D)+AND+%22Aquac%22%5BJournal%5D)">Preliminary study on chemical and physical principles of astaxanthin sorption to fish scales towards applicability in fisheries waste management.</a> Aquac. 232 (1-4), 293-303 (2004).</li>
<li>Ghods, S., Murcia, S., Ossa, E. A., Arola, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designed+for+resistance+to+puncture%3A+The+dynamic+response+of+fish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mech+Behav+Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">Designed for resistance to puncture: The dynamic response of fish scales.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 90, 451-459 (2019).</li>
<li>Yang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+Arapaima+gigas+fish+scales%3A+Structure+and+mechanical+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Protective role of Arapaima gigas fish scales: Structure and mechanical behavior.</a> Acta Biomater. 10 (8), 3599-3614 (2014).</li>
<li>Zhu, D., Zhang, C., Liu, P., Jawad, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+morphology%2C+structures+and+mechanical+properties+of+teleost+fish+scales+collected+from+New+Zealand%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bionic+Eng%22%5BJournal%5D)">Comparison of the morphology, structures and mechanical properties of teleost fish scales collected from New Zealand.</a> J. Bionic Eng. 16, 328-336 (2019).</li>
<li>Witzmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+histological+changes+of+dermal+scales+during+the+fish-to-tetrapod+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Zool%22%5BJournal%5D)">Morphological and histological changes of dermal scales during the fish-to-tetrapod transition.</a> Acta Zool. 92 (3), 281-302 (2011).</li>
<li>Ibañez, A. L., Cowx, I. G., O'Higgins, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+morphometric+analysis+of+fish+scales+for+identifying+genera%2C+species%2C+and+local+populations+within+the+Mugilidae%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Fish+Aquat+Sci%22%5BJournal%5D)">Geometric morphometric analysis of fish scales for identifying genera, species, and local populations within the Mugilidae.</a> Can J Fish Aquat Sci. 64 (8), 1091-1100 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubos de 0,2 mL</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl&nbsp;</td><td>EMD</td><td>HX0603-4</td><td>Para la estabilización del pH y la preparación de PRS</td></tr><tr><td>Corredera cóncava</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vectashield</td><td>H-1200</td><td>Para la visualización de núcleos celulares</td></tr><tr><td>Sal de diazonio (Fast Blue B)</td><td>Sigma</td><td>D9805</td><td>Para solución de sustrato AP</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en polvo&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>D5523</td><td>Para medios de cultivo a escala&nbsp;</td></tr><tr><td>3-aminobenzoato de etilo metanosulfonato (MS222)&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>E10521</td><td>Para la preparación de suero fetal bovino MS222 al 0,1</td></tr><tr><td>%&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F4135</td><td>Para medios de cultivo a escala&nbsp;</td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial&nbsp;</td><td>Pescador&nbsp;</td><td>A38 212</td><td>Para tampón de acetato</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>VWR</td><td>BDH1172-4LP</td><td>Para glicerol al 80% - básculas de almacenamiento</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>ThermoFisher&nbsp;</td><td>15630106</td><td>Para los medios de cultivo a escala&nbsp;</td></tr><tr><td>Placa calefactora</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P217-10</td><td>Para la preparación de PBS</td></tr><tr><td>Lysotracker</td><td>ThermoFisher</td><td>L7528</td><td>Para la visualización de lisosomas&nbsp;</td></tr><tr><td>Ácido maleico</td><td>Sigma</td><td>M0375</td><td>Para tampón Tris-Maleato&nbsp;</td></tr><tr><td>Micropipeta</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td>N,N-dimetilformamida</tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>319937</td><td>Para solución de sustrato AP</td></tr><tr><td>N,N-dimetilformamida&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>319937</td><td>para solución de sustrato enzimático</td></tr><tr><td>Na2HPO4&nbsp;</td><td>EMD</td><td>SX0720-1</td><td>Para la preparación de PBS</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S9888</td><td>Para la preparación de PBS</td></tr><tr><td>NaNO2</td><td>Sigma</td><td>S-2252</td><td>para 4% NaNO2</td></tr><tr><td>NaOH&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S5881</td><td>Para la preparación de 4% PFA</td></tr><tr><td>NaOH&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S5881</td><td>Para la fijación de incrustaciones y la estabilización del pH</td></tr><tr><td>Napthol-AS-TR-fosfato</td><td>Sigma</td><td>N6125</td><td>Para la solución de sustrato AP</td></tr><tr><td>Napthol-AS-TR-fosfato&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N6125</td><td>para solución de sustrato enzimático</td></tr><tr><td>clorhidrato de pararosanilina &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P3750</td><td>para PRS</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina 5000 unidades de penicilina y 5 mg de estreptomicina/ml</td><td>ThermoFisher&nbsp;</td><td>15140122</td><td>Para los medios de cultivo a escala&nbsp;</td></tr><tr><td>Equipo de protección personal (EPP): guantes de nitrilo desechables, gafas de seguridad/gafas antisalpicaduras y bata de laboratorio.</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>PFA&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P6148</td><td>Para la fijación de incrustaciones</td></tr><tr><td>Acetato de sodio &nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S2889</td><td>Para tampón de acetato</td></tr><tr><td>Microscopio compuesto estándar</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Placa de agitación</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tartárico</td><td>Sigma</td><td>T6521</td><td>Para tampón Tartrato</td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Roche</td><td>03 118 142 001</td><td>Para tampón Tris-Maleate&nbsp;</td></tr></tbody></table>

técnica de cultivo in vitro para el estudio de la dinámica celular en escamas de pez cebra

In Vitro Culturing Technique for Studying Cellular Dynamics in Zebrafish Scales

Recientemente, este protocolo de cultivo a escala se utilizó para estudiar la homeostasis ósea11. Las escamas pueden sobrevivir en el medio de cultivo durante al menos 2 días. Se analizó el número de células apoptóticas en cada día de cultivo, hasta un máximo de tres días, mediante el recuento de las células marcadas. Estos resultados mostraron que las células apoptóticas aumentaron significativamente en el tercer día de cultivo, lo que indica que el tiempo de cultivo debe limitarse a dos días uti...

Técnica de cultivo in vitro para el estudio de la dinámica celular en escamas de pez cebra

Zebrafish scales offer a variety of advantages for use in standard laboratories for teaching and research purposes. Scales are easily collected without ...

in-vitro-culturing-technique-for-studying-cellular-dynamics-zebrafish

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Somitogenesis es un proceso de desarrollo rítmico que espacialmente los patrones de los ejes corporales de los embriones de vertebrados. Anteriormente, hemos desarrollado líneas de pez cebra transgénico que utilizan los reporteros fluorescentes para observar los genes cíclicos que impulsan este proceso. En este sentido, la cultura dispersamos las células de estas líneas y la imagen de sus oscilaciones en el tiempo en vitro.

Generación de Dispersed presomitic mesodermo Cultivos Celulares for Imaging del pez cebra Segmentación del Reloj en células individuales

Queratocitos de pez cebra migran en láminas de células a partir de explantes y proporcionan un modelo in vitro para el estudio de los mecanismos de migración celular colectiva en el contexto de la cicatrización de la herida epitelial. Estos protocolos detalle una forma efectiva para establecer cultivos de explantes primarios para su uso en ensayos de migración celular colectivos.

Pez cebra queratocitos explantes para estudiar la migración celular colectiva y reepitelización en Curación de Heridas cutáneas

Presentamos un protocolo eficiente y fácil de usar para la preparación de cultivos celulares primarios de células de embriones de pez cebra para transfección celular directo imágenes así como un protocolo para preparar células primarias del cerebro del pez cebra adulto.

Cultura y transfección de células primarias de pez cebra

Aquí, presentamos un protocolo de cultivo 3D efectivo, fácil y rápido para la formación de esferoides de dos líneas celulares de pez cebra (Danio rerio): ZEM2S (embrión) y ZFL (hepatocito normal).

Un método de cultivo 3D de esferoides de líneas celulares embrionarias y hepáticas de pez cebra

Este protocolo describe la recolección y visualización de las escamas elasmoides del pez cebra durante la regeneración in vivo . Además, se presenta el cultivo ex vivo de estas escamas hasta 7 días después de la cosecha.

Regeneración de escamas de pez cebra en cultivo de escamas en su totalidad y ex vivo

En este estudio, describimos un método sencillo para realizar el análisis de Evans Blue Dye (EBD) en larvas de pez cebra.  Esta técnica es una herramienta poderosa para la caracterización de la integridad del músculo esquelético y la delineación de modelos de distrofia muscular de pez cebra, y es un método valioso para el desarrollo de nuevas terapias.

Análisis de pez cebra larvas esquelético Integridad del músculo con el colorante azul de Evans

Aquí, presentamos un protocolo para utilizar mapas de destino y trazadores de linaje para dirigir inyecciones en blastómeros individuales que dan lugar al riñón de embriones de Xenopus laevis.

Técnica de microinyección a Target a los países en desarrollo<em&gt; Xenopus</em&gt; riñón

La mitosis es crítica para todo organismo vivo y los defectos a menudo conducen al cáncer y trastornos del desarrollo. Utilizando este protocolo de imagen y el pez cebra como sistema modelo, los investigadores pueden visualizar la mitosis en un organismo vertebrado vivo y la multitud de defectos que surgen cuando los procesos mitóticos son defectuosos.

La observación de la división mitótica y dinámica en un embrión de pez cebra en vivo

Los protocolos descritos aquí permiten el estudio de las propiedades eléctricas de las células excitables en las condiciones fisiológicas más no invasivas mediante el empleo de embriones de pez cebra en un sistema in vivo junto con un indicador de voltaje genéticamente codificado (GEVI) basado en la transferencia de energía por resonancia fluorescente (FRET) expresado selectivamente en el tipo de célula de interés.

Potencial de membrana de la neurona motora de Biosensing en los embriones vivos de pez cebra

Este trabajo presenta un nuevo modelo in vivo de lesión renal segmentaria utilizando el pez cebra transgénico GFP de riñón. El modelo permite la inducción de la ablación específica de las células epiteliales del riñón para mostrar los mecanismos celulares de la lesión nefrona y la reparación.

Enfoque preciso de la ablación celular para modelar lesiones renales agudas en el desarrollo de pez cebra

Aprende una técnica de cultivo in vitro para estudiar la dinámica celular en escamas de pez cebra. Este método permite visualizar núcleos fluorescentes y células apoptóticas para investigar la homeostasis ósea.

Técnica de cultivo in vitro para el estudio de la dinámica celular en escamas de pez cebra

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