Name: Toma de muestras de sangre y medición hormonal para determinar la etapa del ciclo ovárico en titíes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: Aprenda a realizar muestreo sanguíneo y medición hormonal para determinar la etapa del ciclo ovárico en titíes. Este protocolo mejora el acceso venoso y permite predecir la ovulación con mayor precisión en primates.

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<meta charset="utf8"></head><body>Evaluación del ciclo ovárico en titíes mediante extracción de sangre y análisis hormonal

<ol><li>Kholkute, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+progesterone+levels+throughout+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Primates%22%5BJournal%5D)">Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> Primates. 25 (1), 123-126 (1984).</li>
<li>Harding, R. D., Hulme, M. J., Lunn, S. F., Henderson, C., Aitken, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+progesterone+levels+throughout+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Med Primatol. 11 (1), 43-51 (1982).</li>
<li>Gilchrist, R. B., Wicherek, M., Heistermann, M., Nayudu, P. L., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+follicle-stimulating+hormone+and+follicle+populations+during+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Changes in follicle-stimulating hormone and follicle populations during the ovarian cycle of the common marmoset.</a> Biol Reprod. 64 (1), 127-135 (2001).</li>
<li>Gromoll, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+subclass+of+the+luteinizing+hormone%2Fchorionic+gonadotropin+receptor+lacking+exon+10+messenger+RNA+in+the+New+World+monkey+%28Platyrrhini%29+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">A new subclass of the luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor lacking exon 10 messenger RNA in the New World monkey (Platyrrhini) lineage.</a> Biol Reprod. 69 (1), 75-80 (2003).</li>
<li>Müller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chorionic+gonadotrophin+beta+subunit+mRNA+but+not+luteinising+hormone+beta+subunit+mRNA+is+expressed+in+the+pituitary+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Chorionic gonadotrophin beta subunit mRNA but not luteinising hormone beta subunit mRNA is expressed in the pituitary of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Mol Endocrinol. 32 (1), 115-128 (2004).</li>
<li>Pacchiarotti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+stimulation+protocol+in+IVF%3A+an+up-to-date+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Ovarian stimulation protocol in IVF: an up-to-date review of the literature.</a> Curr Pharm Biotechnol. 17 (4), 303-315 (2016).</li>
<li>Ezcurra, D., Humaidan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+luteinising+hormone+and+human+chorionic+gonadotropin+when+used+in+assisted+reproductive+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">A review of luteinising hormone and human chorionic gonadotropin when used in assisted reproductive technology.</a> Reprod Biol Endocrinol. 12, 95(2014).</li>
<li>Lopez-Gatius, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+response+to+prostaglandin+F%282alpha%29+in+lactating+dairy+cows%3A+A+clinical+update%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Ovarian response to prostaglandin F(2alpha) in lactating dairy cows: A clinical update.</a> J Reprod Dev. 68 (2), 104-109 (2022).</li>
<li>Marini, R. P., Wachtman, L. M., Tardif, S. D., Mansfield, K., Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarini%2C+RP+%22The+Common+Marmoset+in+Captivity+and+Biomedical+Research%22">The Common Marmoset in Captivity and Biomedical Research</a>. , Elsevier Science. (2018).</li>
<li>Schultz-Darken, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sample+collection+and+restraint+techniques+used+for+common+marmosets+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Sample collection and restraint techniques used for common marmosets (Callithrix jacchus).</a> Comp Med. 53 (4), 360-363 (2003).</li>
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<li>Harlow, C. R., Hearn, J. P., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovulation+in+the+marmoset+monkey%3A+endocrinology%2C+prediction+and+detection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Ovulation in the marmoset monkey: endocrinology, prediction and detection.</a> J Endocrinol. 103 (1), 17-24 (1984).</li>
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<li>Summers, P. M., Wennink, C. J., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloprostenol-induced+luteolysis+in+the+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Cloprostenol-induced luteolysis in the marmoset monkey (Callithrix jacchus).</a> J Reprod Fertil. 73 (1), 133-138 (1985).</li>
<li>Takahashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+healthy+offspring+following+ICSI+in+in+vitro-matured+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Birth of healthy offspring following ICSI in in vitro-matured common marmoset (Callithrix jacchus) oocytes.</a> PLoS One. 9 (4), e95560(2014).</li>
<li>Tomioka, I., Takahashi, T., Shimada, A., Yoshioka, K., Sasaki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29+offspring+derived+from+in+vitro-matured+oocytes+in+chemically+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Birth of common marmoset (Callithrix jacchus) offspring derived from in vitro-matured oocytes in chemically defined medium.</a> Theriogenology. 78 (7), 1487-1493 (2012).</li>
<li>Abe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+marmoset+genome+engineering+by+autologous+embryo+transfer+and+CRISPR%2FCas9+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient marmoset genome engineering by autologous embryo transfer and CRISPR/Cas9 technology.</a> Sci Rep. 11 (1), 20234(2021).</li>
<li>Summers, P. M., Shephard, A. M., Taylor, C. T., Hearn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+cryopreservation+and+transfer+on+embryonic+development+in+the+common+marmoset+monkey%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">The effects of cryopreservation and transfer on embryonic development in the common marmoset monkey, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 79 (1), 241-250 (1987).</li>
<li>Thomson, J. A., Kalishman, J., Hearn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsurgical+uterine+stage+preimplantation+embryo+collection+from+the+common+marmoset%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Nonsurgical uterine stage preimplantation embryo collection from the common marmoset.</a> J Med Primatol. 23 (6), 333-336 (1994).</li>
<li>Hanazawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+transabdominal+collection+of+preimplantation+embryos+from+the+common+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive transabdominal collection of preimplantation embryos from the common marmoset monkey (Callithrix jacchus).</a> Theriogenology. 78 (4), 811-816 (2012).</li>
<li>Ishibashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+embryo+transfer+in+the+common+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29+with+a+reduced+transfer+volume%3A+a+non-surgical+approach+with+cryopreserved+late-stage+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Efficient embryo transfer in the common marmoset monkey (Callithrix jacchus) with a reduced transfer volume: a non-surgical approach with cryopreserved late-stage embryos.</a> Biol Reprod. 88 (5), 115(2013).</li>
<li>Kishimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+novel+common+marmoset+embryonic+stem+cell+lines+under+various+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Establishment of novel common marmoset embryonic stem cell lines under various conditions.</a> Stem Cell Res. 53, 102252(2021).</li>
<li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood%2C+including+routes+and+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li>
<li>Daskalaki, M., Drummer, C., Behr, R., Heistermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+alfaxalone+for+short-term+anesthesia+can+confound+serum+progesterone+measurements+in+the+common+marmoset%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Primate+Biol%22%5BJournal%5D)">The use of alfaxalone for short-term anesthesia can confound serum progesterone measurements in the common marmoset: a case report.</a> Primate Biol. 9 (2), 23-28 (2022).</li>
<li>Hodges, J. K., Cottingham, P. G., Summers, P. M., Liang, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+ovulation+in+the+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29+with+human+chorionic+gonadotropin+following+prostaglandin-induced+luteal+regression%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Controlled ovulation in the marmoset monkey (Callithrix jacchus) with human chorionic gonadotropin following prostaglandin-induced luteal regression.</a> Fertil Steril. 48 (2), 299-305 (1987).</li>
<li>Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extension+of+reproductive+suppression+by+pheromonal+cues+in+subordinate+female+marmoset+monkeys%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Extension of reproductive suppression by pheromonal cues in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 90 (2), 411-418 (1990).</li>
<li>Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+cues+and+the+suppression+of+reproduction+in+subordinate+female+marmoset+monkeys%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Sensory cues and the suppression of reproduction in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 97 (1), 301-310 (1993).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>AIA-360</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0019945</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>AIA-PACK DILUYENTE</td><td>CONCENTRADO Tosoh Corporation</td><td>0020956</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>AIA-PACK SUBSTRATE SET II</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0020968</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>AIA-PACK WASH CONCENTRATE</td><td>Tosoh Corporation 0020955</td><td></td><td>Medición de hormonas (P4/ E2)</td></tr><tr><td>CMS-1</td><td>CLEA Japón</td><td></td><td>Alimento para tití</td></tr><tr><td>Estrumate</td><td>MSD Salud Animal</td><td></td><td>Análogo PGF2alpha (cloprostenol)</td></tr><tr><td>Gonal-f Inyección subcutánea 150</td><td>Merck Biopharma Co., Ltd.</td><td></td><td>FSH</td></tr><tr><td>Gonatropina para inyección intramuscular 1000</td><td>ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>872413</td><td></td></tr><tr><td>solución inyectable de heparina sódica hCG 5.000 unidades/5 mL</td><td>Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>224122458</td><td>Kit</td></tr><tr><td>de prueba inmunocromatográfica de extracción de sangre para la detección de gonadotropina coriónica de tití común (doble comprobador)</td><td>CLEA Japan, Inc.</td><td></td><td>Determinación del nivel</td></tr><tr><td>de CG Iluminación de microscopio de doble brazo de perfil bajo LPF-SD</td><td>SHIOKAZE GIKEN</td><td></td><td>Lámpara de escritorio para la extracción de sangre</td></tr><tr><td>Dispositivo de retención de sangre tití</td><td>JIC Japón</td><td>JM-1006</td><td>Extracción de sangre http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html correo electrónico: vi@jic-japan.jp</td></tr><tr><td>Metacam 0.05%</td><td>Boehringer Ingelheim Animal Health Japan Co., Ltd.</td><td></td><td>Vaso de muestra para el tratamiento del hematoma</td></tr><tr><td>, 3 mL, PS, para Tosoh 360 y AIA-600 II, 1000/bolsa</td><td>Globe Scientific</td><td>110913</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025224</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2 CALIBRADOR Tosoh</td><td>Corporation</td><td>0025324</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2 SAMPLE DILUTING SOLUTION</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025524</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII</td><td>Tosoh Corporation</td><td></td><td>0025240 Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII CALIBRADOR</td><td>Tosoh Corporation</td><td></td><td>0025340 Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII SAMPLE DILUTING SOLUTION</td><td>Tosoh Corporation</td><td>&nbsp; 0025540</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr><tr><td>Jeringa con aguja de 25 G (0,50 x 25 mm)</td><td>TERUMO</td><td>SS-01T2525</td><td>Extracción de sangre</td></tr><tr><td>Tensolvet 5.000 I.E. gel.</td><td>Dechra Pharmaceuticals</td><td>14033492</td><td>Tratamiento del hematoma</td></tr><tr><td>TOSOH MULTI-CONTROL SET Tosoh</td><td>Corporation</td><td>0015965</td><td>Medición de hormonas (P4/E2)</td></tr></tbody></table>

toma de muestras de sangre y medición hormonal para determinar la etapa del ciclo ovárico en titíes

Blood Sampling and Hormone Measurement for Determining the Stage in the Ovarian Cycle in Marmosets

Los detalles relacionados con los animales utilizados en este estudio se enumeran en la Tabla 1.
Análisis anatómicos de la vena femoral Se realizaron análisis anatómicos de la vena femoral con un tití común macho de 2 años de edad (I 7713M) sometido a eutanasia. Las venas y arterias femorales se encuentran en el triángulo femoral. El triángulo femoral se forma en los límites entre la pared abdominal y los músculos del muslo (Figura 1B-D). En la base del muslo, una vena grande atraviesa el centro del triángulo invertido y una arteria corre en paralelo fuera de la vena. En la región inferior, las venas y las arterias se vuelven más delgadas y se superponen, con las arterias colocadas encima de las venas (Figura 1D).
Para la toma de muestras de sangre, se debe apuntar a la vena porque una lesión arterial puede causar hematoma en la arteria femoral, que puede conducir a un shock cardiovascular cuando la hemorragia es grave13. Aunque se puede extraer sangre de cualquier parte de la vena en el triángulo y su área distal, se recomienda la venopunción del sitio proximal del triángulo femoral debido al gran tamaño de la vena y su aparente poca superposición con la arteria. Además, la vena en el sitio proximal es superficial, lo que permite una fácil localización con una aguja. Debido a que pulsa, la arteria en el triángulo femoral a veces se identifica visualmente o por palpación, y la vena corre justo medial a ella. Por lo tanto, la observación de la pulsación arterial ayuda a predecir la ubicación de la vena.
Además, generalmente se observa una coloración azul indicativa de la vena debajo de la piel en la parte superior del triángulo (Figura 1B, C). Sin embargo, los ganglios linfáticos del triángulo a menudo se encuentran cerca de la vena y muestran un color azul oscuro, por lo que su apariencia es similar. Afortunadamente, se pueden distinguir por su movilidad: la vena es estacionaria y los ganglios linfáticos son móviles. Así, la pulsación de la arteria y el color azul de la vena son dos pistas importantes que se utilizan para localizar la vena, aunque puede ser necesario rasurar el vello para visualizarlas.
Determinación de la etapa del ciclo ovárico Se monitorizaron los niveles de P4 y E2 en seis titíes hembra (de 1 a 3 años de edad) para investigar la duración de las fases folicular y lútea. Los resultados mostraron una duración promedio de 11,58 días (n = 6 de cuatro titíes) y 16,8 días (n = 5 de tres titíes) para las fases folicular y lútea, respectivamente (Tabla 2). A continuación, se describe en detalle la dinámica P4 y E2 de uno (I6751F, de 3 años) de los seis titíes. Las muestras de sangre y las mediciones hormonales en este animal se realizaron cada pocos días durante 38 días (Tabla 3).
Fase lútea (días 1-10) El día de inicio de la medición se estableció como el día 1. Según el nivel de P4 (21 ng/mL), es probable que el animal se encontrara en la fase lútea. Se observó un nivel alto de P4 de los días 1 a 10 (≥21 ng/mL), lo que sugiere la fase lútea. El día 12, bajó bruscamente a 4 ng/mL. Esta disminución significativa indicó la transición de la fase lútea a la folicular. Una disminución en el nivel de E2 desde el día 10 (241 ng/mL) hasta el día 12 (189 ng/mL) también apoyó esta transición.
Fase folicular (días 12-22) Después de la transición a la fase folicular, el nivel de P4 permaneció bajo (4-6 ng/mL) hasta el día 19 y luego aumentó ligeramente del día 19 al 24 (día 19, 6 ng/mL; día 22, 8 ng/mL; día 24, 9 ng/mL). Por el contrario, el nivel de E2 aumentó significativamente desde el día 19 (94 ng/mL) hasta el 22 (322 ng/mL) y luego disminuyó desde el día 22 hasta el día 24 (158 ng/mL). Sobre la base del aumento de P4 y la disminución de los niveles de E2, se predijo que la ovulación ocurrió entre los días 22 y 24, pasando de la fase folicular a la lútea.
Fase lútea (días 24-36) Después de la ovulación, el nivel de P4 se mantuvo alto hasta el día 36 y luego bajó a 3 ng/mL el día 38. Por lo tanto, es probable que la transición de la fase lútea a la folicular ocurriera entre los días 36-38. De acuerdo con esta transición, el nivel de E2 disminuyó durante este período (día 36, 2517 ng/mL; día 38, 73 ng/mL).
Predicción y determinación del momento de la ovulación
Para examinar la relación entre el nivel de CG en orina y la fecha de ovulación, se prepararon siete titíes (Nº 1-7). Se inyectó cloprostenol para restablecer el ciclo ovulatorio (día 0). A continuación, se realizó una monitorización de los niveles de P4/E2 en sangre y de CG en orina a partir del día 7. La orina se recogió inmediatamente después del encendido. La toma de muestras de sangre se realizó fundamentalmente por la mañana. Se asumió que la ovulación ocurre cuando el nivel de E2 disminuyó en gran medida en comparación con el día anterior, según lo informado17. Ese día se observó efectivamente la rotura folicular en la superficie de los ovarios, y la presencia de cigotos/ovocitos en los oviductos (Tabla 4).
El GC se detectó por primera vez durante los días 7 a 11 (día 7, N = 1; día 8, N = 2; día 9, N = 1; día 10, N = 2; día 11, N = 1) (Tabla 4). La gran caída en los niveles de E2 (indicación de la ovulación) se observó 0-3 días después de la primera señal de GC. La duración desde la primera detección de CG hasta la disminución de E2 pareció ser grande cuando la primera detección de CG fue anterior (Figura 3A). Por ejemplo, un animal (Nº 1) mostró una caída en la señal E2 3 días después de la primera detección de CG el día 7 (Tabla 4). Por el contrario, la co-ocurrencia de la primera detección de CG y la caída de la señal E2 se observó en un animal (Nº 2) el día 10. Así, aunque la primera detección de GC y la ovulación se observaron el mismo día en uno de los cinco animales, la ovulación se produjo a los pocos días de la primera detección de CG.
El kit de prueba inmunocromatográfica para tití CG está diseñado para utilizar orina para las pruebas. El examen del nivel de GC suele acompañar a la determinación de los niveles de P4/E2 utilizando plasma sanguíneo. Será útil si se puede usar plasma sanguíneo, en lugar de orina, para la prueba de GC. Para probar esto, se examinó el plasma sanguíneo que quedó después de la medición del nivel de P4/E2 en los experimentos anteriores. Se recolectó plasma sanguíneo y orina de los cuatro animales en cualquiera de los días de los experimentos anteriores (los días de examen se indicaron con asteriscos dobles [**] en la Tabla 4). Utilizando orina, dos de los cuatro animales mostraron resultados positivos (puntuaciones 5 y 3), y los otros dos mostraron resultados negativos (puntuación 1). El plasma sanguíneo mostró esencialmente los mismos resultados que la orina (Figura 3B). La señal más fuerte se obtuvo mediante el uso de plasma sanguíneo. Por lo tanto, cuando se usa plasma sanguíneo, el juicio debe hacerse antes de los 10 minutos, que se establece para la orina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig01.jpg"> Figura 1: Extracción de sangre de titíes. (A) Se utiliza un retenedor para la recolección de sangre. (B) Parte superior del muslo de tití. (C) Triángulo femoral y vasos sanguíneos. La arteria femoral en el triángulo a menudo es visible y muestra pulsación. El color azul de la vena femoral a veces es visible en el área proximal del triángulo (indicado como el sitio de la flebotomía). Los ganglios linfáticos también muestran un color azul. Sin embargo, los ganglios linfáticos son móviles, ya que los ganglios linfáticos se adhieren a la piel. (D) Vista anatómica del muslo del animal sacrificado. Se indican la arteria, la vena y el sitio de la flebotomía. El mismo animal se muestra en B-D. (E) Extracción de sangre usando un retenedor. Se muestra la posición de sujeción de las patas del tití y la sangre que se extrae. (F) Recolección de orina de un tití. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig02.jpg"> Figura 2: Patrones típicos de los niveles de P4, E2 y CG durante el ciclo ovárico en titíes. Se indican los puntos temporales de las inyecciones de FSH, hCG y PGF2α. Las líneas discontinuas muestran el patrón hormonal esperado después de la inyección de PGF2α. Abreviaturas: P4 = progesterona; E2 = estradiol; CG = gonadotropina coriónica; FSH = hormona estimulante del folículo; hCG = gonadotropina coriónica humana; PGF2α = prostaglandina F2α. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig03.jpg"> Figura 3: Determinación del nivel de GC para predecir la aparición de la ovulación. (A) La posible relación entre el primer día de detección de CG (puntuación &gt; 1) y la duración hasta la ovulación (caída E2). (B) El plasma sanguíneo se puede utilizar para pruebas inmunocromatográficas de CG. Un resultado representativo de cada puntuación (top). La puntuación se determinó 10 min después de la carga de la muestra. La puntuación 2 no representa ninguna banda en un plazo de 5 minutos, sino la aparición de una banda en un plazo de 10 minutos. La extracción de sangre se realizó poco después de la recolección de orina. Se examinaron cuatro titíes (Nº 1, 2, 3 y 5 en la Tabla S4). Las muestras utilizadas aquí se indican como asteriscos dobles en la Tabla 4. El plasma sanguíneo se diluyó al 50% mediante tampón de dilución utilizado para la medición de E2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla 1: Animales utilizados en este estudio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_Table%201v2.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 2: Duración de las fases folicular y lútea. La fase se determinó a partir del nivel de P4 (fase folicular P4 ≤ 8, fase lútea P4 &gt; 8). Cuando se observó un cambio de fase entre las mediciones, se determinó que el punto medio entre las fechas de medición era el punto de cambio. La duración entre los dos puntos de cambio se consideró como fases foliculares o lúteas. Para garantizar la medición de la duración de una sola fase, no se utilizaron para los análisis los datos con un intervalo largo (≥7 días) o dos veces de intervalos de ≥6 días en la misma fase, incluso cuando abarcaban las dos fases. Solo cuando se realizaron dos mediciones en la misma fase, se emplearon los datos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_240320_Table2_rev.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 3: Resultados de las mediciones de P4 y E2 durante 38 días en un tití.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_240320_Table3_rev.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 4: Determinación y predicción de días ovulatorios. Se consideró que los rastros de ovulación estaban presentes si se observaban sitios de sangrado o rupturas en los ovarios. Ovocito/cigoto indica las etapas del ovocito/cigoto obtenido de los oviductos el día de la caída de E2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_Table%204_revv2.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>

Toma de muestras de sangre y medición hormonal para determinar la etapa del ciclo ovárico en titíes

Common marmosets are small New World monkeys. Since many of their biological mechanisms are similar to those of humans, marmosets are potentially useful ...

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Investigación

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Biology

Biología

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Aprenda a realizar muestreo sanguíneo y medición hormonal para determinar la etapa del ciclo ovárico en titíes. Este protocolo mejora el acceso venoso y permite predecir la ovulación con mayor precisión en primates.

Toma de muestras de sangre y medición hormonal para determinar la etapa del ciclo ovárico en titíes

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