Name: Diagnóstico postmortem de la rabia en animales mediante el ensayo de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa LN34 en tiempo real multiplexado actualizado (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Aprende el protocolo LN34 RT-PCR multiplex para diagnóstico postmortem de rabia en animales. Este método mejora la precisión diagnóstica y apoya los esfuerzos de prevención de la rabia con controles de calidad integrados.

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<ol><li>Meechan, P. J., Potts, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeechan%2C+PJ+%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. (2020).</li>
<li>Terrestrial Manual 2023. , World Organization for Animal Health. At
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<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1, World Health Organization. At
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<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 2, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1">https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1</a> (2019).</li>
<li>Genevie, R., et al. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , At
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<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+Expert+Consultation+on+Rabies%3A+Third+Report%22">WHO Expert Consultation on Rabies: Third Report</a>. , World Health Organization. Geneva. (2018).</li>
<li>Gigante, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-site+evaluation+of+the+LN34+pan-lyssavirus+real-time+RT-PCR+assay+for+postmortem+rabies+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Multi-site evaluation of the LN34 pan-lyssavirus real-time RT-PCR assay for postmortem rabies diagnostics.</a> PLoS One. 13 (5), e0197074(2018).</li>
<li>Wadhwa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pan-Lyssavirus+Taqman+Real-Time+RT-PCR+assay+for+the+detection+of+highly+variable+rabies+virus+and+other+lyssaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">A Pan-Lyssavirus Taqman Real-Time RT-PCR assay for the detection of highly variable rabies virus and other lyssaviruses.</a> PLoS Negl Trop Dis. 11 (1), e0005258(2017).</li>
<li>Gigante, C. M., Wicker, V., Wilkins, K., Seiders, M., Zhao, H., Patel, P., Orciari, L., Condori, R. E., Dettinger, L., Yager, P., Xia, D., Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+pan-lyssavirus+LN34+assay+for+streamlined+rabies+diagnostics+by+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of pan-lyssavirus LN34 assay for streamlined rabies diagnostics by real-time RT-PCR.</a> Journal Virological Methods. , In press (2024).</li>
<li>Rao, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+modified+preexposure+prophylaxis+vaccination+schedule+to+prevent+human+rabies%3A+recommendations+of+the+advisory+committee+on+immunization+practices-United+States%2C+2022%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Use of a modified preexposure prophylaxis vaccination schedule to prevent human rabies: recommendations of the advisory committee on immunization practices-United States, 2022.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 71 (18), 619(2022).</li>
<li>Condori, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+LN34+Pan-Lyssavirus+Real-Time+RT-PCR+assay+for+rabies+diagnosis+and+rapid+genetic+typing+from+formalin-fixed+human+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Using the LN34 Pan-Lyssavirus Real-Time RT-PCR assay for rabies diagnosis and rapid genetic typing from formalin-fixed human brain tissue.</a> Viruses. 12 (1), 120(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7500 Rápido</td><td>Biosistemas Aplicados</td><td>N/A</td><td>No sustituyas sin validación</td></tr><tr><td>7500 Fast Dx&nbsp;</td><td>Biosistemas Aplicados</td><td>N/A</td><td>No sustituyas sin validación</td></tr><tr><td>ABI VIIA 7</td><td>Biosistemas Aplicados</td><td>N/A</td><td>No sustituyas sin validación</td></tr><tr><td>Kit RT-PCR de un paso AgPath-ID &nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific y nbsp;</td><td>AM1005</td><td>No sustituyas sin validación</td></tr><tr><td>Beadbug6</td><td>Benchmark Scientific</td><td>D1036</td><td></td></tr><tr><td>Direct-zol RNA MiniPrep kit &nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>R2052</td><td></td></tr><tr><td>Cuentas verdes MagNA Lyser&nbsp;</td><td>Roche</td><td>3358941001</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Eppendorf y Eppendorf;</td><td>5425 R</td><td></td></tr><tr><td>Placas de reacción ópticas de 96 pozos</td><td>ThermoFisher Scientific y nbsp;</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>Cubiertas adhesivas ópticas</td><td>ThermoFisher Scientific y nbsp;</td><td>4311971</td><td>Alternativa: gorras</td></tr><tr><td>Aplicador con punta de fibra de poliéster y muestras de basura de fibras;</td><td>Hisopo de aplicación con punta de fibra de poliéster BD BBL</td><td>220690</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6Flex</td><td>Biosistemas Aplicados</td><td>4485691</td><td>No sustituyas sin validación</td></tr><tr><td>Desinfectante de amonio cuaternario (1:256)</td><td>LYSOL</td><td>WBB56939</td><td>No sustituyas sin validación</td></tr><tr><td>RNase AWAY</td><td>ThermoFisher Scientific y nbsp;</td><td>7002PK</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>ThermoFisher Scientific y nbsp;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí de un solo uso, un bisturí con mecanismo de seguridad &nbsp;</td><td>Integra Miltex&nbsp;</td><td>4-510</td><td></td></tr><tr><td>Tubos estériles de microcentrífuga de polipropileno (1,5 mL), libres de nucleasas</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>Tubos microcentrífugas estériles de polipropileno (2 mL), libres de nucleasas</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.600</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de Trizol</td><td>ThermoFisher Scientific y nbsp;</td><td>15596026</td><td>No sustituyas sin validación</td></tr></tbody></table>

diagnóstico postmortem de la rabia en animales mediante el ensayo de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa ln34 en tiempo real multiplexado actualizado

Postmortem Diagnosis of Rabies in Animals by the Updated, Multiplexed LN34 Real-Time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Assay

Diagnóstico postmortem de la rabia en animales mediante el ensayo de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa LN34 en tiempo real multiplexado actualizado

Rabies is a fatal zoonotic disease caused by Lyssavirus rabies (RABV) and related negative strand RNA viruses from the Lyssavirus genus (family ...

postmortem-diagnosis-rabies-animals-updated-multiplexed-ln34-real

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

La prueba inmunohistoquímica rápida directa (DRIT) ofrece una alternativa reconocida de la Organización Mundial de Sanidad Animal y la Organización Mundial de la Salud (OIE/OMS) a la prueba de anticuerpos fluorescentes directos (DFA) para el diagnóstico de la rabia. Esta prueba permite aplicaciones basadas en el campo que se pueden realizar en aproximadamente 1 h sobre impresiones cerebrales utilizando microscopía de luz.

Vigilancia mejorada de la rabia mediante una prueba inmunohistoquímica rápida directa

Se ha desarrollado una reacción en cadena de la polimerasa de la transcripción inversa de pan-lyssavirus para detectar específicamente todos los lyssavirus conocidos. La validación utilizando muestras cerebrales de rabia de diferentes especies animales demostró que este método tiene una sensibilidad y especificidad equivalente a la prueba de anticuerpos fluorescentes estándar de oro y podría ser utilizado para el diagnóstico de la rabia de rutina.

Evaluación de una reacción en cadena de la polimerasa de la transcripción inversa anidada universal para la detección de Lyssaviruses

El objetivo de este protocolo es demostrar técnicas de necropsia seguras en animales pequeños y grandes para obtener muestras de tejido satisfactorias para pruebas de rabia.

Técnicas de Necropsia de Rabia en Animales Grandes y Pequeños

Este RT-PCR en tiempo real que utiliza tinte intercalador dsDNA es adecuado para diagnosticar infecciones por lissavirus. El método comienza con el ARN extraído de la rabia sospechada de muestras ante mortem o post mortem, detallando la preparación de mezclas maestras, la adición de ARN, la configuración de la máquina en tiempo real y la correcta interpretación de los resultados.

Pan-lyssavirus en tiempo real RT-PCR para diagnóstico de rabia

Presentamos un protocolo completo para el diagnóstico postmortem de la rabia animal en condiciones de campo utilizando una prueba de diagnóstico inmunocromatográfico rápido (RIDT), desde el muestreo de biopsia cerebral hasta la interpretación final. También describimos otras aplicaciones que utilizan el dispositivo para el análisis molecular y el genotipado viral.

Prueba de diagnóstico inmunocromatográfico rápido postmortem de campo para la configuración de recursos limitados con otras aplicaciones moleculares

Aquí, presentamos un protocolo de prueba de inmunohistoquímica para la detección del antígeno del virus de la rabia como una prueba diagnóstica alternativa para los tejidos fijos con formalina.

Prueba de inmunohistoquímica para la detección de antígenos de lisavirus en tejidos fijos de formalina

Este protocolo presenta un enfoque basado en qRT-PCR para determinar el número de copia genética de nucleoproteína (N) del virus de la rabia dentro de varias estructuras anatómicas cerebrales bovinas utilizando transcripción in vitro.

Cuantificación del virus de la rabia en varias estructuras cerebrales bovinas

El Solaris qPCR ensayos de expresión génica son nuevas pre-diseñados qPCR primer / sonda combinaciones diseñadas para simplificar el proceso de qPCR sin sacrificar la especificidad y la robustez de la prueba.

Cuantitativas PCR en tiempo real utilizando el Thermo Scientific Solaris qPCR ensayo

Cuantitativa en tiempo real PCR (QRT-PCR) es una herramienta eficaz para el diagnóstico de los niveles de mRNA en tejidos de insectos y diferentes etapas de desarrollo. En este informe se muestra el uso de QRT-PCR para determinar los niveles de ARNm en diferentes tejidos y estadios de desarrollo larvario de las especies de insectos invasores, el barrenador esmeralda del fresno.

Análisis de la expresión génica en el barrenador esmeralda del fresno ( Agrilus planipennis) Utilizando Real-PCR cuantitativa en tiempo

PCR se ha convertido en una técnica común en muchos laboratorios de biología molecular. Siempre que aquí hay una guía rápida de varios protocolos de PCR convencionales. Debido a que cada reacción es un experimento único, las condiciones óptimas requeridas para generar un producto variar. La comprensión de las variables en una reacción en gran medida mejorar la eficiencia de la solución de problemas, lo que aumenta la posibilidad de obtener el resultado deseado.

Reacción en cadena: Protocolo Básico Plus Estrategias de resolución de problemas y optimización

Aprende el protocolo LN34 RT-PCR multiplex para diagnóstico postmortem de rabia en animales. Este método mejora la precisión diagnóstica y apoya los esfuerzos de prevención de la rabia con controles de calidad integrados.

Diagnóstico postmortem de la rabia en animales mediante el ensayo de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa LN34 en tiempo real multiplexado actualizado (Video) | JoVE Journal

Diagnóstico postmortem de la rabia en animales mediante el ensayo de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa LN34 en tiempo real multiplexado actualizado

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