Name: Medición del contenido de carbono en macrófagos de las vías respiratorias expuestos a partículas que contienen carbono (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Aprende a medir el contenido de carbono en macrófagos de las vías respiratorias mediante esputo inducido. Este método no invasivo proporciona un biomarcador fiable para evaluar la exposición individual a partículas contaminantes.

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<meta charset="utf8"></head><body>Cuantificación de carbono en macrófagos pulmonares mediante análisis de esputo inducido

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Pajitas estériles de 3 mL</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>84202ES03</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific, EE. UU.</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol etílico absoluto</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LTD</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de cedro</td><td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., LTD</td><td>C805296</td><td></td></tr><tr><td>Tinción rápida solución</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>40748ES76</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Solebo Bio Co., LTD</td><td>D8220</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de fosfato Duchenne (DPBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific, EE. UU.</td><td>Cámara</td> de microscopio 14190144 <td></td></tr><tr><td></td><td>Olympus Corporation of Japan</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>Goma de árbol neutra</td><td>Solebo Bio Co., LTD</td><td>G8590</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de filtro de nylon 70um</td><td>BD Falcon Bioscience, EE. UU.</td><td>211755</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio óptico</td><td>Olympus Corporation de Japón</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenglicol</td><td>Grupo Sinopharm Reactivo químico Co. LTD</td><td>25322-68-3</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga</td><td>Thermo Fisher Scientific, EE. UU.</td><td>SL40R</td><td></td></tr><tr><td>Corredera viscosa</td><td>Jiangsu SHitAI EXPERIMENTAL Equipment Co. LTD</td><td></td><td></td>188105</tr></tbody></table>

medición del contenido de carbono en macrófagos de las vías respiratorias expuestos a partículas que contienen carbono

Measuring Carbon Content in Airway Macrophages Exposed to Carbon-Containing Particulate Matters

El esputo, conservado y procesado con la solución fijadora, mostró una morfología de macrófago intacta bajo un microscopio óptico durante el examen morfológico. Los macrófagos exhibían núcleos celulares claros, redondos o en forma de riñón, fácilmente teñibles. Después de la tinción, los núcleos celulares aparecieron de color púrpura azulado, mientras que el citoplasma era de color rosa claro o azul claro. El campo microscópico mostró impurezas mínimas, lo que facilitó la fácil identificación de las células. Dentro de las células, las partículas de carbono negro eran claramente visibles en pequeños agregados, lo que permitió el análisis cuantitativo de las partículas de carbono.
En la Figura 1 se presentan imágenes representativas de macrófagos de esputo, que muestran un número variable de partículas de carbono en diferentes células. Por ejemplo, la Figura 1A no muestra partículas de carbono, mientras que la Figura 1D exhibe la concentración más alta. Los valores de CCAM se midieron como 0,00%, 2,24%, 6,64% y 34,61% para los macrófagos (A-D), respectivamente. Durante el proceso de determinación de los parámetros CCAM, se llevó a cabo una evaluación cuantitativa del contenido de carbono en cada macrófago para mitigar los sesgos derivados de las variaciones en el tamaño de los macrófagos y la superposición de las partículas de carbono con los núcleos celulares. Se realizaron cálculos y análisis de CCAM para 50 macrófagos por sujeto de estudio, como se muestra en la Figura 2.
El estudio seleccionó a los empacadores de negro de humo (CBP) de una fábrica específica de negro de carbón acetileno como el grupo expuesto y reclutó a trabajadores de bombas de agua de plantas de agua locales, que no tenían exposición ocupacional aparente a factores dañinos, como el grupo de control (no CBP). Los resultados presentados en la Figura 2 indican un mayor CCAM en los trabajadores de empaque de negro de humo en comparación con el grupo de control.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig01.jpg"> 
Figura 1: Imagen microscópica óptica que muestra partículas de carbono dentro de los macrófagos de las vías respiratorias. El color negro en el citoplasma representa las partículas de carbono. Los paneles (A-D) muestran imágenes representativas de macrófagos de las vías respiratorias, cada uno de los cuales exhibe diferentes niveles de CCAM. Los valores de CCAM para los macrófagos en (A-D) fueron 0,00%, 2,24%, 6,64% y 34,61%, respectivamente. El nivel más alto de CCAM se observó en (D). Barras de escala: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig02.jpg"> 
Figura 2: Niveles cuantitativos de CCAM en la población. Se seleccionaron aleatoriamente cincuenta macrófagos citoplasmáticamente intactos y bien teñidos para su análisis y cuantificación por sujeto de estudio. Los datos se analizaron mediante la prueba t de Student: *P &lt; 0,05. CBP: empacadores de negro de humo; No CBP: grupo de control. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Medición del contenido de carbono en macrófagos de las vías respiratorias expuestos a partículas que contienen carbono

Pulmonary macrophages exhibit a dose-dependent pattern in phagocytizing particles. Following engulfment, these macrophages are subsequently excreted with ...

measuring-carbon-content-airway-macrophages-exposed-to-carbon

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Células epiteliales pulmonares pueden ser aislados de las vías respiratorias de los ratones y se cultivan en la interfaz aire-líquido como un modelo de epitelio respiratorio diferenciados. Un protocolo es descrito para el aislamiento, el cultivo y la exposición de estas células al humo del cigarrillo convencional, con el fin de estudiar la respuesta molecular a esta toxina ambiental.

Aislamiento de ratón las células epiteliales respiratorias y la exposición al humo del cigarrillo Experimental de la interfaz de aire líquido

Aquí se describen los protocolos para la recogida de los macrófagos alveolares murinos, que residan las células inmunes en el pulmón, y el examen de su activación en respuesta a la co-cultivo con nanopartículas polianhídrido.

Activación de los macrófagos alveolares murinos recolección y evaluación de celular inducida por nanopartículas polianhidrido

Este video demuestra el inmunomarcaje de trampas extracelulares de macrófagos, METs, en macrófagos broncoalveolares a partir de líquido de lavado broncoalveolar, y su visualización utilizando un microscopio confocal.

Visualización de Trampas Extracelulares en Macrófagos a partir de Fluidos de Lavado Broncoalveolar Humanos

Un método para evaluar la capacidad de los macrófagos alveolares aislados de ratón para controlar el crecimiento de esporas de Aspergillus fagocitados por microscopía confocal.

La evaluación de la actividad anti-fúngica de aislados macrófagos alveolares por microscopía confocal

El objetivo de este protocolo es proporcionar métodos automatizados para cuantificar las patologías pulmonares crónicas en un modelo murino de EPOC. El protocolo incluye la exposición de ratones al humo del cigarrillo (CS), la medición de la función pulmonar, el inflado de los pulmones y el uso de métodos de morfometría para medir el enfisema y la remodelación de las vías respiratorias pequeñas en ratones.

Medición automática de enfisema pulmonar y la pequeña vía aérea Remodelación de cigarrillos sin humo Ratones expuestos

Este protocolo describe las técnicas para la cuantificación y caracterización de aberraciones cromosómicas in vitro en macrófagos de ratón RAW264.7 después del tratamiento con la materia en partículas del aire ambiente.

El análisis de la inducida por la materia particulada ambiental aberraciones cromosómicas El uso de una<em&gt; In Vitro</em&gt; Sistema

Las trampas extracelulares macrófago son una entidad nuevamente descrita. Este artículo se centrará en los métodos de microscopía confocal y cómo son visualizados en vitro y en vivo de las muestras de pulmón.

Visualización de macrófagos trampas extracelular mediante Microscopía Confocal

Describimos un método para procesar el líquido de lavado broncoalveolar y la sangre periférica emparejada de individuos infectados crónicamente por el VIH en terapia antirretroviral para evaluar los reservorios pulmonares del VIH. Estos métodos dan lugar a la adquisición de células T CD4 altamente puras y macrófagos alveolares que posteriormente pueden utilizarse para inmunofenotipado y cuantificaciones de ADN/ARN de VIH por reacción en cadena de polimerasa ultrasensible.

Procesamiento de líquido de lavado broncoalveolar y sangre emparejada para macrófago alveolar y CD4+ inmunofenotipado de células T y evaluación del embalse de VIH

Este manuscrito describe un protocolo para determinar si la exposición al ozono, un criterio contaminante del aire, afecta a la eferocítosis in vivo de los macrófagos alveolares. Este protocolo utiliza reactivos y técnicas de uso común y se puede adaptar a múltiples modelos de lesión pulmonar para determinar los efectos sobre la eferocittosis de macrófagos alveolares.

En la evaluación Vivo de la efiytosis de macrófagos alveolares tras la exposición al ozono

Descrito es el método de cultivo celular y exposición de un modelo bronquial in vitro para la exposición realista y repetida a partículas para pruebas de toxicidad.

Un modelo epitelial bronquial de interfaz aire-líquido para la exposición realista y repetida por inhalación a partículas en el aire para pruebas de toxicidad

Aprende a medir el contenido de carbono en macrófagos de las vías respiratorias mediante esputo inducido. Este método no invasivo proporciona un biomarcador fiable para evaluar la exposición individual a partículas contaminantes.

Medición del contenido de carbono en macrófagos de las vías respiratorias expuestos a partículas que contienen carbono

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