Name: Desarrollo de terapias combinatorias para la lesión de la médula espinal mediante la administración de células madre (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 13 s
Description: Aprende a desarrollar hidrogeles de tejido descelularizado para reparar lesiones de médula espinal usando células madre adiposas. Este método combina plataformas 3D con terapia celular para avanzar en medicina regenerativa.

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<table><tbody><tr><td>3-(Decildimetilamonio)sulfonato de propano sal interna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4266</td><td>Utilizado durante la descelización del nervio ciático, SB-10</td></tr><tr><td>3-(N,N-Dimetilpalmitilammonio)sulfonato de propano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6883</td><td>Usado durante la descelularización del nervio ciático, SB-16</td></tr><tr><td>Reactivo AlamarBlue</td><td>Fisher Scientific</td><td>DAL1100</td><td>Utilizado durante la prueba de viabilidad de células AlamaBlue</td></tr><tr><td>Condroitinasa ABC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3667</td><td>Utilizado durante la descelularización del nervio ciático</td></tr><tr><td>Criostato</td><td>Leica</td><td>CM1860</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonucasa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4263</td><td>Utilizado durante la descelularización del nervio ciático</td></tr><tr><td>Fosfato de hidrógeno dissódico heptahidratado</td><td>VWR</td><td>BDH9296</td><td>Químico para 100 mM de Na/50 mM de phos y 50 mM Na/10 mM de phos buffer</td></tr><tr><td>DNeasy Blood & Kit de pañuelos</td><td>Qiagen</td><td>69506</td><td>Utilizado durante el análisis de ADN</td></tr><tr><td>Montaje DPX para histologia, medio de montaje de corredera</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6522</td><td>Utilizados durante H& Tinción con E</td></tr><tr><td>Eosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110216</td><td>Utilizados durante H& Tinción con E</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>89125-172</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252549</td><td>Utilizados durante H& Tinción con E</td></tr><tr><td>Glutaraldehído (GA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td>Utilizado durante la funcionalización de la superficie del PDMS</td></tr><tr><td>Medios de crecimiento hASC</td><td>Lonza</td><td>PT-4505</td><td>Se utiliza para cultivar hASCs, que contienen suero bovino fetal y penicilina/estreptomicina</td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>VWR</td><td>26041-06</td><td>Utilizados durante H& Tinción con E</td></tr><tr><td>Células madre humanas derivadas del adiposo</td><td>Lonza</td><td>PT-5006</td><td></td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico (HCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320331</td><td>Se utiliza para digerir tejidos descelularizados y ajustar soluciones de Pregel</td></tr><tr><td>Medios M199</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0650</td><td>Se usa para diluir pregels hasta la concentración deseada</td></tr><tr><td>Compuesto de temperatu de corte óptimo</td><td>Tissue-Tek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Pepsina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7000</td><td>Usado para digerir tejidos descelularizados</td></tr><tr><td>Ácido peracético</td><td>Callejón Lab</td><td>PAA1001</td><td>Utilizado durante la descelularización de la médula espinal</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>VWR</td><td>97062-948</td><td></td></tr><tr><td>Lector de matrículas</td><td>BioTek Instruments</td><td>Synergy Mx</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenimina (PEI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>181978</td><td>Utilizado durante la funcionalización de la superficie del PDMS</td></tr><tr><td>Nervio ciático porcino</td><td>Tissue Source LLC</td><td></td><td>Cerdos vivos, sin información identificable ni detalles de trazabilidad</td></tr><tr><td>Médula espinal porcina</td><td>Tissue Source LLC</td><td></td><td>Cerdos vivos, sin información identificable ni detalles de trazabilidad</td></tr><tr><td>Sistema dsDNA QuantiFluor</td><td>Promega</td><td>E2670</td><td>Utilizado para analizar el contenido de ADN</td></tr><tr><td>Reómetro</td><td>TA Instruments</td><td>DHR 2</td><td></td></tr><tr><td>Rotador robusto</td><td>Glas-co</td><td>099A RD4512</td><td>Utilizado durante la descelularización de la médula espinal</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio (NaCl)</td><td>VWR</td><td>BDH9286</td><td>Químico para 100 mM de Na/50 mM de phos y 50 mM Na/10 mM de phos buffer</td></tr><tr><td>Desoxicolato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Monohidrato de fosfato de dihidrógeno sódico</td><td>VWR</td><td>BDH9298</td><td>Químico para 100 mM de Na/50 mM de phos y 50 mM Na/10 mM de phos buffer</td></tr><tr><td>Solución de hidróxido de sodio (NaOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>415443</td><td>Se usa para ajustar las soluciones de Pregel</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Materiales recomendados por Kayaku</td><td>SU8-100</td><td>Usado para recubrir obleas de silicio</td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8501</td><td>Utilizado durante la descelularización de la médula espinal</td></tr><tr><td>Kit de elastómero de silicona Sylgard 184</td><td>DOW</td><td>1317318</td><td>Base y agente de curado de polidimetilxiloxano (PDMS)</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>Utilizado durante la descelularización de la médula espinal</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,05%), fenol rojo</td><td>Thermo Fisher</td><td>25300062</td><td>Utilizado durante trabajos de hASC y durante la descelización de la médula espinal</td></tr><tr><td>Rotador de revólver de tubo</td><td>Thermo Fisher</td><td>88881001</td><td>Utilizado durante la descelularización del nervio ciático</td></tr><tr><td>Xileno</td><td>VWR</td><td>MK866816</td><td>Utilizados durante H& Tinción con E</td></tr></tbody></table>

desarrollo de terapias combinatorias para la lesión de la médula espinal mediante la administración de células madre

Development of Combinatorial Therapeutics for Spinal Cord Injury using Stem Cell Delivery

Desarrollo de terapias combinatorias para la lesión de la médula espinal mediante la administración de células madre

Traumatic spinal cord injury (SCI) induces permanent sensorimotor deficit below the site of injury. It affects approximately a quarter million people in ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

La lesión traumática de la médula espinal interrumpe la comunicación con el cerebro. Para restaurar la pérdida de conectividad que utilizan un injerto de nervio periférico para proporcionar un sustrato para la regeneración de las fibras en combinación con factores neurotróficos y las enzimas de la matriz de modulación, para eliminar las moléculas inhibidoras para promover el crecimiento de larga distancia.

La combinación de injerto de nervio periférico y la matriz de modulación para la Reparación de médula espinal de ratas lesionados

El trasplante de precursores neuronales es una estrategia prometedora para la protección y / o reemplazar la pérdida / disfuncional neuronas cervical motor frénico en lesiones de médula espinal (LME) y el trastorno de la neurona motora, esclerosis amiotrófica laterales (ALS). Ofrecemos un protocolo para la entrega de celulares a cuerno ventral de la médula espinal cervical en modelos de roedores de la ELA y la médula espinal.

Intraespinal trasplante de células de Orientación asta ventral del cuello uterino en la esclerosis lateral amiotrófica y la lesión de la médula espinal

Fuente: Zweckberger, K., et al. Uso sinérgico de células precursoras neurales y péptidos autoensamblables en lesiones experimentales de la médula espinal cervical.  J. Vis. Exp. (2015).Este protocolo demuestra un enfoque de inyección dirigida para la reparación de lesiones de la médula espinal en un modelo de rata. Implica la administración de péptidos autoensamblables (SAP) en el núcleo de la lesión para crear un andamio de soporte, seguido de inyecciones de células precursoras neurales (NPC)...

Inyección de péptidos autoensamblables y células precursoras neurales para la reparación de la médula espinal en un modelo de rata

Matrices de fibrina que contienen factores de crecimiento se utilizaron para conservar las células madre neurales injertadas en los sitios de la transección completa de la médula espinal. Células injertadas llenaron completamente la cavidad de la lesión y diferenciarse en múltiples tipos de células neuronales, incluyendo las neuronas que se extendían axones en la médula espinal de acogida a través de largas distancias.

Promoción de la supervivencia y la diferenciación de células madre neurales con fibrina y factor de crecimiento cócteles después de la médula espinal severa lesión

El tratamiento de la lesión de la médula espinal cervical con péptidos autoensamblables (SAP) y células precursoras neurales (NPC), junto con factores de crecimiento, es un enfoque prometedor para promover la regeneración y la recuperación. Se establece un modelo de clip de aneurisma de contusión/compresión en ratas de LM cervical y tratamiento combinado que incluye inyección de SAP y trasplante de NPC.

El uso sinérgico de las células precursoras neuronales y Péptidos de autoensamblaje en Experimental cervical Lesión de la Médula Espinal

Lesión de la médula espinal es una condición traumática que causa morbilidad severa y alta mortalidad. En este trabajo se describe en detalle un modelo contusión de lesión de la médula espinal en ratones seguido de un trasplante de células madre neurales.

Neural Trasplante de células madre en Experimental contuso Modelo de Lesión de la Médula Espinal

Este estudio describe una plataforma experimental para caracterizar rápidamente células madre modificadas y sus comportamientos antes de su aplicación en estudios de trasplante in vivo a largo plazo para el rescate y reparación del sistema nervioso.

Alto rendimiento caracterización de células madre adultas de ingeniería para la entrega de los factores terapéuticos de estrategias neuroprotectoras

Las lesiones graves de la médula espinal suelen provocar defectos en los tejidos. Se describen dos posibilidades para cerrar con éxito dichas brechas para promover la adaptación de los tejidos, las respuestas regenerativas y la mejora funcional en ratas mediante la implantación de un sistema de microconectores mecánicos después de una lesión aguda y cinco semanas después de la transección completa de la médula espinal.

Las estrategias experimentales para llenar los vacíos grandes de tejido de la médula espinal lesionada espinal después de la lesión aguda y crónica

Este artículo describe una técnica para insertar un tubo hueco entre los tocones de la médula espinal después de la transección completa y se llenan de células de Schwann (SCs) y matriz inyectable la membrana del sótano para salvar y promover la regeneración del axón a través de la brecha.

Trasplante de Schwann las células dentro de conductos de PVDF-TrFE a puente tocones de médula espinal de rata seccionado para promover la regeneración del axón a través de la brecha

Este protocolo describe la fabricación de un sistema de cultivo celular para permitir la siembra de células madre en un andamio de polímero conductor en vitro la estimulación eléctrica y posterior en vivo la implantación del andamio sembrado de células madre usando un técnica mínimamente invasiva.

Eléctricamente conductivo andamio modular y entregar las células madre

En este artículo, proporcionamos un método reproducible para generar y mantener cortes organotípicos de la médula espinal a largo plazo trasplantados con células madre neurales como modelo ex vivo para probar terapias de reemplazo celular.

Cultivo a largo plazo de cortes organotípicos de médula espinal de ratón como plataforma para validar el trasplante de células en lesiones de la médula espinal

Aprende a desarrollar hidrogeles de tejido descelularizado para reparar lesiones de médula espinal usando células madre adiposas. Este método combina plataformas 3D con terapia celular para avanzar en medicina regenerativa.

Desarrollo de terapias combinatorias para la lesión de la médula espinal mediante la administración de células madre

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