Name: Procedimientos para el cultivo in vitro de Treponema pallidum, la espiroqueta de sífilis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T12:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Aprende el cultivo in vitro de Treponema pallidum en co-cultivo con células Sf1Ep para investigación de sífilis. Este método escalable permite producir grandes cantidades del patógeno y generar cultivos clonales para análisis detallados.

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<meta charset="utf8"></head><body>Cultivo in vitro escalable de T. pallidum mediante cocultivo de células de mamíferos

<ol><li>Implementing the global health sector strategies on HIV, viral hepatitis and sexually transmitted infections, 2022-2030: Report on progress and gaps. World Health Organization. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925">https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925</a> 2022-2030 (2024).</li>
<li>Antal, G. M., Lukehart, S. A., Meheus, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endemic+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">The endemic treponematoses.</a> Microbes Infect. 4 (1), 83-94 (2002).</li>
<li>Norris, S. J., Paster, B. J., Smibert, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNorris%2C+SJ+%22Bergey%27s+Manual+of+Systematic+Bacteriology%22">Bergey's Manual of Systematic Bacteriology</a>. 4, Springer. New York, NY. (2010).</li>
<li>Lumeij, J. T., Mikalová, L., Šmajs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+difference+between+hare+syphilis+and+rabbit+syphilis%3F+Cross+infection+experiments+between+rabbits+and+hares%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Is there a difference between hare syphilis and rabbit syphilis? Cross infection experiments between rabbits and hares.</a> Vet Microbiol. 164 (1-2), 190-194 (2013).</li>
<li>Knauf, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+prevalence+and+genetic+diversity+of+Treponema+paraluisleporidarum+isolates+in+European+lagomorphs%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">High prevalence and genetic diversity of Treponema paraluisleporidarum isolates in European lagomorphs.</a> Microbiol Spectr. 12 (1), e0177423(2024).</li>
<li>Šmajs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+genome+sequence+of+Treponema+paraluiscuniculi%2C+strain+Cuniculi+A%3A+the+loss+of+infectivity+to+humans+is+associated+with+genome+decay%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Complete genome sequence of Treponema paraluiscuniculi, strain Cuniculi A: the loss of infectivity to humans is associated with genome decay.</a> PLoS One. 6 (5), e20415(2011).</li>
<li>Šmajs, D., Norris, S. J., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+diversity+in+Treponema+pallidum%3A+implications+for+pathogenesis%2C+evolution+and+molecular+diagnostics+of+syphilis+and+yaws%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetic diversity in Treponema pallidum: implications for pathogenesis, evolution and molecular diagnostics of syphilis and yaws.</a> Infect Genet Evol. 12 (2), 191-202 (2012).</li>
<li>Šmajs, D., Strouhal, M., Knauf, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+human+and+animal+uncultivable+treponemal+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetics of human and animal uncultivable treponemal pathogens.</a> Infect Genet Evol. 61, 92-107 (2018).</li>
<li>Norris, S. J., Cox, D. L., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+Treponema+pallidum%3A+correlation+of+functional+activities+with+genome+sequence+data%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biology of Treponema pallidum: correlation of functional activities with genome sequence data.</a> J Mol Microbiol Biotechnol. 3 (1), 37-62 (2001).</li>
<li>Radolf, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%3A+making+a+living+as+a+stealth+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum, the syphilis spirochete: making a living as a stealth pathogen.</a> Nat Rev Microbiol. 14 (12), 744-759 (2016).</li>
<li>Schaudinn, F. R., Hoffman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorl%C3%A4ufiger+bericht+%C3%BCber+das+Vorkommen+f%C3%BCr+Spirochaeten+in+syphilitischen+Krankheitsprodukten+und+bei+Papillomen%5BTitle%5D)+AND+%22Arb+Gesundh+Amt+Berlin%22%5BJournal%5D)">Vorläufiger bericht über das Vorkommen für Spirochaeten in syphilitischen Krankheitsprodukten und bei Papillomen.</a> Arb Gesundh Amt Berlin. 22, 528-534 (1905).</li>
<li>Schaudinn, F., Hoffmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%C3%9Cber+Spirochaetenbefunde+im+Lymphdr%C3%BCsensaft+Syphilitischer%5BTitle%5D)+AND+%22Deut+Med+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Über Spirochaetenbefunde im Lymphdrüsensaft Syphilitischer.</a> Deut Med Wochenschr. 31 (18), 711-714 (1905).</li>
<li>Turner, T. B., Hollander, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+the+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Biology of the treponematoses.</a> World Health Organization. , (1957).</li>
<li>Lukehart, S. A., Marra, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+laboratory+maintenance+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Isolation and laboratory maintenance of Treponema pallidum.</a> Curr Protoc Microbiol. , Chapter 12, Unit 12A.1 (2007).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Cox, D. L., Moeckli, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+virulent+Treponema+pallidum+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Cultivation of virulent Treponema pallidum in tissue culture.</a> Infect Immun. 32, 908-915 (1981).</li>
<li>Cox, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Culture of Treponema pallidum.</a> Meth Enzymol. 236, 390-405 (1994).</li>
<li>Edmondson, D. G., Hu, B., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vitro+culture+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Long-term in vitro culture of the syphilis spirochete Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> mBio. 9 (3), e01153-e01218 (2018).</li>
<li>Edmondson, D. G., DeLay, B. D., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+affecting+continuous+in+vitro+culture+of+Treponema+pallidum+strains%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Parameters affecting continuous in vitro culture of Treponema pallidum strains.</a> mBio. 12 (1), e03536-e03620 (2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cultivation+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro cultivation of the syphilis spirochete Treponema pallidum.</a> Curr Protoc. 1 (2), e44(2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Wormser, G. P., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+to+doxycycline%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vitro susceptibility of Treponema pallidum subsp. pallidum to doxycycline.</a> Antimicrob Agents Chemother. 64 (10), e00979-e01020 (2020).</li>
<li>Leimer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+selective+antibiotic+for+Lyme+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A selective antibiotic for Lyme disease.</a> Cell. 184 (21), 5405-5418 (2021).</li>
<li>Haynes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+linezolid+on+Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+agent%3A+A+preclinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of linezolid on Treponema pallidum, the syphilis agent: A preclinical study.</a> EBioMedicine. 65, 103281(2021).</li>
<li>Houston, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+characterization+of+peptides+with+antimicrobial+activity+From+the+syphilis+spirochete%2C+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification and functional characterization of peptides with antimicrobial activity From the syphilis spirochete, Treponema pallidum.</a> Front Microbiol. 13, 888525(2022).</li>
<li>Tantalo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subspecies+pallidum%3A+an+in-vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility of Treponema pallidum subspecies pallidum: an in-vitro study.</a> Lancet Microbe. 4 (12), e994-e1004 (2023).</li>
<li>Hayes, K. A., Dressler, J. M., Norris, S. J., Edmondson, D. G., Jutras, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+screen+identifies+beta-lactam+antibiotics+which+can+be+repurposed+to+target+the+syphilis+agent%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Antimicrob+Resist%22%5BJournal%5D)">A large screen identifies beta-lactam antibiotics which can be repurposed to target the syphilis agent.</a> NPJ Antimicrob Resist. 1 (1), 4(2023).</li>
<li>Tantalo, L. C., Molini, B. J., Bose, M., Klausner, J. D., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+isolation+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+from+fresh+and+frozen+needle+aspirates+of+primary+experimental+syphilis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">In vitro isolation of Treponema pallidum subsp. pallidum from fresh and frozen needle aspirates of primary experimental syphilis lesions.</a> Sex Transm Dis. 50 (3), 180-183 (2023).</li>
<li>Edmondson, D. G., De Lay, B. D., Hanson, B. M., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolates+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+Nichols+provide+evidence+for+the+occurrence+of+microevolution+during+experimental+rabbit+infection+and+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clonal isolates of Treponema pallidum subsp. pallidum Nichols provide evidence for the occurrence of microevolution during experimental rabbit infection and in vitro culture.</a> PLoS One. 18 (3), e0281187(2023).</li>
<li>Lin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+TprK+profiling+of+in+vivo+and+in+vitro-propagated+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+reveals+accumulation+of+antigenic+variants+in+absence+of+immune+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal TprK profiling of in vivo and in vitro-propagated Treponema pallidum subsp. pallidum reveals accumulation of antigenic variants in absence of immune pressure.</a> PLoS Negl Trop Dis. 15 (9), e0009753(2021).</li>
<li>De Lay, B. D., Cameron, T. A., De Lay, N. R., Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transcriptional+profiles+of+Treponema+pallidum+during+experimental+infection+of+rabbits+and+in+vitro+culture%3A+Highly+similar%2C+yet+different%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Comparison of transcriptional profiles of Treponema pallidum during experimental infection of rabbits and in vitro culture: Highly similar, yet different.</a> PLoS Pathog. 17 (9), e1009949(2021).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of Treponema pallidum subsp. pallidum, the syphilis spirochete.</a> PLoS Pathog. 17 (7), e1009612(2021).</li>
<li>Phan, A., Romeis, E., Tantalo, L., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+transformation+and+selection+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro transformation and selection of Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> Curr Protoc. 2 (8), e507(2022).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+with+an+artificially+impaired+TprK+antigenic+variation+system+is+attenuated+in+the+rabbit+model+of+syphilis%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum subsp. pallidum with an artificially impaired TprK antigenic variation system is attenuated in the rabbit model of syphilis.</a> bioRxiv. , 524629(2023).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Becker, F. A., Stout, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+virulent+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+cell-free+and+tissue+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of virulent Treponema pallidum (Nichols strain) in cell-free and tissue culture systems.</a> Infect Immun. 18, 173-182 (1977).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 6th Edition. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22U.S.+Department+of+Health+and+Human+Services%2C+Centers+for+Disease+Control+and+Prevention%2C+National+Institutes+of+Health%22">U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health</a>. , (2020).</li>
<li>Norris, S. J., Miller, J. N., Sykes, J. A., Fitzgerald, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+oxygen+tension%2C+sulfhydryl+compounds%2C+and+serum+on+the+motility+and+virulence+of+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+a+cell-+free+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Influence of oxygen tension, sulfhydryl compounds, and serum on the motility and virulence of Treponema pallidum (Nichols strain) in a cell- free system.</a> Infect Immun. 22 (3), 689-697 (1978).</li>
<li>Cox, C. D., Barber, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+uptake+by+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Oxygen uptake by Treponema pallidum.</a> Infect Immun. 10 (1), 123-127 (1974).</li>
<li>Magnuson, H. J., Eagle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minimal+infectious+inoculum+of+Spirochaeta+pallida+%28Nichols+strain%29%2C+and+a+consideration+of+its+rate+of+multiplication+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The minimal infectious inoculum of Spirochaeta pallida (Nichols strain), and a consideration of its rate of multiplication in vivo.</a> Am J Syph. 32, 1-18 (1948).</li>
<li>Cumberland, M. C., Turner, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rate+of+multiplication+of+Treponema+pallidum+in+normal+and+immune+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The rate of multiplication of Treponema pallidum in normal and immune rabbits.</a> Am J Syph. 33, 201-211 (1949).</li>
<li>Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+multiplication+and+subculture+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+in+a+tissue+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the multiplication and subculture of Treponema pallidum subsp. pallidum in a tissue culture system.</a> Infect Immun. 53, 534-539 (1987).</li>
<li>Baseman, J. B., Nichols, J. C., Rumpp, O., Hayes, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum+from+infected+rabbit+tissue%3A+resolution+into+two+treponemal+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum from infected rabbit tissue: resolution into two treponemal populations.</a> Infect Immun. 10, 1062-1067 (1974).</li>
<li>Hanff, P. A., Norris, S. J., Lovett, M. A., Miller, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum%2C+Nichols+strain%2C+by+Percoll+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum, Nichols strain, by Percoll density gradient centrifugation.</a> Sex Transm Dis. 11, 275-286 (1984).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>10x Earle' s Sales equilibradas, sin Mg2+, Ca2+</td><td>Gibco</td><td>14155063</td><td></td></tr><tr><td>tubos centrífugos estériles cónicos desechables de 15 y 50 mL&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>viales criogénicos de 2 mL&nbsp;</td><td>Placas de</td><td></td> cultivo celular de Corning 430659 <td></td></tr><tr><td>de 6 pocillos para cultivo T. pallidum</td>;<td>Falcon</td><td>353046</td><td>Las placas deben tener tapas de baja evaporación.</td></tr><tr><td>70% etanol</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>75 cm2 matraces de cultivo con tapas</td><td>ventiladas Corning</td><td>43061U</td><td></td></tr><tr><td>93,5% de nitrógeno, 5% de CO2 y 1,5% de oxígeno para el medio de preequilibrio y los cultivos</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>95% de nitrógeno y 5% de CO2 para el medio de preequilibrio y los cultivos</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Microplacas tratadas con cultivo de tejidos transparentes de baja evaporación de 96 pocillos y fondo plano</td><td>Corning Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta multicanal ajustable con capacidad de 200 ul&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Opcional, pero muy útil para la clonación</td></tr><tr><td>Agua de grado de cultivo celular</td><td>Sigma</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>CMRL 1066 sin L-glutamina o rojo fenol</td><td>US Biological</td><td>C5900-03A</td><td></td></tr><tr><td>CO2 para incubadoras de tri-gas y cultivo de tejidos&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tanque de almacenamiento de cultivo celular de nitrógeno líquido criogénico</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>D-glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>Unidades de filtro desechables, 0.2 y micro; m , > 100 mL capacidad</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas desechables: 25 mL, 10 mL, 5 mL,</td><td>aspirantes N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1902</td><td></td></tr><tr><td>DMSO (grado de cultivo celular estéril)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Eagle' s MEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4655</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino, inactivado por calor&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4135</td><td>Recomendamos encarecidamente este producto. Debe realizar una preselección para determinar la compatibilidad con el cultivo T. pallidum si se utiliza una marca o un número de catálogo diferentes.</td></tr><tr><td>Congelador con capacidad de mantener -70 &deg; C o -80 &deg; C</td><td>N/A</td><td>N/A Para el</td><td>almacenamiento de T. pallidum, se puede utilizar el almacenamiento de nitrógeno líquido en su lugar</td></tr><tr><td>Medio de congelación (medio Sf1Ep + 10% [v/v] DMSO)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cilindros de gas con los accesorios adecuados</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Jarra anaeróbica ventilada GasPak 150 (Jarra de cerveza)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-816</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cámaras de recuento Helber con dictámenes Thoma</td><td>Hawksley Medical and Laboratory Equipment</td><td></td><td>Para la cuantificación de T. pallidum</td></tr><tr><td>Hemocytometer</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>&nbsp; Para la cuantificación de células Sf1Ep</td></tr><tr><td>Interruptor de tanque de incubadora</td><td>NuAire&nbsp;</td><td>NU-1550 TankGuard Interruptor automático del tanque de la incubadora de CO2</td><td>Opcional, pero muy útil para mantener las condiciones adecuadas de O2.</td></tr><tr><td>Microscopio invertido con óptica de contraste de fase</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Para la visualización de cultivos celulares Sf1Ep</td></tr><tr><td>L-Glutamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>L-Histidina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>MEM Aminoácidos no esenciales</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio con condensador de campo oscuro</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>El microscopio debe tener un objetivo de 40x y oculares de 15x.</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador multicanal para aspirador&nbsp;</td><td>Integra</td><td>155520</td><td>Opcional, pero útil para clonar</td></tr><tr><td>NaHCO3 (7.5%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Nitrógeno para incubadora tri-gas</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7017</td><td></td></tr><tr><td>Sf1Ep (NBL-11)</td><td>células American Type Culture Collection</td><td>CCL-68</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato</td> <td>de sodioSigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>PBS estéril (sin cloruro de calcio y cloruro de magnesio)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Depósitos de reactivos estériles, 50 o 100 mL tamaño</td><td>N/</td><td>A N/A</td><td></td></tr><tr><td>T. pallidum muestra, congelados o frescos&nbsp;</td><td></td><td></td><td>de una infección de conejo o cultivo in vitro</td></tr><tr><td>Incubadora de cultivo de tejidos mantenida a 37 &deg; C, 5% CO2</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de cultivo de tejidos de tres gases mantenida a 34 &deg; C, 5% CO2, 1,5% O2</td><td>Thermofisher</td><td>Heracell&trade; VIOS 160i Incubadora de CO2 Tri-Gas</td><td>Opcional; en su lugar, se pueden usar frascos anaeróbicos (ver Ref. 17)</td></tr><tr><td>Solución de tripsina-EDTA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td></td></tr><tr><td>Fuente de vacío (p. ej., aspiradora doméstica), tubos de vacío, vacuómetro y conectores</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Agua, apta para cultivo celular, esterilizada por filtro, purificada</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W3500</td><td>Recomendado para la preparación de medios; disminuye la variabilidad del cultivo</td></tr></tbody></table>

procedimientos para el cultivo in vitro de treponema pallidum, la espiroqueta de sífilis

Procedures for In Vitro Cultivation of Treponema pallidum, the Syphilis Spirochete

Usando las condiciones descritas, T. pallidum típicamente retiene &gt;90% de motilidad y se multiplica logarítmicamente con un tiempo de duplicación de 33 h a 45 h durante aproximadamente 7 días antes de entrar en la fase estacionaria (Figura 3). En el transcurso de 1 semana, las espiroquetas se someten a aproximadamente 4-5 duplicaciones (Figura 4). ). Además, las diferentes cepas de T. pallidum pueden crecer a diferentes ritmos. Las cepas del grupo SS14 de T. pallidum tienden a tener tiempos de duplicación más lentos que las del grupo Nichols17.
La alimentación de los cultivos puede prolongar el tiempo de cultivo varios días, pero la capa de células Sf1Ep a menudo falla después de una semana de cultivo. Además, los treponemas alcanzan un límite superior de organismos de aproximadamente 5 x 107/mL. Los cultivos transferidos a intervalos de 7 días generalmente continúan la multiplicación logarítmica con poca o ninguna fase de retraso. Los organismos en la fase estacionaria a menudo se vuelven difíciles de pasar.
La mayoría de los T. pallidum están unidos a las células Sf1Ep. Sin embargo, queda suficiente T. pallidum en el sobrenadante para que las muestras de medio puedan extraerse periódicamente para comprobar su viabilidad y multiplicación. Si se requiere una cuantificación cuidadosa, se debe medir el volumen del medio extraído, cuantificar el número de T. pallidum y agregar el número total de organismos extraídos a los recuentos finales en la cosecha.
En estudios previos, la eficiencia de clonación (número de cultivos positivos por organismo inoculado) fue de 12,5% para 2 T. pallidum inoculados por pocillo y de 6,7% para 0,5 T. pallidum inoculados por pocillo27. Por lo tanto, es probable que cualquier pozo positivo represente el crecimiento de un solo organismo en cualquiera de estos inóculos. Sin embargo, la clonalidad de las poblaciones resultantes debe verificarse examinando la homogeneidad del cultivo en sitios que son heterogéneos en el cultivo original. La forma más definitiva de demostrar que el cultivo es isogénico es a través de la secuenciación del genoma completo27.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig01.jpg"> Figura 1: Diagrama de flujo del procedimiento de cultivo in vitro de T. pallidum. Esta figura ha sido reimpresa con permiso de Edmondson y Norris (2021)19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig02.jpg"> Figura 2: Diagrama del sistema para equilibrar los reactivos de cultivo de T. pallidum en un entorno con poco oxígeno. Un respiradero de jarra de cerveza está conectado a través de una junta en T a una fuente de vacío (como una aspiradora doméstica) y a cilindros de gas que contienen mezclas de gases personalizadas (5% de CO2, nitrógeno de equilibrio y 1,5% de O2, 5% de CO2, nitrógeno de equilibrio). Un vacuómetro en línea mide el vacío aspirado en el tarro. El vacío se extrae en el frasco a aproximadamente -58 kPa. A continuación, el frasco evacuado se vuelve a llenar lentamente con las mezclas de gases. El frasco de cerveza se rellena tres veces con 5% de CO2, equilibra el nitrógeno antes de una evacuación final y se rellena con 95% de N2, 5% de CO2, 1,5% de O2. A continuación, los cultivos o medios se retiran del frasco y se transfieren rápidamente a la incubadora de bajo oxígeno. Alternativamente, el tubo entre el frasco de cerveza y la primera junta en T se puede sujetar firmemente, el tubo se puede desconectar de la junta en T y todo el frasco de cerveza se puede transferir a una incubadora a 34 °C. Esta figura ha sido reimpresa con permiso de Edmondson y Norris (2021)19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig03.jpg"> Figura 3: Curvas de crecimiento de T. pallidum cultivado con células Sf1Ep con medio TpCM-2. Se sembraron cultivos triplicados paralelos con T. pallidum. Se cosecharon réplicas en cada punto de tiempo; los resultados representan la media + SEM para estos cultivos. (A) Se muestran los cambios en T. pallidum por cultivo y (B) por ciento de motilidad. Esta figura ha sido adaptada con permiso de Edmondson et al.18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig04.jpg"> Figura 4: Ejemplo de paso de cultivo in vitro de T. pallidum, cepa de Nichols. Los cultivos triplicados paralelos se sembraron con T. pallidum y se pasaron semanalmente utilizando una dilución 1:20. El diagrama de dientes de sierra muestra el número de T. pallidum por cultivo y el número transferido a nuevos cultivos en cada punto de tiempo. Los resultados representan la media ± SEM para tres réplicas biológicas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla 1: Volumen medio y proporciones de siembra para recipientes de cultivo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%201.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 2: Medios para el cultivo de T. pallidum . Todos los medios deben esterilizarse con filtro después de la preparación. El medio Sf1Ep puede almacenarse a 4 °C durante un máximo de dos meses. Por lo general, TpCM-2 se prepara un día antes de su uso. El medio de disociación debe ser alícuota y congelado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%202.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>

Procedimientos para el cultivo in vitro de Treponema pallidum, la espiroqueta de sífilis

For over a century, Treponema pallidum subsp. pallidum, the spiral-shaped bacterium that causes syphilis, could only be propagated by inoculation and ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Fuente: Eggers, C. H. Manipulación genética mediada por fagos de la espiroqueta de la enfermedad de Lyme Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la preparación de un cultivo de Borrelia burgdorferi modificado genéticamente diseñado con ADN de bacteriófago latente que porta un gen de resistencia a los antibióticos. Después de la selección e incubación de antibióticos, un inductor químico desencadena daños en el ADN, lo que lleva a la escisión, replicación y ensamblaje de...

Preparación e inducción de cultivos de Borrelia burgdorferi para la producción de partículas virales

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

La cuantificación rápida y eficiente del crecimiento intracelular de M. tuberculosis es crucial para buscar mejores terapias contra la tuberculosis (TB). Este protocolo describe un ensayo de detección colorimétrica basado en caldo utilizando un sistema automatizado de cultivo líquido para cuantificar el crecimiento de Mtb en macrófagos tratados con terapias candidatas dirigidas al huésped.

Un sistema de cultivo automatizado para su uso en pruebas preclínicas de terapias dirigidas al huésped para la tuberculosis

Debido a la opacidad del suelo, las interacciones entre sus microbios constituyentes no se pueden visualizar fácilmente con resolución celular. Aquí, se presentan dos herramientas microfluídicas, que ofrecen nuevas oportunidades para investigar las interacciones fúngico-microbianas. Los dispositivos son versátiles y fáciles de usar, lo que permite un alto control espaciotemporal e imágenes de alta resolución a nivel celular.

Herramientas microfluídicas para sondear las interacciones fúngico-microbianas a nivel celular

La capacidad de los bacteriófagos para mover el ADN entre las células bacterianas los convierte en herramientas efectivas para la manipulación genética de sus huéspedes bacterianos. Aquí se presenta una metodología para inducir, recuperar y usar φBB-1, un bacteriófago de Borrelia burgdorferi, para transducir ADN heterólogo entre diferentes cepas de la espiroqueta de la enfermedad de Lyme.

Manipulación genética mediada por fagos de la enfermedad de Lyme Espiroqueta Borrelia burgdorferi

El cultivo in vitro es un método de detección directa de la presencia de bacterias vivas. Este protocolo describe métodos para el cultivo de diversas espiroquetas de Borrelia, incluidas las del complejo Borrelia burgdorferi sensu lato, las especies de fiebre recidivante de Borrelia y Borrelia miyamotoi. Estas especies son fastidiosas y de crecimiento lento, pero pueden ser cultivadas.

Métodos de cultivo de espiroquetas de Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex y fiebre recidivante Borrelia

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