Name: Técnica de administración intranasal de agregados de α-sinucleína (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Aprende a administrar agregados de α-sinucleína por vía intranasal en modelo murino para estudiar la propagación prion-like hacia el bulbo olfatorio en la enfermedad de Parkinson. Este método no quirúrgico permite evaluar la progresión patológica.

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<meta charset="utf8"></head><body>Propagación de α-sinucleína: administración intranasal en la enfermedad de Parkinson

<ol><li>Tysnes, O. B., Storstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).</li>
<li>Goedert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+and+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein and neurodegenerative diseases.</a> Nature Rev Neurosci. 2, 492-501 (2001).</li>
<li>Conway, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+oligomerization%2C+not+fibrillization%2C+is+a+shared+property+of+both+alpha-synuclein+mutations+linked+to+early-onset+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).</li>
<li>Braak, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+brain+pathology+related+to+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease.</a> Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).</li>
<li>Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Parkinson%27s+disease%3A+possible+routes+by+which+vulnerable+neuronal+types+may+be+subject+to+neuroinvasion+by+an+unknown+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen.</a> J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).</li>
<li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T., Olanow, C. W. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKordower%2C+JH+%22Nat+Med%22">Nat Med</a>. 14 (5), 504-506 (2008).</li>
<li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson%27s+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+%CE%B1-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338, 949-953 (2012).</li>
<li>Desplats, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+disease+primate+model+with+%CE%B1-Synuclein+propagation+from+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb.</a> Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+into+the+mouse+gastrointestinal+tract+induces+Lewy+body-like+aggregates+in+the+brainstem+via+the+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 21(2018).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+transneuronal+propagation+of+alpha-synucleinopathy+triggered+in+olfactory+bulb+mimics+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease.</a> J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+aggregates+after+olfactory+bulb+injection+of+%CE%B1-synuclein+fibrils+is+associated+with+early+neuronal+loss+and+is+reduced+long+term%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term.</a> Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+spread+from+olfactory+bulb+causes+hyposmia%2C+anxiety%2C+and+memory+loss+in+BAC-SNCA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice.</a> Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).</li>
<li>Saito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+pathology+involves+the+olfactory+cells+in+Parkinson%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders.</a> Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).</li>
<li>De Luca, C. M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+RT-QuIC+seeding+activity+for+%CE%B1-synuclein+in+olfactory+mucosa+samples+of+patients+with+Parkinson%27s+disease+and+multiple+system+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy.</a> Transl Neurodegener. 8, 24(2019).</li>
<li>Stefani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+seeds+in+olfactory+mucosa+of+patients+with+isolated+REM+sleep+behaviour+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder.</a> Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).</li>
<li>Ucciferri, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scoring+central+nervous+system+inflammation%2C+demyelination%2C+and+axon+injury+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Vis Exp. (204), e65738(2024).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+%CE%B1-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-dose+intranasal+administration+of+%CE%B1-syn+PFFs+induce+lewy+neurite-like+pathology+in+olfactory+bulbs%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsonism+Relat+Disord%22%5BJournal%5D)">Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs.</a> Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440(2023).</li>
<li>Guo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+administration+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+triggers+microglial+iron+deposition+in+the+substantia+nigra+of+Macaca+fascicularis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis.</a> Cell Death Dis. 12 (1), 81(2021).</li>
<li>Macdonald, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+of+%CE%B1-synuclein+and+neurodegeneration+in+the+central+nervous+system+of+heterozygous+M83+mice+following+the+peripheral+administration+of+%CE%B1-synuclein+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds.</a> Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189(2021).</li>
<li>Abdelmotilib, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+fibril-induced+inclusion+spread+in+rats+and+mice+correlates+with+dopaminergic+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).</li>
<li>Tarutani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fragmented+pathogenic+%CE%B1-Synuclein+seeds+on+prion-like+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation.</a> J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).</li>
<li>Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal model for prodromal Parkinson's disease.</a> Int J Mol Sci. 21 (6), 1961(2020).</li>
<li>Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+procedure+for+removal+and+inactivation+of+alpha-Synuclein+assemblies+from+laboratory+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials.</a> J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).</li>
<li>Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+efficacy+of+different+procedures+that+remove+and+disassemble+alpha-synuclein%2C+tau+and+A-beta+fibrils+from+laboratory+material+and+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces.</a> Sci Rep. 8, 10788(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Microscopio de fluorescencia todo en uno BZ-X710</td><td>KEYENCE</td><td>N/A</td><td>Microscopio todo en uno</td></tr><tr><td>Ampicilina Sal sódica</td><td>Nacalai tesque</td><td>02739-32</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor II</td><td>Sonicbio</td><td>BR2006A</td><td>Sonicar tipo baño de agua.</td></tr><tr><td>Tartrato de butorfanol</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>WAK-52850</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de celulosa</td><td>MISUMI</td><td>UC20-32-100</td><td></td></tr><tr><td>DeepWellMaximizer</td><td>TAITEC</td><td>MBR-022UP</td><td></td></tr><tr><td>Agitador DynaCélulas competentes Zip BL21(DE3)</td><td>BioDynamics Laboratory Inc.</td><td>DS255</td><td>Célula competente</td></tr><tr><td>Entellan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>107961</td><td>Medio de montaje rápido para microscopía</td></tr><tr><td>Pinza Graefe Extra Fina Dentada Curva</td><td>FST</td><td>11152-10&nbsp;</td><td>fórceps</td></tr><tr><td>Tijeras finas endurecidas</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td>tijeras</td></tr><tr><td>Histofine Ratón de tinción simple MAX-PO (R)</td><td>Nichirei Bioscience</td><td>414341</td><td>Polímero universal de inmunoperoxidasa, anti-conejo</td></tr><tr><td>ImageJ ver 1.52p</td><td>NA</td><td>NA https://imagej.net/</td><td></td></tr> <tr><td>innova4200</td><td>New Brunswick scientific</td><td>9105085</td><td>Agitador de incubadora</td></tr><tr><td>Isopropyl-&beta;- D-tiogalactopiranósido</td><td>Nacalai tesque</td><td>19742-94</td><td></td></tr><tr><td>LB caldo, Lennox</td><td>Nacalai tesque</td><td>20066-24</td><td></td></tr><tr><td>Leica EG 1150 H</td><td>Leica</td><td>14 0388 86 108</td><td>Centro Modular de Inclusión de Tejidos</td></tr><tr><td>Leica TP 1020</td><td>Leica</td><td>14 0422 85108</td><td>Procesador Automático de Tejidos&nbsp;</td></tr><tr><td>Medetomidina</td><td>Fuji Film</td><td>135-17473</td><td></td></tr><tr><td>Microm HM325 Microtomo Rotatorio</td><td>Thermo Scientific</td><td>902100</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Seiyaku</td><td>4987-211-76210-0</td><td></td></tr><tr><td>Nueva hematoxilina Tipo G</td><td>Muto</td><td>65-9197-38 Solución de</td><td>hematoxilina</td></tr><tr><td>Aguja alada normal para vena tipo D, 25G</td><td>Aguja TERUMO</td><td>NN2332R</td><td>25G</td></tr><tr><td>Ultracentrífuga Optima TLX</td><td>Beckman Couler</td><td>8043-30-1197</td><td>Ultracentrífuga</td></tr><tr><td>P10</td><td>pipeta Gilson</td><td>FA10002P</td><td></td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Leica</td><td>39601095</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldehído</td><td>Nacalai tesque</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>Tinción de peroxidasa Kit DAB</td><td>Nacalai tesque</td><td>25985-50</td><td></td></tr><tr><td>Pirece BCA Kits de ensayo de proteínas</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>BCA ensayo</td></tr><tr><td>pRK172</td><td>Addgene</td><td>#134504</td><td>plásmido</td></tr><tr><td>Q-Sepharose Fast Flow.&nbsp;</td><td>cytiva</td><td>17051001</td><td>Resina de intercambio iónico</td></tr></tbody></table>

técnica de administración intranasal de agregados de α-sinucleína

Technique for Intranasal Administration of &#945;-Synuclein Aggregates

La Figura 3 muestra varios ejemplos de agregados α-Syn en el OB. En el presente estudio, administramos agregados de α-Syn en la fosa nasal unilateral. Las dos cavidades nasales están separadas por el tabique nasal, y cada OB proyecta las neuronas sensoriales olfativas a cada cavidad nasal por separado. Por lo tanto, el OB del lado contralateral se puede utilizar como control.
No se observó patología de P-α-Syn en el OB del lado tratado después de 1 y 3 meses (Figura 3A, B). Se observaron agregados de p-α-Syn similares a la neurita de Lewy en los glomérulos del lado tratado después de 6 y 12 meses. (Figura 3C, D, F, G). Estos agregados no se observaron en el OB en el lado de control (Figura 3E).
Podemos estimar la patología α-Syn contando los agregados de α-Syn o examinando el tamaño, etc., utilizando ImageJ (Tabla de Materiales). Por ejemplo, anteriormente contamos e informamos el número de agregados α-Syn en este modelo20. En el OB del lado tratado, los agregados similares a la neurita de Lewy en el OB aumentaron significativamente a lo largo de 12 meses (ANOVA de un factor, seguido de la prueba de Dunnett, p &lt; 0,01; Figura 3H). En el OB en el lado de control, hay pocos agregados α-Syn.
Un estudio previo mostró que los PFF inyectados en el cerebro del ratón se degradaron en una semana, y el α-Syn endógeno del ratón se convirtió en agregados de α-Syn19. En el presente estudio, el aumento de la patología de α-Syn a lo largo del tiempo indica que el α-Syn endógeno de ratón se ha convertido en agregados de α-Syn mediante la administración intranasal de PFF en dosis única. Estos resultados indicaron que la patología α-Syn podría extenderse de la mucosa olfativa al OB.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig01.jpg"> 
Figura 1: Método de administración de la cavidad nasal del ratón. (A) El ratón se coloca en posición supina con la cabeza ligeramente inclinada hacia abajo. (B) Las fosas nasales del ratón están indicadas por puntas de flecha amarillas. (C, D) La solución de fibrillas α-Syn se deja caer en la fosa nasal del ratón (C, flecha roja) y se inhala rápidamente (D, flechas rojas). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig02.jpg"> 
Figura 2: Esquema de los pasos para obtener los bulbos olfativos intactos. (A) Con unas tijeras, incidir el hueso craneal sagital y lateralmente (línea discontinua amarilla). (B) Retire el hueso craneal de los bulbos olfativos (OB) por completo. (C) Dar la vuelta a la cabeza y extraer con cuidado el cerebro. Corta los nervios del cerebro. (D) Cortar los nervios olfativos unidos al hueso craneal. (E) Todo el cerebro con los OB intactos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig03.jpg"> 
Figura 3: Agregados de P-α-Syn en los glomérulos del bulbo olfatorio. (A-G) Inmunohistoquímica P-α-Syn (EP1536Y) del OB en (A-D) el lado tratado 1, 3, 6 y 12 meses (1 m, 3 m, 6 m y 12 m, respectivamente) después de la administración intranasal y (E) el lado control 12 meses después de la administración intranasal. (C, D) Alrededor de los glomérulos aparecen agregados de α-Syn filiformes en forma de nerita de Lewy. (F, G) Las imágenes ampliadas son imágenes de gran aumento de p-α-Syn similares a la neurita de Lewy 6 y 12 meses después de la administración intranasal. (H) La cantidad de deposición de p-α-Syn similar a la neurita de Lewy en el OB en los lados tratados y de control (n = 4-5). Los gráficos muestran la media ± SEM. ANOVA de un factor seguido de la prueba de Dunnett; **&lt;0,01. Esta cifra ha sido modificada con respecto a un informe anterior20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Técnica de administración intranasal de agregados de α-sinucleína

Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disorder characterized by the presence of Lewy bodies, which are aggregates of &#945;-synuclein ...

technique-for-intranasal-administration-of-synuclein-aggregates

Research

Investigación

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Neuroscience

Neurociencia

La enfermedad de Parkinson se ha relacionado con la exposición a plaguicidas. Aquí se muestra un método para entregar los pesticidas mediante un tubo gástrico a la concentración deseada y un método para analizar su efecto en la acumulación de alfa-sinucleína en el sistema nervioso entérico.

La administración oral de la rotenona con una sonda y Análisis de Imágenes de la alfa-sinucleína inclusiones en el sistema nervioso entérico

Un método para administrar por vía intranasal a ratones despiertos medicamentos para el fin de dirigir el cerebro se describe. Este método permite la administración repetida durante largos períodos con la administración intranasal de drogas sin anestesia, y la nariz al cerebro de entrega con una exposición sistémica mínima.

Administración intranasal de la terapéutica del SNC para Ratones Awake

Este video muestra la inmunotinción de neuronas tratadas con agregados de alfa-sinucleína (αS). Las neuronas se tratan primero con agregados αS. A continuación, se fijan, se permeabilizan y se tratan con una solución de bloqueo. Se añaden anticuerpos primarios, seguidos de anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia y una tinción nuclear. A continuación, la muestra se monta y se observa al microscopio.

Inmunotinción de neuronas tratadas con agregados de alfa-sinucleína

Este video muestra la inyección de fibrillas de alfa-sinucleína en un ratón para inducir neuroinflamación. Las fibrillas se inyectan por vía intraperitoneal en un ratón transgénico que expresa proteínas alfa-sinucleína mutadas. Al llegar al sistema nervioso central, las fibrillas entran en las neuronas e inducen la agregación de las proteínas mutadas. Los agregados se propagan a las neuronas vecinas, la microglía y los astrocitos. El reconocimiento de los agregados desencadena la microglía para...

Inducción de neuroinflamación en ratones mediante inyección de fibrillas de alfa-sinucleína

Fuente: Ullah, I., et.al. Un dispositivo de posicionamiento para la colocación de ratones durante la administración intranasal de ARNip al sistema nervioso central. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra una técnica de administración intranasal precisa para administrar complejos de péptido-ARNip dirigidos a neuronas al cerebro del ratón utilizando un dispositivo de posicionamiento especializado. Los ratones anestesiados se aseguran en una posición con la cabeza hacia abajo y hacia adelante...

Entrega intranasal de ARNip al cerebro del ratón mediante un dispositivo de posicionamiento

Fuente: Kanazawa, T., et al. Métodos novedosos para la administración intranasal bajo anestesia inhalatoria para evaluar la administración de fármacos de nariz a cerebro. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra la administración intranasal de fármacos radiomarcados en un ratón anestesiado para lograr la administración del fármaco de nariz al cerebro. Explica cómo los medicamentos atraviesan el epitelio nasal y viajan a través de vías neuronales para llegar al cerebro, así como también cómo el...

Administración intranasal de fármacos en ratones mediante pipeta y canulación inversa para la administración de fármacos de nariz a cerebro

Inyección periférica de las fibrillas de alfa-sinucleína en el peritoneo o la lengua de Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) ratones, que expresan alfa-sinucleína humana con la mutación A53T familiar y luciferasa de luciérnaga, puede inducir la neuropatología, incluyendo la neuroinflamación , en su sistema nervioso central.

Imágenes de bioluminiscencia de la neuroinflamación en ratones transgénicos Después periférica La inoculación de la alfa-sinucleína fibrillas

El objetivo de este protocolo es proporcionar un sistema celular que imita la formación de alfa-sinucleína agregados en vivo. Inclusiones intracelulares de alfa-sinucleína se siembran en las neuronas primarias por la internalización y propagación de exógenos administrados agregados de alfa-sinucleína microsomas asociados nativos aislados de ratones transgénicos de alfa-sinucleína enfermo.

Administración exógena de alfa-sinucleína asociada a microsomas agregados a las neuronas primarias como un modelo de celular de gran alcance de la formación de las fibrillas de

Aquí, presentamos un protocolo utilizando un dispositivo de posicionamiento del ratón que permite la colocación adecuada de ratones para la administración intranasal de una formulación de péptido-siRNA dirigida al cerebro que permite un silenciamiento eficaz del gen en el sistema nervioso central.

Un dispositivo de posicionamiento para la colocación de ratones durante la entrega de siRNA intranasal al sistema nervioso central

El objetivo de este artículo es delinear los pasos requeridos para la generación de fibrillas a partir de alfa-synuclein monomérica, control de calidad subsiguiente y uso de las fibrillas preformadas in vivo.

Generación de fibrillas alfa-Synucleinas preformadas de monómeros y uso in vivo

Este protocolo presenta la ruptura de Rayleigh como un proceso leve para aerosolizar vectores de ARNm no virales. La deposición regional de vectores de ARNm aerosolizados se evalúa mediante el modelo de Entrada Nasal Idealizada de Alberta (AINI). La expresión de proteínas de fluorescencia verde (GFP) en células pulmonares humanas representa el mantenimiento de las funciones fisicoquímicas y biológicas de los vectores de ARNm postaerosolizados.

Administración intranasal de poliplexos de ARNm mediante aerosoles de ruptura de Rayleigh: un método in vitro para deposición nasal y pruebas funcionales

Aprende a administrar agregados de α-sinucleína por vía intranasal en modelo murino para estudiar la propagación prion-like hacia el bulbo olfatorio en la enfermedad de Parkinson. Este método no quirúrgico permite evaluar la progresión patológica.

Técnica de administración intranasal de agregados de α-sinucleína

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