Imágenes de radiosíntesis, control de calidad y tomografía por emisión de positrones en animales pequeños de ⁶⁸nanomoléculas marcadas con Ga

Nuestra investigación se centra en la radiofarmacia, por lo que produce nuevos radiofármacos tanto para animales como para humanos. Al final, queremos visualizar aspectos de una determinada enfermedad, en nuestro caso, el cáncer, y de esta manera ayudar al tratamiento en la clínica. Ahora vamos por algo más que la imagen.

En su lugar, desarrollamos teranósticos, compuestos que se pueden utilizar tanto para la obtención de imágenes como para la terapia simplemente cambiando el isótopo radiactivo que está integrado en el trazador. La principal tecnología utilizada en el campo de la medicina nuclear es la tomografía por emisión de positrones, abreviada, PET, que está disponible tanto para pequeños animales de laboratorio como para la práctica clínica. Con el PET, podemos cuantificar y localizar la acumulación de un trazador radiactivo en el interior de un cuerpo, lo que a su vez nos permite evaluar la viabilidad de nuevos trazadores en modelos de enfermedades de pequeños animales de laboratorio para su viabilidad en el uso clínico.

El principal reto experimental es disponer de un radiofármaco que sea apto para una inyección intravenosa. Además, hay un desafío en el modelo animal. Por un lado, queremos un modelo animal que imite la situación humana.

Y, por otro lado, queremos un modelo animal que sea reproducible y predecible, y esta es una combinación difícil. En el futuro, nuestro laboratorio seguirá centrándose en la obtención de imágenes y el tratamiento no invasivos del cáncer de mama. A pesar de varios avances en el campo de la oncología en los últimos años, todavía hay una alta tasa de mortalidad e incidencia de cáncer de mama.

Se vuelve especialmente complicado cuando este tipo de cáncer está metástasis, y utilizando imágenes moleculares no invasivas, nos gustaría mejorar el diagnóstico de estos pacientes. Y también con el uso de la radioterapia, nos gustaría aumentar sus tasas de supervivencia. Para comenzar, mida la actividad de la muestra conjugada de quelante de nanocuerpo radiomarcada en el tubo de microcentrífuga utilizando un medidor de actividad en la configuración correcta.

Localiza una muestra de 10 a 15 microlitros en la tira reactiva de pH para medir el pH. Localice un microlitro de la mezcla de reacción de radiomarcaje en una tira de TLC impregnada de sílice y deje que se seque durante un minuto. Llene la cámara TLC con ácido cítrico como fase móvil y pase la tira hasta que el líquido llegue a la parte superior de la tira.

Coloque la tira de TLC en un escáner de radio-TLC y mídala de acuerdo con el protocolo del fabricante. Calcule el rendimiento de radiomarcaje de la reacción utilizando el cromatograma de radio, dividiendo el área integrada bajo la curva de RF por el área total bajo la curva y multiplicando por 100. Después de inundar las líneas de HPLC durante 10 minutos con el disolvente correcto, ajuste la configuración para la medición utilizando el flujo isocrático de una mezcla 50-50 de acetonitrilo como disolvente A y una mezcla de solución de cloruro de sodio al 0,9% combinada con ácido trifluoroacético y solución de citrato como disolvente B. Mida la absorbancia UV a 280 nanómetros.

Diluir cinco microlitros del producto con 15 microlitros de cloruro de sodio al 0,9%. Inyecte 15 microlitros de la mezcla en la radio analítica HPLC. Con los ajustes descritos anteriormente, mida la señal radiactiva y la absorbancia UV del producto a 280 nanómetros.

El pequeño cambio en los tiempos de retención entre los canales UV y gamma se debe al diseño de la HPLC. A continuación, determine la pureza radioquímica integrando los picos en el canal gamma. Integre todos los demás picos en el canal gamma y evalúelos como impurezas.

Prepare una dilución de uno a 20 del producto con un volumen final de 150 microlitros utilizando agua certificada libre de endotoxinas. Inserte un cartucho de endotoxinas desechable precargado comercialmente con todos los reactivos necesarios en el lector de pruebas de endotoxinas. Cargue 25 microlitros del producto diluido en cada cámara del cartucho.

Después de ejecutar la prueba durante 15 minutos, el PTS incluye controles internos positivos y negativos. El producto se considera libre de endotoxinas si el contenido de endotoxinas es inferior a 8,7 unidades de endotoxinas por mililitro a un volumen máximo de 20 mililitros. El análisis de HPLC confirmó la pureza química y radioquímica del radiofármaco en un 98,2% y mostró una pequeña diferencia en el tiempo de retención entre el producto radiactivo y el compuesto de referencia no radiactivo.

El cromatograma TLC indicó una pureza radioquímica aparente del 99,9% para el nanocuerpo NM02 marcado con 68 galios. Comience llenando la jeringa con el marcador radiactivo dependiendo de la vía de administración. Mida la radiactividad del marcador con el medidor de actividad.

Para preparar un catéter de calibre 30, retira el eje de la aguja metálica de la aguja de calibre 30 cortándola con unas tijeras de metal o doblándola para separarla del plástico. Inserte manualmente un tubo PE-10 de 0,3 milímetros de diámetro en la parte del eje que se ha extraído del cubo. Llene el catéter de calibre 30 con tampón de cloruro de sodio al 0,9%.

Aplique un ungüento oftálmico en los ojos de un ratón anestesiado para evitar que se seque durante la sedación. Después de seleccionar la vena de la cola, gire ligeramente la cola para que la vena seleccionada entre en contacto con la estera calefactora y deje que se dilate durante un minuto. A continuación, gire el ratón a su posición lateral para que la vena seleccionada suba.

Fija la punta y la base de la cola con cinta adhesiva. Tome el catéter de calibre 30 con la mano dominante y coloque suavemente el dedo índice de la mano no dominante en la vena seleccionada para crear una reserva de sangre en el interior, formando una pequeña joroba. Con la mano dominante, coloque el catéter de calibre 30 paralelo a la cola frente a la joroba en la vena.

Mueva la mano dominante hacia adelante para asegurar la venopunción directa. Una vez dentro de la vena, el reflujo sanguíneo se hace visible en el tubo de plástico. Fije el tubo de plástico para asegurarse de que la aguja no se mueva dentro de la vena durante la inyección.

En el extremo libre del tubo, inserte la jeringa trazadora conectada a una aguja de calibre 30. Inyecte lentamente el contenido de la jeringa trazadora durante 10 segundos. Mientras mantiene la aguja de calibre 30 conectada al sistema de catéter, retire solo la jeringa trazadora y conecte una jeringa con tampón de cloruro de sodio al 0,9 % para enjuagar el catéter.

Retire el catéter de calibre 30 de la vena de la cola y use una compresa de algodón estéril para detener el sangrado. Calcule la actividad sobrante midiendo la actividad del catéter de calibre 30, la jeringa tampón, la jeringa trazadora vacía y la compresa de algodón con un medidor de actividad. Coloque el ratón sedado en posición ventral en la cama del animal y conéctelo al escáner PET.

Asegúrese de que la frecuencia respiratoria del ratón durante el escaneo esté entre 75 y 50 respiraciones por minuto. Fije el ratón detrás de su cuello a la cama del animal con cinta médica. Establezca el tiempo de adquisición en 45 minutos y seleccione la región de interés para escanear.

Introduzca la cantidad de actividad inyectada y el tiempo de inyección. A continuación, seleccione 68-galio como isótopo de estudio e inicie el escaneo. La imagen de TC delimitó claramente los riñones de ratón y permitió la evaluación ósea.

La imagen PET, utilizando una escala de valores de captación estandarizada de cero a 5,0, mostró una notable captación tumoral en el flanco izquierdo del ratón y un aclaramiento renal del trazador. La imagen de fusión PET-CT permitió una evaluación exhaustiva de la biodistribución de los trazadores. La proyección de la PET de máxima intensidad reveló actividad vesical urinaria, reforzando el aclaramiento renal del trazador.