Name: Imágenes de radiosíntesis, control de calidad y tomografía por emisión de positrones en animales pequeños de 68nanomoléculas marcadas con Ga (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Aprende la radiosíntesis y control de calidad de nanocuerpos marcados con 68Ga para imagen PET/CT en modelos animales de cáncer. Este método evalúa la viabilidad clínica de nuevos radiotrazadores teranósticos.

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<meta charset="utf8"></head><body>Radiosíntesis e imágenes PET/CT de 68nanocuerpos marcados con Ga en modelos de xenoinjertos

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Activity meter ISOMED 2010</td><td>Nuviatech Healthcare&nbsp;</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga MIKRO 185</td><td>Andreas Hettich GmbH & Co. KG</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>Pruebas de endotoxinas Endosafe nexgen-PTS</td><td>Charles</td> <td>River-Bloque</td><td></td></tr> <tr><td>calefactor NANOCOLOR VARIO C2</td><td>Macherey-Nagel</td><td>919350</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de HPLC, incluido el detector de radio</td><td>Knauer & Raytest-Software</td> <td>de análisis de</td><td></td></tr> <tr><td>imágenes Pmod 4.4&nbsp;</td><td>PMOD Technologies</td> <td>LLC-Sistema</td> PET/CT para <td></td></tr><tr><td>animales pequeños &beta;-CUBE y X-CUBE</td><td>Molecubes NV-TLC</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MiniGITA*</td><td>Elysia-Raytest</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.3 mm de diámetro diámetro PE10 tubo fisher</td><td>scientific</td><td>22-204008</td><td></td></tr><tr><td>aguja 30G</td><td>B|Braun</td><td>4656300</td><td></td></tr><tr><td>Filtro centrífugo; MWCO de 10 kDa, tira</td> de papel de cromatografía <td>Millipore</td><td>UFC501008</td><td></td>Millipore de 0,5 mL</tr><tr><td>Cartucho de</td> endotoxinas <td>SGI0001</td><td></td>de <td>Agilent Technologies</td></tr><tr><td>, sensibilidad de 0,05 UE/ml&nbsp;</td><td>Charles River</td><td>PTS-2005</td><td></td></tr><tr><td>Columna de HPLC Biosep SEC-s2000</td><td>Phenomenex-Tubo</td> <td>de</td><td></td></tr> <tr><td>microcentrífuga (1,5 mL)</td><td>Eppendorf</td><td>0030125150</td><td></td></tr><tr><td>Tira de pH 0,0 - 6,0</td><td>Merck KGaA</td><td>109531</td><td></td></tr><tr><td>Tira de pH 0-14</td><td>Merck KGaA</td><td>109535</td><td></td></tr><tr><td>PS-H+ Cartucho SPE</td><td>Macherey Nagel GmbH &; Co. KG</td><td>731861</td><td></td></tr><tr><td>Frasco estéril 10 mL</td><td>ALK Life Science Solutions</td><td>SEV100</td><td></td></tr><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>68Ge/68Ga-Generator</td><td>NRF-iThembaLABS-Ammoniumacetate</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Merck KGaA</td><td>101116</td><td></td></tr><tr><td>Ácido cítrico</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>100241</tr><tr><td>Ácido clorhídrico</td><td>Merck KGaA</td><td>320331</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Nanobody NM-02</td><td>Radiopharm Theranostics-P-SCN-Bz-DOTA-GA</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CheMatech</td><td>C115</td><td></td></tr><tr><td>Ácido trifluoracético</td><td>Merck KGaA</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Agua ultrapura</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>101262</tr></tbody></table>

imágenes de radiosíntesis, control de calidad y tomografía por emisión de positrones en animales pequeños de 68nanomoléculas marcadas con ga

Radiosynthesis, Quality Control, and Small Animal Positron Emission Tomography Imaging of 68Ga-Labelled Nano Molecules

Uno de los aspectos más importantes del control de calidad de un radiofármaco es mediante HPLC, ya que muestra no solo la pureza química y radioquímica (98,2% en este caso) sino que también permite demostrar la identidad del radiofármaco comparando el tiempo de elución y la forma del pico con el de un compuesto de referencia no radiactivo. Este compuesto de referencia es, en este caso, un nanocuerpo no marcado, que se ha demostrado que es el compuesto correcto mediante técnicas clásicas como la espectrometría de masas o la resonancia magnética nuclear. Estas técnicas no se pueden aplicar directamente al compuesto radiactivo (no hay suficiente masa para generar una señal), pero al comparar el compuesto radiactivo con su referencia, se reúnen suficientes pruebas de que el compuesto correcto fue efectivamente marcado y no alterado durante la síntesis. Obsérvese la pequeña diferencia en el tiempo de retención entre el producto radiactivo y la referencia de la Figura 1, correspondiente a la medición en serie del flujo de HPLC (primero se mide la radiación UV; el caudal tarda aproximadamente 0,2 minutos en llegar al detector de radiactividad en una configuración típica).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig01.jpg"> 
Figura 1: Cromatograma analítico típico de HPLC para el control de calidad de 68nanocuerpos marcados con Ga NM-02 (GLNM-02). La absorbancia UV del compuesto frío (es decir, el panel superior) se mide a 280 nm y muestra un pico a los 4,18 min, con un desplazamiento de 0,22 min. El pico del producto marcado con 68Ga se puede ver en el detector gamma (es decir, en el panel inferior). El rendimiento radioquímico es del 98,2%. mAU = mili unidades de absorbancia, NM-02 = nuestro producto, UV = canal de luz ultravioleta, nm = nanómetro, min = minuto, CPS = recuentos por segundo, GLMN-02 = 68nanocuerpo marcado con Ga NM-02, 68Ga-DOTA-GA = [68Ga]Ga-DOTA-GA, γ ChA = canal gamma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
En ausencia de HPLC o además de ella, TLC se puede utilizar para determinar el rendimiento del etiquetado y la pureza del producto final (pero no la identidad, y no es tan detallada como la HPLC). Debido a su baja complejidad, TLC es ideal cuando la vía de radiosíntesis aún se está optimizando. La Figura 2 muestra el cromatograma TLC de 68nanocuerpos NM-02 marcados con Ga (pureza radioquímica aparente del 99,9%).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig02.jpg"> 
Figura 2: Cromatograma analítico TLC típico para el control de calidad de 68nanocuerpos marcados con Ga NM-02 (GLNM-02). Los recuentos de área se trazan en función de la distancia recorrida por el solvente (citrato) en la placa TLC. El Rf es 0,2 y la pureza radioquímica es del 99,9%. C = Recuentos, mm = milímetro, GLNM-02 = 68nanocuerpo marcado con Ga NM-02, TLC = cromatografía en capa fina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
En el proceso de preparación de los datos de imágenes para su publicación, es una práctica estándar mostrar al menos una imagen de TC y PET independiente. Este enfoque permite una evaluación exhaustiva de la biodistribución de los trazadores. El escalado estándar de la TC está entre -1000 HU y 1000 HU, lo que permite la visualización de todos los tejidos blandos dentro de una sola ventana. Como se muestra en la Figura 3A, este método permite una demarcación clara de los riñones de ratón y, al mismo tiempo, permite la evaluación ósea.
Para la báscula PET, establezca el umbral inferior en un SUV de 0.0 mientras mantiene un umbral superior mínimo de 1.0 (Figura 3B), preferiblemente utilizando la normalización del peso corporal durante el cálculo del SUV (es decir, SUVbw). Además, para la cuantificación, se prefiere la media de SUVh en comparación con la SUVmax; si se usa el SUVmax, entonces use el promedio de los 10 vóxeles más calientes en lugar del valor del vóxel individual más caliente en el cálculo de SUVbw . Prepare fusiones de características de imágenes PET/CT fusionando los cortes de TC y PET (Figura 3C).
Para permitir a los lectores evaluar de forma independiente la biodistribución del trazador de cuerpo completo, la proyección de intensidad máxima de la misma exploración PET se puede presentar utilizando la misma escala que el corte de PET (Figura 3D).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig03.jpg"> 
Figura 3: Imágenes PET/CT in vivo de un ratón subcutáneo portador de tumores SKOV-3. La imagen se obtuvo 3 h después de la inyección intravenosa de 5 MBq 68Nanobody NM-02 marcado con Ga (GLNM-02). (A) La imagen CT se escala entre -1000 HU y 1000 HU, mientras que (B) la imagen PET está entre un SUV de 0.0 y 5.0. (C) La fusión PET/CT utiliza la misma escala. (D) La imagen PET de proyección de máxima intensidad (MIP) también se escala utilizando un SUV de 0.0 y 5.0. Todas las imágenes PET muestran una buena captación tumoral de GLNM-02 y el aclaramiento renal es claramente visible. TC = tomografía computarizada, PET = tomografía por emisión de positrones, MIP = proyección de intensidad máxima, HU = unidad de Hounsfield, SUV = valor de captación estandarizado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
En el caso específico del nanobody NM-02 marcado con 68Ga, se puede observar una notable absorción tumoral en el flanco izquierdo del ratón. Además, también es evidente el aclaramiento renal del trazador. Al presentar la proyección de intensidad máxima del PET, la actividad de la vejiga urinaria también se hace visible, reforzando el aclaramiento renal del trazador. En este caso específico, vale la pena mencionar que el riñón, el tumor y la vejiga no se pueden mostrar en el mismo corte 2D. Al incluir la proyección de máxima intensidad en las publicaciones, toda la biodistribución del trazador se presenta en una misma imagen.

Imágenes de radiosíntesis, control de calidad y tomografía por emisión de positrones en animales pequeños de 68nanomoléculas marcadas con Ga

Small animal Positron Emission Tomography (PET) and Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) imaging techniques are crucial in preclinical ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Demostramos la semi-automatizada síntesis radioquímica de [ 18 F] 3F4AP y procedimientos de control de calidad.

Síntesis radioquímica automatizada de [<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP: un nuevo trazador de PET para imágenes de enfermedades desmielinizantes

Se describe un protocolo para la preclínica en vivo rastreo de metástasis del cáncer. Se basa en un reportero con radionúclidos-fluorescencia combina el sodio yoduro symporter, detectado por tetrafluoroborato de no invasivo [18F]-PET y una proteína fluorescente para la confirmación de racionalización ex vivo . El método es aplicable para la preclínica en vivo de la célula de seguimiento más allá de la biología del tumor.

Gen reportero de radionúclido-fluorescencia de imagen para seguir la progresión del Tumor en modelos de roedores Tumor

Aquí, presentamos un protocolo para obtener68Ga dopado a base de óxido de hierro nanopartículas vía rápida basada en microondas síntesis de. La metodología hace PET/MRI (T1) las nanopartículas con radiolabeling eficiencias superiores al 90% y la pureza radioquímica del 99% en una síntesis de 20 minutos.

Síntesis de 68Ga dopado a base de óxido de hierro nanopartículas de doble emisión de positrones/proyección de imagen de resonancia magnética (T1)

Emisión de positrones tomografía (PET) de los sitios que participan en múltiples ensayos de investigación clínica temprana necesitan capacidades de fabricación robusto y versátil del radiotrazador. Con la radiosonda [18F] clofarabina como ejemplo, ilustramos cómo automatizar la síntesis de un radiotrazador utilizando un radiosynthesizer flexible, basada en cassette y validar la síntesis para uso clínico.

Automatización de un protocolo de emisión de positrones la tomografía (PET) radiosonda síntesis de producción clínica

Aquí, representamos un protocolo para el marcado radioeléctrico totalmente automatizado de [11C]SNAP-7941 y el análisis de la cinética en tiempo real de este PET-tracer en células de expresión y no expresión de P-gp.

Aspecto técnico de la síntesis automatizada y evaluación cinética en tiempo real de [11C]SNAP-7941

Este método estima la dosis absorbida de diferentes estructuras para la terapia de péptido-receptor-radionúclido (PRRT) con la posibilidad de evitar la superposición de órganos en proyecciones 2D. Las imágenes planas de todo el cuerpo en serie permiten estimar las dosis medias absorbidas a lo largo de todo el cuerpo, mientras que el enfoque híbrido, que combina imágenes planas e imágenes 3D-SPECT/CT, supera las limitaciones de la superposición de la estructura.

Un protocolo de dosimetría de todo el cuerpo para la terapia de radionúclidos de receptores de péptidos (PRRT): Imagen plana 2D y Métodos híbridos de imagen 2D+3D SPECT/CT

La síntesis de flúor-18 (18F) radiofármacos etiquetados para la tomografía por emisión de positrones normalmente requiere meses de experiencia. Cuando se incorpora en una radiosonda, el motivo del aceptador de fluoruro de silicio (SiFA) permite un protocolo simple de etiquetado de 18F que es independiente de los costosos equipos y entrenamiento preparatorio, al tiempo que reduce la cantidad de precursores necesarios y utiliza condiciones de reacción más suaves.

18 F-Etiquetado de Radiosondas Funcionalizado con un Aceptador de Fluoruro de Silicio (SiFA) para Tomografía por Emisión de Positrones

Este estudio desarrolló un método no invasivo y en tiempo real para evaluar la distribución del ligando de muerte programada 1 en todo el cuerpo, basado en imágenes tomográficas por emisión de positrones del antagonista del D-docapéptido [68Ga]. Esta técnica tiene ventajas sobre la inmunohistoquímica convencional y mejora la eficiencia de la identificación de los pacientes apropiados que se beneficiarán de la terapia de bloqueo de puntos de control inmunitario.

Desarrollo de un trazador PET de péptido D marcado con 68galios para la obtención de imágenes de la expresión del ligando de muerte programada 1

Este trabajo describe la producción automatizada de hasta 1,7 GBq de [68Ga]Ga-FAPI-46 en el sintetizador iPHASE MultiSyn para la obtención de imágenes PET de la proteína de activación de fibroblastos.

Una radiosíntesis automatizada de [68Ga]Ga-FAPI-46 para uso clínico rutinario

Este protocolo presenta un procedimiento detallado para preparar cuatro radiotrazadores de carbono-11 mediante el "método de bucle" [11C]metilación. Describimos el procedimiento para sintetizar [11C]ER-176, con datos de tres radiotrazadores adicionales: [11C]MRB, [11C]mHED y [11C]PiB. El método de bucle proporciona una síntesis eficiente con mayores rendimientos radioquímicos en comparación con la metilación tradicional de recipientes de reacción [11C].

Mejora de la eficiencia y el rendimiento de radiomarcaje de radioligandos de carbono-11 para la investigación clínica mediante el método de bucle

Esta investigación describe el proceso automatizado para la producción de [68Ga]Ga-3BP-3940 con el sintetizador GAIA V2, para la obtención de imágenes PET de la proteína de activación de fibroblastos. También se presentan los resultados de las pruebas de control de calidad realizadas en tres lotes de ensayo.

Preparación automatizada de [68Ga]Ga-3BP-3940 en un módulo de síntesis para la obtención de imágenes PET del microambiente tumoral

Aprende la radiosíntesis y control de calidad de nanocuerpos marcados con 68Ga para imagen PET/CT en modelos animales de cáncer. Este método evalúa la viabilidad clínica de nuevos radiotrazadores teranósticos.

Imágenes de radiosíntesis, control de calidad y tomografía por emisión de positrones en animales pequeños de 68nanomoléculas marcadas con Ga (Video) | JoVE Journal

Imágenes de radiosíntesis, control de calidad y tomografía por emisión de positrones en animales pequeños de ⁶⁸nanomoléculas marcadas con Ga

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