Un modelo de pancreatitis crónica obstructiva establecido mediante electrocoagulación
31 de octubre de 2025
El presente protocolo describe un enfoque novedoso para modelar la pancreatitis obstructiva crónica, que implica la visualización del conducto pancreático y la electrocoagulación del conducto pancreático para causar obstrucción del conducto pancreático.
Existen muchos métodos para construir modelos animales de pancreatitis crónica, incluida la inyección intraperitoneal de sodio y la ligadura del conducto pancreático, que tienen sus limitaciones. Nuestro equipo desarrolló recientemente un nuevo modelo de electrocoagulación de pancreatitis crónica en ratones, que tiene la ventaja de que no requiere medicamentos de inyección prolongada ni un método difícil de dominar. Y pueden establecer fácilmente un modelo de pancreatitis crónica.
El uso de la coagulación eléctrica para inducir pancreatitis crónica en ratones proporciona un modelo más conveniente y experimental, ofreciendo una vía prometedora para futuras investigaciones en este campo. Para comenzar, coloque el ratón anestesiado en una almohadilla térmica para mantener la temperatura corporal. Con una recortadora, afeita el vello entre el pecho y la parte inferior del abdomen.
A continuación, use unas tijeras para hacer una incisión de dos centímetros de largo en el abdomen central, seguida de una incisión de un centímetro entre la parte superior del abdomen y la apófisis xifoides. Use un expansor abdominal para ubicar el área del páncreas para la electrocoagulación. Con un hisopo de algodón estéril, identifique el duodeno de la parte posterior de la parte superior izquierda del abdomen y gírelo para visualizar el conducto biliar que conecta el hígado.
Ocluir temporalmente el conducto biliar común proximal con un clip microvascular para evitar la infusión retrógrada en el hígado. Conecte el tubo de polietileno de 0,25 por 0,35 milímetros a una aguja de 0,25 milímetros y perfore el área circundante de la ampolla, apuntando a la papila duodenal grande. Inserte el tubo en la papila y páselo hasta la mitad del conducto biliar, luego detenga la entrada.
Encienda la bomba de infusión e infunda una solución de azul de metileno al 0,2% hasta que el conducto pancreático se vuelva azul. Después de la infusión, saque el tubo de polietileno y retire el clip microvascular. Use hisopos de algodón estériles para fijar el páncreas y dirija el bisturí de electrocoagulación al área de color azul.
Después de configurar los parámetros operativos de la electrocoagulación, use cobre puro como material de electrodo y aplique el tratamiento al páncreas durante dos o tres segundos evitando los vasos sanguíneos. Continúe la electrocoagulación hasta que la región teñida de azul de metileno cambie de color a amarillo o marrón. Cuando la solución de tinción azul ya no sea visible en el páncreas, detenga la electrocoagulación.
Después de la cirugía, coloque el ratón en una caja de polietileno forrada con material de cama. Después de la electrocoagulación del conducto pancreático, anestesiar al ratón y colocarlo en una plataforma quirúrgica. Para recolectar sangre a través del plexo orbitario, sostenga suavemente la piel de la parte posterior para crear una ligera protuberancia del globo ocular.
Luego, coloque el extremo de un tubo capilar en la esquina del ojo e insértelo suavemente debajo del globo ocular en un ángulo de 30 a 45 grados. Gire el capilar hasta que la sangre comience a fluir. Después de la recolección de sangre, cierre los párpados aplicando una presión suave con una gasa.
Centrifugar la sangre a 1,200 g durante 15 minutos y recoger el sobrenadante en un nuevo tubo. Mida la amilasa, la bilirrubina y el ácido hialurónico utilizando kits disponibles en el mercado, siguiendo las recomendaciones del fabricante. A continuación, coloque el ratón sacrificado en la mesa de operaciones a cuatro grados centígrados.
Con tijeras y fórceps, haga una incisión en V en la pared abdominal para exponer la cavidad abdominal. Retire el páncreas y divídalo en tres partes para teñirlo. Fije el páncreas en una solución de poliformaldehído al 4%, luego incruste el páncreas fijo en parafina para seccionarlo.
Corte los bloques de parafina en secciones de 0,5 milímetros de espesor y tiñéndalos con hematoxilina y eosina, así como con la tinción de Masson para el análisis inmunohistoquímico. Observe el tejido pancreático teñido bajo un microscopio óptico. La tinción con hematoxilina-eosina mostró células acinares pancreáticas dispersas y evidencia de pancreatitis crónica en el grupo de electrocoagulación el día 14.
El día 28, se observaron signos de recuperación tisular y reversión de la patología en las células acinares pancreáticas. La tinción de Masson reveló significativamente más fibrosis en el grupo de electrocoagulación en comparación con el grupo simulado. La tinción inmunohistoquímica mostró niveles elevados de alfa uno, colágeno tipo uno y actina alfa músculo liso en el grupo de electrocoagulación, lo que indica un mayor grado de pancreatitis crónica.
Los niveles de ácido hialurónico aumentaron en el grupo de electrocoagulación, alcanzando su punto máximo alrededor del día 21, mientras que permanecieron estables en el grupo simulado. Los niveles de bilirrubina aumentaron significativamente en el día 14 en el grupo de electrocoagulación, mostrando un pico alrededor del día 21, mientras que el grupo simulado no mostró cambios. Los niveles de amilasa en el grupo de electrocoagulación aumentaron el día 14, seguidos de una disminución en el día 28, y el grupo simulado mostró poca variación.
Visión general
Este protocolo describe un método novedoso para modelar pancreatitis obstructiva crónica en ratones mediante electrocoagulación del conducto pancreático. Este enfoque simplifica el proceso de inducción de pancreatitis crónica en comparación con los métodos tradicionales.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología
- Investigación en pancreatitis crónica
Antecedentes
- La pancreatitis crónica es una condición debilitante con métodos de modelado efectivos limitados.
- Los modelos tradicionales a menudo requieren procedimientos complejos o administración de medicamentos a largo plazo.
- La electrocoagulación presenta una alternativa menos invasiva para inducir pancreatitis crónica.
- Este estudio tiene como objetivo refinar el modelo para una mejor reproducibilidad y facilidad de uso.
Propósito del estudio
- Desarrollar un modelo confiable de electrocoagulación para pancreatitis crónica en ratones.
- Evaluar los cambios patológicos en el tejido pancreático después de la electrocoagulación.
- Evaluar los marcadores bioquímicos asociados con la pancreatitis crónica.
Métodos utilizados
- Electrocoagulación del conducto pancreático en ratones anestesiados.
- Infusión de azul de metileno para visualizar el conducto pancreático.
- Análisis histológico del tejido pancreático utilizando tinción hematoxilina-eosina y de Masson.
- Medición de niveles de amilasa sérica, bilirrubina y ácido hialurónico.
Principales resultados
- Se observó evidencia histológica de pancreatitis crónica en ratones electrocoagulados.
- Se notó un aumento de fibrosis en comparación con el grupo de control.
- Los marcadores bioquímicos mostraron cambios significativos, indicando la gravedad de la condición.
- Se observaron signos de recuperación en las células acinares pancreáticas con el tiempo.
Conclusiones
- El modelo de electrocoagulación induce eficazmente pancreatitis crónica en ratones.
- Este método ofrece un enfoque más simple y reproducible para futuras investigaciones.
- Los hallazgos contribuyen a la comprensión de la fisiopatología de la pancreatitis crónica.
Preguntas frecuentes
Executive Industry Relevance
Robust preclinical models of chronic pancreatitis are essential for target validation and mechanistic de-risking in early-stage drug discovery. The electrocoagulation-based mouse model offers a reproducible and operationally accessible platform for evaluating disease mechanisms and candidate interventions. This model addresses key limitations of traditional approaches, supporting predictive confidence and translational continuity in pancreatic disease research portfolios.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of fibrotic and inflammatory pathways relevant to chronic pancreatitis.
- Supports functional target validation by recapitulating hallmark pathological features.
- Facilitates mechanistic de-risking through quantitative biochemical and histological outputs.
Screening & Assay Development
- Provides a standardized in vivo system for evaluating candidate therapeutics targeting pancreatic fibrosis and inflammation.
- Delivers reproducible quantitative readouts, including serum amylase, bilirubin, and hyaluronic acid levels.
- Enables histological assay development using HE and Masson staining for fibrosis assessment.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant endpoints observed in human chronic pancreatitis.
- Supports continuity from discovery through preclinical validation by modeling progressive and reversible pathology.
- Facilitates risk-adjusted advancement decisions based on biomarker and histopathological alignment.
Pipeline & Workflow Integration
This electrocoagulation model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for pancreatic disease research and therapeutic evaluation.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing of fibrotic and inflammatory mechanisms in a controlled in vivo context.
- Screening: Provides a reproducible platform for quantitative assessment of candidate interventions.
- Analytics: Supports comparative analysis of biochemical and histological markers across experimental conditions.
- Translational Research: Models disease progression and partial recovery, mirroring clinical trajectories.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable and accessible model for cross-program application in pancreatic research portfolios.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in target and pathway evaluation.
- Operational Value: Streamlines model establishment and standardizes data outputs for cross-study comparability.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and capital allocation by providing robust preclinical evidence.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of pancreatic disease programs based on translationally relevant data.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency and familiarity with small animal handling.
- Necessitates access to electrocoagulation instrumentation and histological analysis infrastructure.
- Demands standardized protocols for reproducibility across research teams.
- Adaptation to other rodent strains or disease models may require protocol optimization.
- Model outputs are limited to chronic pancreatitis features and may not capture all aspects of human disease heterogeneity.
