Modelización de la hidrocefalia poshemorrágica de la prematuridad en ratas
March 28th, 2025
La hidrocefalia poshemorrágica del prematuro (PHHP, por sus siglas en inglés) se puede modelar en ratas neonatas mediante la combinación de corioamnionitis y hemorragia intraventricular. La combinación de estos eventos prenatales y postnatales recapitula con precisión las características clínicas distintivas de la PHHP, incluida la macrocefalia, la ventriculomegalia y la presión intracraneal elevada, a lo largo de la vida.
Nuestro laboratorio busca caracterizar los mecanismos fisiopatológicos celulares y moleculares de diferentes lesiones cerebrales perinatales, con un interés específico en la hidrocefalia posthemorrágica de la prematuridad, o PHHP. Nuestro objetivo es descubrir terapias novedosas y traducibles para estas enfermedades desafiantes. Este protocolo nos ayuda a comprender mejor el daño causado al cerebro en desarrollo tras una hemorragia intraventricular y una hidrocefalia.
Con este modelo, estamos descubriendo posibles estrategias para revertir ese daño cerebral y desarrollar tratamientos nuevos y menos invasivos. Este protocolo recapitula características clínicas esenciales de la PHHP en ratas combinando corioamnionitis in utero y IVH posnatal utilizando glóbulos rojos lisados. El protocolo proporciona a ratas con macrocefalia sostenida, ventricularomegalia, aumento de la presión intracraneal y discapacidad funcional hasta la edad adulta, facilitando estudios PHHP traslacionales con un espectro completo de medidas de resultado.
Para empezar, obtén sangre de un macho y una hembra de rata Sprague-Dawley en el primer día posnatal de una camada que experimentó corioamnionitis in utero en el día embrionario 18. Haz un vórtice en el pozo del tubo para mezclar el contenido. Con unas tijeras quirúrgicas pequeñas, corta y pica cualquier coágulo de sangre en el tubo.
Centrifuga la suspensión sanguínea a 500g durante 10 minutos a cuatro grados Celsius. Quita el sobrenadante. Resuspende el pellet en 0,2 mililitros de solución fisiológica estéril y haz un buen vórtice para asegurar una mezcla adecuada.
Corta y pica cualquier coágulo residual en la suspensión tras el vórtice usando unas tijeras quirúrgicas pequeñas. Tras la centrifugación final, añade 0,25 mililitros de solución salina estéril al pellet y haz un vórtice en el tubo para mezclar el contenido. Coloca la suspensión sobre hielo seco durante cinco minutos.
Ahora transfiere la suspensión a una incubadora a 37,5 grados Celsius durante cinco minutos hasta que se descongele completamente, y vórtice la suspensión bien después de descongelarla. Repite los ciclos de congelación y descongelación tres veces en total. Tras el deshielo final, haz un vórtice en el tubo y realiza un giro rápido en la centrífuga.
Coloca una pequeña plataforma sobre hielo húmedo y coloca una toallita seca de laboratorio sobre la plataforma para proteger la piel del cachorro durante el procedimiento. Después de anestesiar al cachorro por hipotermia, coloca una lámpara quirúrgica externa en los ajustes más brillantes. Transilumina el cráneo para visualizar los ventrículos laterales a través del cráneo.
Utiliza una jeringuilla de insulina de 0,3 milímetros y ocho milímetros de largo y calibre 31 con una aguja percutánea ultrafina para inyectar 20 microlitros de glóbulos rojos lisados en el ventrículo lateral derecho. Las ratas con hidrocefalia posthemorrágica de prematuridad, o PHHP, presentaron cráneos agrandados y abovedados y macrocefalia, como lo demuestra una medida sustituta aumentada de la circunferencia cefálica observable en juveniles. Las ratas con PHHP presentaron mayor distancia intra-aural y presión intracraneal incrementada en el día 21 posnatal en comparación con los controles simulados.
La ventricularomegalia y el aumento del volumen ventricular en ratas con PHHP fueron visibles mediante resonancia magnética, confirmados por comparación con controles simulados.
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Visión general
Este estudio modela la hidrocefalia posthemorrágica de la prematuridad (HPHPP) en ratas neonatales combinando corioamnionitis y hemorragia intraventricular. El modelo replica características clínicas clave de la HPHPP, incluyendo macrocefalia y ventriculomegalia, proporcionando información sobre posibles terapias.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología del desarrollo
- Fisiopatología
Antecedentes
- La HPHPP es una condición significativa que afecta a los bebés prematuros.
- Entender sus mecanismos puede llevar a mejores opciones de tratamiento.
- El estudio utiliza un modelo de rata para imitar la HPHPP humana.
- La hemorragia intraventricular y la corioamnionitis son factores críticos en este modelo.
Propósito del estudio
- Caracterizar los mecanismos celulares y moleculares de la HPHPP.
- Identificar posibles terapias para lesiones cerebrales relacionadas con la HPHPP.
- Desarrollar un modelo que refleje las características clínicas de la HPHPP.
Métodos utilizados
- Combinación de corioamnionitis in utero y hemorragia intraventricular posnatal.
- Uso de glóbulos rojos lisados para inyección en el ventrículo lateral.
- Evaluación de macrocefalia, ventriculomegalia y presión intracraneal.
- Utilización de resonancia magnética para evaluar el volumen ventricular.
Resultados principales
- Las ratas exhibieron macrocefalia y ventriculomegalia sostenidas.
- Se observó una presión intracraneal aumentada en las ratas afectadas.
- Las características clínicas fueron confirmadas mediante imágenes de resonancia magnética.
- El modelo facilita estudios traslacionales sobre la HPHPP.
Conclusiones
- El modelo de rata imita efectivamente la HPHPP y sus características clínicas.
- Este modelo puede ayudar en el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas.
- Entender los mecanismos de la HPHPP es crucial para mejorar los resultados en los bebés afectados.
