Establecimiento de un modelo de ratón de endometrio delgado

El endometrio delgado ha sido ampliamente reconocido como la causa crítica de la infertilidad. Los estudios sobre la patogénesis del endometrio delgado se basan en modelos animales, por lo que la selección de un modelo adecuado es crucial. Aquí, describimos un protocolo detallado que produce un modelo endometrial delgado confiable y reproducible en ratones.

La operación es traumática, ya que necesitamos diseccionar el ratón y exponer el cuerno uterino del ratón para su manipulación. Una operación incorrecta puede causar infección o incluso provocar la muerte de los ratones. De hecho, se necesita una formación y experiencia cuidadosas antes de la operación experimental.

Desarrollamos con éxito un modelo endometrial con un tiempo de infusión que oscila entre uno y tres minutos para replicar los diversos grados de síntomas endometriales delgados observados en casos clínicos. Esto nos permite crear modelos con diferentes niveles de daño, dependiendo de las necesidades específicas de nuestra investigación. El método utilizado en nuestro protocolo ofrece la ventaja de bajo costo, idoneidad y período experimental.

Estudia el mecanismo patológico y el tratamiento en tres técnicas iniciales en comparación con otras técnicas. Para comenzar, coloque el ratón anestesiado en decúbito supino sobre la mesa de operaciones precalentada y, con cinta médica, asegure las extremidades del ratón. Empleando tijeras y pinzas estériles, realice una incisión de un centímetro en el abdomen, ubicada aproximadamente a un centímetro del orificio uretral, que se extiende hasta la cavidad peritoneal.

Aparta suavemente las vísceras con pinzas estériles para localizar el útero. Exponga el cuerno uterino derecho y aplique pinzas hemostáticas en el extremo proximal cerca del cuello uterino y en el extremo distal cerca del ovario. Con una jeringa de calibre 25, instilar aproximadamente 50 microlitros de etanol al 95% en la cavidad uterina, sosteniendo la aguja paralela al cuerno uterino.

Mantenga la jeringa de uno a cinco minutos, según corresponda. Luego, retire el etanol de la cavidad uterina y enjuague la cavidad uterina con solución salina estéril cinco veces para eliminar cualquier resto de etanol. Ahora, retire las pinzas hemostáticas y devuelva el útero y las vísceras a su posición original.

Utilizando suturas quirúrgicas reabsorbibles 5/0, suturar el peritoneo, seguido de la epidermis. Para comenzar, coloque un modelo de ratón de endometrio delgado sacrificado en la mesa de disección y corte las suturas con tijeras quirúrgicas para exponer el útero. Luego, con pinzas quirúrgicas, extraiga todo el útero con cuidado y separe el útero de las vísceras circundantes.

Retire inmediatamente ambos cuernos uterinos y divida cada cuerno en tres o cuatro segmentos pequeños. Coloque los tejidos uterinos en un mililitro de paraformaldehído al 4% tomado en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros. Coloque las muestras fijadas en formol en casetes de tejido y transfiera los casetes de tejido a través de una serie de concentraciones de etanol, seguidas de xileno y parafina.

Llene un molde de cera con cera de parafina fundida calentada a 55 grados centígrados. Utilice pinzas calientes para transferir rápidamente los segmentos de tejido infiltrados del casete de inclusión al molde de cera. Una vez que los segmentos de tejido estén colocados correctamente, coloque la parte inferior del casete de inclusión encima del molde de histología.

A continuación, coloque el molde directamente sobre una placa de enfriamiento ajustada a cuatro grados centígrados durante al menos 20 minutos para que la parafina se solidifique. Luego, retire la muestra del molde y use un recortador de parafina para recortar el exceso de cera a su alrededor. El grosor del endometrio y el número de glándulas endometriales disminuyeron significativamente en los grupos de uno, dos y tres minutos en comparación con el grupo de control.

Se observó una adherencia uterina severa y una cavidad uterina casi invisible en los grupos de cuatro y cinco minutos, y no se encontraron glándulas endometriales. La fibrosis endometrial aumentó con la duración de la infusión de etanol, como lo demuestra la tinción excesiva en grupos de uno a cinco minutos en comparación con el control.