Name: Establecimiento de un modelo de ratón de endometrio delgado (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 26 s
Description: Aprenda a establecer un modelo de endometrio delgado en ratones mediante inyección de etanol al 95% en el útero. Este protocolo reproducible simula grados variables de daño endometrial para investigar la infertilidad.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modelo de ratón de endometrio fino optimizado con baja mortalidad y adherencias mínimas

<ol><li>Mahajan, N., Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endometrium+in+assisted+reproductive+technology%3A+How+thin+is+thin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hum+Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">The endometrium in assisted reproductive technology: How thin is thin.</a> J Hum Reprod Sci. 9 (1), 3-8 (2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Máquina de anestesia</td><td>RWD Life Science</td><td>R530</td><td>Máquina de anestesia inhalatoria móvil para animales pequeños</td></tr><tr><td>0.9% salina</td><td>Hubei Kelun Pharmaceutical&nbsp;</td><td>C230817A2</td><td>10 mL, inyección médica</td></tr><tr><td>75% etanol</td><td>LIRCON 6303060031</td><td></td><td>500 mL, reactivo desinfectante</td></tr><tr><td>95% etanol</td><td>Guangzhou Chemical Reagent Factory</td><td>64-17-5</td><td>500 mL, reactivo químico</td></tr><tr><td>Suturas absorbibles</td><td>Jinhuan Medical</td><td>CR537</td><td>Espesor: 5-0; Longitud: 90 cm</td></tr><tr><td>Amoníaco acuoso</td><td>MilliporeSigma</td><td>1336-21-6</td><td>1000 mL, reactivo químico</td></tr><tr><td>Procesador automático de tejidos</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td>100 cajas de inclusión se pueden procesar a la vez</td></tr><tr><td>C57BL/6 ratones&nbsp;</td><td>Centro de Animales Experimentales de la Universidad Médica del Sur&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y</td><td></td><td>BASO BA4024</td><td>1000 mL, utilizado para la tinción de secciones de parafina, secciones congeladas, etc</td></tr>. <tr><td>Hematoxilina</td><td>BASO</td><td>BA4041</td><td>1000 mL, utilizado para la tinción de secciones de parafina, secciones congeladas, etc</td></tr>. <tr><td>Plataforma de análisis de imágenes HALO Laboratorios</td> Indica El instrumento se caracteriza por su facilidad de uso y escalabilidad, sus <td>potentes capacidades analíticas</td><td></td><td>y su procesamiento más rápido velocidad</td></tr><tr><td>Pinzas hemostáticas</td><td>HUAYON</td><td>18-5021</td><td>1,8 cm de longitud total con mandíbula de 0,7 cm</td></tr><tr><td>Pinza hemostática</td><td>HUAYON</td><td>18-5020</td><td>10 cm de longitud</td></tr><tr><td>total Microtomo rotativo HistoCore</td><td>Leica</td><td>149BIO000C1</td><td>El grosor de la rebanada varía de 1 a 60 &mu; m</td></tr><tr><td>Indorphor</td><td>ADF</td><td>1005</td><td>500 mL, reactivo desinfectante</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD Life Science</td><td>R510-22-10</td><td>100 mL, ingrediente activo 100% isoflurano</td></tr><tr><td>Tinción tricrómica de Masson</td><td>SOLARBIO</td><td>G1340</td><td>7 &times; 100 mL para 100 pruebas</td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio</td><td>Gene Tech</td><td>GT100511</td><td>Longitud: 75 cm; Ancho: 25 cm</td></tr><tr><td>Centro modular de inclusión de tejidos</td><td>Leica</td><td>EG1150 C</td><td>El instrumento contiene una etapa fría y un módulo de distribución de parafina calentada, lo que proporciona flexibilidad para el trabajo de incrustación</td></tr><tr><td>Resina natural</td><td>SAKURA</td><td>4770</td><td>Película recubierta de resina, adecuada para la tinción histológica</td></tr><tr><td>Olympus SLIDEVIEW VS200</td><td>PANOVUE</td><td>VS200</td><td>El instrumento captura imágenes de diapositivas virtuales de alta calidad y permite el análisis cuantitativo avanzado de imágenes&nbsp;</td></tr><tr><td>Solución fija de paraformaldehído</td><td>Servicebio</td><td>G1011</td><td>500 mL, fijador tisular universal (neutro)</td></tr><tr><td>Pinza quirúrgica</td><td>HUAYON</td><td>18-1300</td><td>2,2 mm recta, 12,5 cm de ancho</td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas</td><td>HUAYON</td><td>18-0110</td><td>10 cm, acero inoxidable tijeras quirúrgicas</td></tr><tr><td>Jeringa</td><td>Kindly</td><td>60017031</td><td>1 mL, jeringa estéril desechable con aguja</td></tr><tr><td>Pañuelo casetes</td><td>CITOTEST</td><td>80106-1100-16</td><td>Blanco; ranuras de flujo; tapa integral de 0ne-pieza; las áreas de etiquetado están ubicadas en tres lados</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Prisma Plus</td><td>SAKURA</td><td>DRS-Prisma-P-JCS</td><td>La capacidad de procesamiento es de 60 portaobjetos a la vez</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Guangdong Guanghua Sci-Tech</td><td>1330-20-7</td><td>1000 mL, solvente orgánico</td></tr></tbody></table>

establecimiento de un modelo de ratón de endometrio delgado

Establishing a Mouse Model of Thin Endometrium

Las características clave del endometrio delgado (TE) son la disminución del grosor endometrial y la densidad glandular, junto con el aumento de la fibrosis endometrial. Este método replicó con éxito estas características en los ratones modelo. El análisis de los datos reveló una disminución significativa del grosor endometrial en el grupo de 1 min (222,3 μm ± 13,96 μm vs. 359,2 μm ± 12,41 μm, P &lt; 0,05), el grupo de 2 min (168,7 μm ± 17,57 μm vs. 359,2 μm ± 12,41 μm, P &lt; 0,05) y el grupo de 3 min (131,8 μm ± 3 μm vs. 359,2 μm ± 12,41 μm, P &lt; 0,05) en comparación con el grupo control. Sin embargo, no se observaron diferencias significativas en el grosor endometrial entre los grupos de 2 min y 3 min (168,7 μm ± 17,57 μm vs. 131,8 μm ± 3 μm, P &gt; 0,05) (Figura 3A,B).
El número de glándulas endometriales se redujo significativamente en el grupo de 1 min (4,4 ± 2,38 vs. 24,4 ± 1,6, P &lt; 0,05), en el grupo de 2 min (0,8 ± 0,49 vs. 24,4 ± 1,6, P &lt; 0,05) y en el grupo de 3 min (4,4 ± 3,20 vs. 24,4 ± 1,6, P &lt; 0,05) en comparación con el grupo control (Figura 3A,C). Sin embargo, no se observaron diferencias significativas en el número de glándulas endometriales entre los grupos de 1 minuto, 2 minutos y 3 minutos.
Dado que la TE se produjo después del tratamiento con etanol al 95% durante 7 días, se planteó la hipótesis de que el grosor del endometrio podría estar asociado con la duración de la infusión. Para investigar esto, dos grupos adicionales fueron tratados con etanol al 95% durante 4 min y 5 min, respectivamente. Curiosamente, los resultados mostraron una adherencia uterina severa cuando aumentaba el tiempo de infusión. (Figura 4), con la cavidad uterina volviéndose casi invisible. Además, no se observaron glándulas endometriales en el útero de ratón con el tiempo de infusión prolongado (Figura 4).
Además, el nivel de fibrosis endometrial aumentó con la duración de la infusión de etanol al 95%, como lo confirmó la tinción de Masson, lo que indica una fibrosis excesiva en el endometrio dañado (Figura 5A,B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig01.jpg"> 
Figura 1: Diagrama de flujo del establecimiento del modelo de ratón TE. Todo el procedimiento incluye los siguientes pasos: Primero, se permitió que los ratones se aclimataran durante 1 semana antes del experimento. A continuación, se monitorizaron dos ciclos estrales. A continuación, se seleccionaron los ratones del tercer estro para el establecimiento del modelo inyectando etanol al 95% en la cavidad uterina. Siete días después de la inyección de etanol, se sacrificaron los ratones y se recolectaron los cuernos uterinos para su posterior tinción de HE y análisis de tinción de Masson. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig02.jpg"> 
Figura 2: Identificación del celo en ratones. (A) El proestro se caracteriza por el predominio de células epiteliales nucleadas (flecha). (B) El estro se caracteriza por el predominio de células epiteliales queratinizadas anucleadas (asteriscos). (C) El metestro se caracteriza por una combinación de células epiteliales queratinizadas anucleadas y neutrófilos (triángulo). (D) El diestro se caracteriza por una combinación de neutrófilos, células epiteliales nucleadas y un bajo número de células queratinizadas anucleadas. Aumento objetivo de 20x. Barras de escala = 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig3v2.jpg"> 
Figura 3: Procedimiento para la inducción de TE por infusión de etanol al 95%. (A) Los ratones se anestesian con una máquina de anestesia. (B) Se elimina el vello abdominal. (C) Se realiza una incisión de 1 cm a 1 cm del orificio uretral. (D) El útero está localizado, y un lado del cuerno uterino está expuesto. (E) Las pinzas hemostáticas se aplican en ambos lados del cuerno uterino. (F) Se instila etanol al 95% en el cuerno uterino y luego se enjuaga con solución salina estéril. (G) Se retiran las pinzas y se vuelve a colocar el útero. (H) Se sutura la incisión. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig04.jpg"> 
Figura 4: Observación de la morfología endometrial en ratones mediante tinción HE al microscopía. (A) Se examinó la morfología del endometrio en los lados lesionado y control. Al útero del lado derecho se le inyectó etanol al 95%, mientras que al útero del lado izquierdo se le inyectó suero fisiológico estéril como control. Barras de escala = 200 μm. (B) Comparación del grosor endometrial entre los grupos Con, 1 min, 2 min y 3 min. (C) Comparación del número de glándulas en el endometrio entre los grupos Con, 1 min, 2 min, 3 min, 4 min y 5 min. Con, control; **P &lt; 0,01, ****P &lt; 0,0001 con ANOVA de un factor. Los datos se representan como la media ± error estándar de la media. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67084/67084fig05.jpg"> 
Figura 5: Fibrosis endometrial en el endometrio de ratón. (A) Se utilizó la tinción tricrómica de Masson para evaluar la fibrosis endometrial, donde el color azul indica la distribución de las fibras de colágeno, en los grupos de tratamiento indicados. Barras de escala = 200 μm. (B) Un gráfico de barras resumido muestra el nivel de fibrosis de colágeno entre los diferentes grupos. **P &lt; 0,01, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001 con ANOVA de un factor. Los datos se representan como la media ± error estándar de la media. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67084/67084fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Establecimiento de un modelo de ratón de endometrio delgado

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory ...

establishing-a-mouse-model-of-thin-endometrium

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Una descripción de la inducción quirúrgica de la endometriosis en ratones y ratas por auto-trasplante de tejido uterino de la cascada arterial del mesenterio intestinal.

Modelo de ratón de la endometriosis quirúrgicamente inducida por la Auto-trasplante de tejido uterino

Aquí, presentamos un protocolo para obtener imágenes en vivo de fluorescencia etiquetadas fragmentos de endometrio humanos injertado en ratones. El método permite estudiar los efectos de los fármacos de elección en el tamaño de la lesión endometriotic a través del monitoreo y cuantificación de la fluorescencia emitida por el reportero fluorescente en tiempo...

Monitoreo no invasivo del tamaño de la lesión en un modelo de ratón heterólogos de la Endometriosis

Muchos modelos de roedores de endometriosis están limitados por la complejidad técnica, la reproducibilidad y / o la necesidad de animales inmunocomprometidos o ratones reporteros especiales. Presentamos un sistema simplificado de inducción de lesiones utilizando cualquier ratón experimental con un sistema de puntuación objetivo verificable de forma independiente y sin necesidad de ovariectomía o cirugía de supervivencia.

Un modelo murino singénico de endometriosis utilizando ratones de ciclo natural

Este protocolo describe metodologías para establecer organoides epiteliales endometriales de ratón para la expresión génica y análisis histológicos.

Establecimiento de organoides endometriales 3D a partir del útero del ratón

Este estudio presenta un nuevo modelo de ratón diseñado específicamente para simular el endometrioma, un subtipo clínicamente significativo de endometriosis. Mediante la utilización de ratones C57BL/6J, el modelo tiene como objetivo dilucidar los mecanismos fisiopatológicos que subyacen a la infertilidad relacionada con el endometrioma, ofreciendo una herramienta refinada para cerrar la brecha de conocimiento actual en medicina reproductiva.

Establecimiento de un modelo experimental de endometrioma en ratones para estudiar su infertilidad relacionada

Este video demuestra la preparación de un diseño ultra-delgado de matriz / analito capa para el análisis de péptidos y proteínas por láser asistida por matriz de desorción ionización espectrometría de masas (MALDI-MS).

MALDI preparación de la muestra: el método de ultra capa fina

El presente método permite criostato reproducible la sección de los pequeños trozos de tejido, difícil de manejar, tales como las biopsias y las rodajas de cerebro. Utilizamos una etapa de aluminio de congelación sencillo para facilitar la manipulación de los tejidos y un criostato de rutina estándar para producir secciones 5-10 micrones de serie a partir de 400 rebanadas de cerebro micras de espesor.

El corte delgado de los preparativos de círculo para inmunohistoquímica

Inyección intravítrea es una técnica ampliamente utilizada en la investigación de las ciencias visuales de enfermedades oculares o en la aplicación directa del tratamiento local. Este vídeo demuestra un protocolo de inyección intravítrea con una jeringa de 1 ml con una pipeta de vidrio. Consejos útiles acerca de cómo evitar una hemorragia masiva y daños en el objetivo se les da.

Inyección intravítrea para el establecimiento de modelos Enfermedades Oculares

Ortotópico modelos animales de cáncer de ovario reproducir mejor las enfermedades humanas y por lo tanto, mejorar nuestra comprensión de la progresión del cáncer y la respuesta del tumor a la terapia. Un modelo de ratón recibe una inyección intrabursal de luciferasa que expresan las células tumorales de ovario. El tratamiento se administra a través de una sonda nasogástrica. El crecimiento del tumor está controlado...

En vivo de imágenes y tratamientos terapéuticos en un modelo de ratón ortotópico de cáncer de ovario

Generación de células madre pluripotentes inducidas (IPSC) Líneas produce líneas con diferente potencial de desarrollo aún cuando pasan las pruebas estándar de pluripotencia. Aquí se describe un protocolo para producir ratones totalmente derivadas de iPS, que define las líneas de IPSC como poseedor completo...

Generación de ratones derivados de células madre pluripotentes inducidas

Aprenda a establecer un modelo de endometrio delgado en ratones mediante inyección de etanol al 95% en el útero. Este protocolo reproducible simula grados variables de daño endometrial para investigar la infertilidad.

Establecimiento de un modelo de ratón de endometrio delgado

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