Procedimientos de Operación y Biocontención de una Instalación para Ratones de Laboratorio con un Microbioma Natural: Procedimiento de Inmunofenotipado

Investigamos los efectos de la nutrición en el sistema inmunológico. Y estamos particularmente interesados en los efectos antienvejecimiento y antiinflamatorios de la restricción calórica y los regímenes de ayuno, y en el papel de la microbiota en estos procesos. Los ratones salvajes combinan el fondo genético bien caracterizado de las cepas de ratones de laboratorio y el microbioma natural de los ratones que deambulan libremente.

Sin embargo, el microbioma natural de estos ratones salvajes contiene virus, bacterias y también parásitos, por lo que supone un reto para las instalaciones de cría de animales. La contribución del Centro QUEST para la Investigación Responsable fue el desarrollo del marco de las seis R, que mejora las tres R que conocemos de Russell y Burch, reemplazo, refinamiento y reducción, mediante la incorporación de tres R adicionales: solidez, registro e informes. Este marco tiene como objetivo mejorar la reproducibilidad y la transparencia de la investigación preclínica.

Y la idea es que los hallazgos experimentales sean más fiables, dignos de confianza y, en última instancia, trasladables a los contextos clínicos. Durante los últimos cuatro años, hemos desarrollado el concepto de una instalación para ratones salvajes con distintos procedimientos de biocontención. Nos gustaría compartir nuestra experiencia con los investigadores para que puedan incluir ratones con un microbioma natural en su trabajo.

Los accidentes cerebrovasculares son más comunes en las personas mayores. El sistema inmunitario tiene células de memoria que combaten las partículas infecciosas y viven con una microbiota heterogénea. Por lo tanto, el modelado de accidentes cerebrovasculares en ratones salvajes es un modelo refinado en roedores que refleja mejor las condiciones de los pacientes.

Después de ponerse los pantalones, los cosacos y los cubrezapatos desechables, quítese los zapatos y los calcetines en la antesala de la ducha de aire. Póngase calcetines de área y equipo de protección personal para todo el cuerpo, incluidos overoles Tyvek, redecilla para el cabello, guantes de algodón, guantes de nitrilo y mascarillas. Ingrese a los calcetines de la zona de desgaste de la ducha de aire a través del revestimiento adhesivo del suelo.

Mientras se ducha al aire, levante los brazos y realice un giro de 360 grados. Salga de la ducha de aire y póngase los zapatos del otro lado. Transfiera al ratón de su habitación en una jaula cerrada y ventilada individualmente a la sala de procedimientos.

Coloque al ratón anestesiado boca abajo en la mesa desinfectada y agarre el pescuezo de su cuello para comprimir las venas del cuello. Con una mano, asegure la cabeza del ratón con el pulgar y el índice. Inserte un capilar fresco en el canto medial del ojo debajo de la membrana nictitante en un ángulo de 45 grados.

Rotar axialmente el capilar a través de la membrana sinusal en la parte posterior de la órbita hasta que la sangre comience a fluir. Recoja un mínimo de 15 microlitros de sangre en un tubo de extracción de sangre que contenga una gota de EDTA. Afloje el agarre del pescuezo antes de retirar el capilar para minimizar el sangrado en el tejido.

Use una gasa limpia o un hisopo para detener el sangrado y asegurar la hemostasia. Gire ligeramente el tubo para mezclar la sangre y el EDTA sin agitarlo y almacene la muestra de sangre en hielo. Después de completar la toma de muestras de sangre, cámbiese los guantes y desinfecte todos los materiales y superficies.

Póngase ropa de protección nueva en el flujo de aire laminar de acceso, o LAF, ubicado frente a la cabina LAF. Desinfecte los recipientes de muestras y retírelos a través de la puerta corredera en la pared de vidrio de la cabina LAF. Después de transferir los recipientes de muestra a la persona dos, desinfecte todas las superficies.

Reciba los contenedores de muestras desinfectados de la zona silvestre sin contacto directo a través de la puerta corredera en la pared de vidrio de la cabina LAF. Luego, deje los overoles desechables y los zapatos dentro del área designada. Deseche la redecilla para el cabello, los guantes de goma y la mascarilla.

Ingrese a la ducha de aire inmediatamente en el área de calcetines. Levanta los brazos y realiza un giro de 360 grados mientras te duchas al aire. Deje la ducha de aire y coloque los calcetines del área en el colector de ropa.

Póngase calcetines personales, zapatos y cubrezapatos desechables. Depositar la ropa de la zona en el vestuario, lavandería y cambiarse por ropa normal.