Name: Aislamiento de condrocitos y condroprogenitores mediante adhesión de fibronectina y ensayo migratorio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Aprende a aislar condrocitos y condroprogenitores mediante digestión enzimática y ensayos de adhesión a fibronectina. Este método mejora las estrategias terapéuticas para patologías cartilaginosas.

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<meta charset="utf8"></head><body>Aislamiento de condrocitos y condrocitos del cartílago articular humano

<ol><li>Muthu, S., Visawanathan, V., Chellamuthu, G., Thabrez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+effectiveness+of+various+treatments+for+cartilage+defects+compared+to+microfracture%3A+A+network+meta-analysis+of+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cartilage+Joint+Preserv%22%5BJournal%5D)">Clinical effectiveness of various treatments for cartilage defects compared to microfracture: A network meta-analysis of randomized controlled trials.</a> J Cartilage Joint Preserv. 4 (2), 100163(2023).</li>
<li>Sophia Fox, A. J., Bedi, A., Rodeo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+basic+science+of+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Health%22%5BJournal%5D)">The basic science of articular cartilage.</a> Sports Health. 1 (6), 461-468 (2009).</li>
<li>Brittberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+articular+cartilage+repair-An+up-to-date+review%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Joint%22%5BJournal%5D)">Clinical articular cartilage repair-An up-to-date review.</a> Annals of Joint. 3 (0), (2018).</li>
<li>Muthu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+cartilage+regeneration%3A+emerging+hypotheses+and+related+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Failure of cartilage regeneration: emerging hypotheses and related therapeutic strategies.</a> Nat Rev Rheumatol. 19 (7), 403-416 (2023).</li>
<li>Lavrentieva, A., Hatlapatka, T., Neumann, A., Weyand, B., Kasper, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+for+osteogenic+and+chondrogenic+differentiation+of+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Potential for osteogenic and chondrogenic differentiation of MSC.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 129, 73-88 (2013).</li>
<li>Fernandez-Moure, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+osteogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+cortical+bone%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced osteogenic potential of mesenchymal stem cells from cortical bone: a comparative analysis.</a> Stem Cell Res Ther. 6, 203(2015).</li>
<li>Goldberg, A., Mitchell, K., Soans, J., Kim, L., Zaidi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+mesenchymal+stem+cells+for+cartilage+repair+and+regeneration%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">The use of mesenchymal stem cells for cartilage repair and regeneration: a systematic review.</a> J Orthop Surg Res. 12, 39(2017).</li>
<li>Zha, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells+in+cartilage+regeneration%3A+From+characterization+to+application%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of mesenchymal stem cells in cartilage regeneration: From characterization to application.</a> NPJ Regen Med. 6 (1), 1-15 (2021).</li>
<li>Hayes, A. J., Tudor, D., Nowell, M. A., Caterson, B., Hughes, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondroitin+Sulfate+sulfation+motifs+as+putative+biomarkers+for+isolation+of+articular+cartilage+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Chondroitin Sulfate sulfation motifs as putative biomarkers for isolation of articular cartilage progenitor cells.</a> J Histochem Cytochem. 56 (2), 125-138 (2008).</li>
<li>Dowthwaite, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surface+of+articular+cartilage+contains+a+progenitor+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The surface of articular cartilage contains a progenitor cell population.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 6), 889-897 (2004).</li>
<li>Williams, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+clonal+characterization+of+a+progenitor+cell+sub-population+in+normal+human+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Identification and clonal characterization of a progenitor cell sub-population in normal human articular cartilage.</a> PloS One. 5 (10), e13246(2010).</li>
<li>Vinod, E., Parameswaran, R., Ramasamy, B., Kachroo, U. Pondering the potential of hyaline cartilage-derived chondroprogenitors for tissue regeneration: A systematic review. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVinod%2C+E+%22Cartilage%22">Cartilage</a>. , (2020).</li>
<li>Khan, I. M., Bishop, J. C., Gilbert, S., Archer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+chondroprogenitors+maintain+telomerase+activity+and+Sox9+expression+during+extended+monolayer+culture+and+retain+chondrogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Clonal chondroprogenitors maintain telomerase activity and Sox9 expression during extended monolayer culture and retain chondrogenic potential.</a> Osteoarthritis Cartilage. 17 (4), 518-528 (2009).</li>
<li>Fellows, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+divergent+progenitor+cell+sub-populations+in+human+osteoarthritic+cartilage%3A+the+role+of+telomere+erosion+and+replicative+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Characterization of a divergent progenitor cell sub-populations in human osteoarthritic cartilage: the role of telomere erosion and replicative senescence.</a> Sci Rep. 7, 41421(2017).</li>
<li>Vinod, E., Kachroo, U., Amirtham, S. M., Ramasamy, B., Sathishkumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+fresh+chondrocytes%2C+cultured+chondrocytes+and+chondroprogenitors+derived+from+human+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of fresh chondrocytes, cultured chondrocytes and chondroprogenitors derived from human articular cartilage.</a> Acta Histochem. 122 (1), 151462(2019).</li>
<li>Korpershoek, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+highly+proliferative+and+multipotent+meniscus+progenitors+through+differential+adhesion+to+Fibronectin%3A+A+novel+approach+in+meniscus+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Selection of highly proliferative and multipotent meniscus progenitors through differential adhesion to Fibronectin: A novel approach in meniscus tissue engineering.</a> Int J Mol Sci. 22 (16), 8614(2021).</li>
<li>Wang, J., Roberts, S., Li, W., Wright, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+characterization+of+regional+human+meniscus+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic characterization of regional human meniscus progenitor cells.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1003966(2022).</li>
<li>Koelling, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migratory+chondrogenic+progenitor+cells+from+repair+tissue+during+the+later+stages+of+human+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Migratory chondrogenic progenitor cells from repair tissue during the later stages of human osteoarthritis.</a> Cell Stem Cell. 4 (4), 324-335 (2009).</li>
<li>Seol, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrogenic+progenitor+cells+respond+to+cartilage+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Chondrogenic progenitor cells respond to cartilage injury.</a> Arthritis Rheum. 64 (11), 3626-3637 (2012).</li>
<li>Xue, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+stem+cells+in+different+subtypes+of+cartilage+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of stem cells in different subtypes of cartilage tissue.</a> Expert Opin Biol Ther. 15 (5), 623-632 (2015).</li>
<li>McCarthy, H. E., Bara, J. J., Brakspear, K., Singhrao, S. K., Archer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparison+of+equine+articular+cartilage+progenitor+cells+and+bone+marrow-derived+stromal+cells+as+potential+cell+sources+for+cartilage+repair+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+J%22%5BJournal%5D)">The comparison of equine articular cartilage progenitor cells and bone marrow-derived stromal cells as potential cell sources for cartilage repair in the horse.</a> Vet J. 192 (3), 345-351 (2012).</li>
<li>Elsaesser, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+migrative+subpopulation+of+adult+human+nasoseptal+chondrocytes+with+progenitor+cell+features+and+their+potential+for+in+vivo+cartilage+regeneration+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+%26+Biosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of a migrative subpopulation of adult human nasoseptal chondrocytes with progenitor cell features and their potential for in vivo cartilage regeneration strategies.</a> Cell & Biosci. 6, 11(2016).</li>
<li>Batschkus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+secretome+of+human+chondrogenic+progenitor+cells+with+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">Mapping the secretome of human chondrogenic progenitor cells with mass spectrometry.</a> Ann Anat. 212, 4-10 (2017).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migratory+chondroprogenitors+retain+superior+intrinsic+chondrogenic+potential+for+regenerative+cartilage+repair+as+compared+to+human+fibronectin-derived+chondroprogenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Migratory chondroprogenitors retain superior intrinsic chondrogenic potential for regenerative cartilage repair as compared to human fibronectin-derived chondroprogenitors.</a> Sci Rep. 11, 23685(2021).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraarticular+injection+of+allogenic+chondroprogenitors+for+treatment+of+osteoarthritis+in+rabbit+knee+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Orthop+Trauma%22%5BJournal%5D)">Intraarticular injection of allogenic chondroprogenitors for treatment of osteoarthritis in rabbit knee model.</a> J Clin Orthop Trauma. 10 (1), 16-23 (2018).</li>
<li>Xue, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+progenitor+cells+combined+with+PHBV+in+cartilage+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Cartilage progenitor cells combined with PHBV in cartilage tissue engineering.</a> J Trans Med. 17 (1), 104(2019).</li>
<li>Carluccio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+cells+activated+by+platelet+lysate+in+human+articular+cartilage+as+a+tool+for+future+cartilage+engineering+and+reparative+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Progenitor cells activated by platelet lysate in human articular cartilage as a tool for future cartilage engineering and reparative strategies.</a> Cells. 9 (4), E1052(2020).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-articular+delivery+of+extracellular+vesicles+secreted+by+chondrogenic+progenitor+cells+from+MRL%2FMpJ+superhealer+mice+enhances+articular+cartilage+repair+in+a+mouse+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Intra-articular delivery of extracellular vesicles secreted by chondrogenic progenitor cells from MRL/MpJ superhealer mice enhances articular cartilage repair in a mouse injury model.</a> Stem Cell Res Ther. 11 (1), 93(2020).</li>
<li>Wang, H. C., Lin, T. H., Hsu, C. C., Yeh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoring+osteochondral+defects+through+the+differentiation+potential+of+cartilage+stem%2Fprogenitor+cells+cultivated+on+porous+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Restoring osteochondral defects through the differentiation potential of cartilage stem/progenitor cells cultivated on porous scaffolds.</a> Cells. 10 (12), 3536(2021).</li>
<li>Kellgren, J. H., Lawrence, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiological+assessment+of+osteo-arthrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Radiological assessment of osteo-arthrosis.</a> Ann Rheum Dis. 16 (4), 494-502 (1957).</li>
<li>Vinod, E., Kachroo, U., Rebekah, G., Yadav, B. K., Ramasamy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+articular+chondrocytes+and+chondroprogenitors+derived+from+non-diseased+and+osteoarthritic+knee+joints+to+assess+superiority+for+cell-based+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Characterization of human articular chondrocytes and chondroprogenitors derived from non-diseased and osteoarthritic knee joints to assess superiority for cell-based therapy.</a> Acta Histochem. 122 (6), 151588(2020).</li>
<li>Nelson, L., McCarthy, H. E., Fairclough, J., Williams, R., Archer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+viable+pool+of+stem+cells+within+human+osteoarthritic+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Cartilage%22%5BJournal%5D)">Evidence of a viable pool of stem cells within human osteoarthritic cartilage.</a> Cartilage. 5 (4), 203-214 (2014).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+methods+for+the+isolation+and+culture+of+Migratory+chondroprogenitors+from+Human+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of methods for the isolation and culture of Migratory chondroprogenitors from Human articular cartilage.</a> Connect Tissue Res. 64 (4), 389-399 (2023).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li>
<li>Vinod, E., Boopalan, P. R. J. V. C., Sathishkumar, S. Reserve or resident progenitors in cartilage? Comparative analysis of chondrocytes versus chondroprogenitors and their role in cartilage repair. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVinod%2C+E+%22Cartilage%22">Cartilage</a>. , (2017).</li>
<li>Dicks, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+isolation+of+chondroprogenitors+from+human+iPSCs+based+on+cell+surface+markers+identified+using+a+CRISPR-Cas9-generated+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Prospective isolation of chondroprogenitors from human iPSCs based on cell surface markers identified using a CRISPR-Cas9-generated reporter.</a> Stem Cell Res Ther. 11 (1), 66(2020).</li>
<li>Vinod, E., et al. Prospective isolation and characterization of chondroprogenitors from human chondrocytes based on CD166/CD34/CD146 surface markers. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVinod%2C+E+%22Cartilage%22">Cartilage</a>. , (2021).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migratory+chondroprogenitors+retain+superior+intrinsic+chondrogenic+potential+for+regenerative+cartilage+repair+as+compared+to+human+Fibronectin-derived+chondroprogenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Migratory chondroprogenitors retain superior intrinsic chondrogenic potential for regenerative cartilage repair as compared to human Fibronectin-derived chondroprogenitors.</a> Sci Rep. 11 (1), 23685(2021).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+fetal+cartilage-derived+chondrocytes+and+chondroprogenitors+display+a+greater+commitment+to+chondrogenesis+than+adult+cartilage+resident+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Human fetal cartilage-derived chondrocytes and chondroprogenitors display a greater commitment to chondrogenesis than adult cartilage resident cells.</a> PloS One. 18 (4), e0285106(2023).</li>
<li>Joos, H., Wildner, A., Hogrefe, C., Reichel, H., Brenner, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1+beta+and+tumor+necrosis+factor-alpha+inhibit+migration+activity+of+chondrogenic+progenitor+cells+from+non-fibrillated+osteoarthritic+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1 beta and tumor necrosis factor-alpha inhibit migration activity of chondrogenic progenitor cells from non-fibrillated osteoarthritic cartilage.</a> Arthritis Res Ther. 15 (5), R119(2013).</li>
<li>Vinod, E., Parameswaran, R., Amirtham, S. M., Rebekah, G., Kachroo, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%2C+articular+cartilage+derived+chondroprogenitors+and+chondrocytes+to+determine+cell+superiority+for+cartilage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of human bone marrow mesenchymal stem cells, articular cartilage derived chondroprogenitors and chondrocytes to determine cell superiority for cartilage regeneration.</a> Acta Histochem. 123 (4), 151713(2021).</li>
<li>Vinod, E., Padmaja, K., Ramasamy, B., Sathishkumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+articular+cartilage+derived+chondroprogenitors+for+cartilage+repair+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthopaed%22%5BJournal%5D)">Systematic review of articular cartilage derived chondroprogenitors for cartilage repair in animal models.</a> J Orthopaed. 35, 43-53 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Hoja de 22 bisturíes&nbsp;</td><td>FURGONETA</td><td></td><td></td>DE VIDRIO</tr><tr><td>Placa de 6 pocillos&nbsp;</td><td>CORNING</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Azul Alcián</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>J6012</td><td></td></tr><tr><td>Rojo Alizarina&nbsp;</td><td>SIGMA</td><td>130223</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina-B (2 &mu; g/mL).</td><td>GIBCO</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Ácido ascórbico (62 &mu; g/mL)</td><td>Citómetro de flujo SIGMA ALDRICH</td><td>A4544-25G</td><td></td></tr><tr><td>BC CytoFLEX LX&nbsp;</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>CYTExpert Software versión 2.5</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SIGMA ALDRICH&</td><td>nbsp; C34006</td><td></td></tr><tr><td>CD105-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>561443 CD106-APC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>551147 CD14-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>555397 CD29-APC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td>559883</tr><tr><td>CD34-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td>348057</tr><tr><td>CD45-FITC BD 347463</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD49b-FITC</td><td>MILTENYL BIOTEC</td><td>&nbsp; MACS 130/100337</td><td></td></tr><tr><td>CD49E-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 555617 <tr><td>CD73-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 550257 <tr><td>CD90-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td>561970</td><td></td></tr><tr><td>Contador de células</td><td>DE NOVIX</td><td>Cell Drop BF</td><td></td></tr><tr><td>Colador de células</td><td>HIMEDIA</td><td>TCP024</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>Allegra X-30R</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora <> CO2</td><td>MODELO THERMO</td><td>SCIENTIFIC-371</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno tipo X (COL10A1), factor de transcripción relacionado con Runt (RUNX2), factor de transcripción SRY-Box 9 (SOX-9), agrecano (ACAN) y colágeno tipo II (COL2A1)&nbsp;</td><td>EUROGENTEC, BÉLGICA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa tipo II</td><td>WORTHINGTON</td><td>LS004176</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F-12 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium F-12)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>D8900-1L Lector</td><td></td>de</tr><tr><td>placas ELISA</td> MOLECULAR <td>DEVICES</td><td>SpectraMax i3x Reader</td><td></td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>FISHER SIENTIFIC</td><td>2353459</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino</td><td>GIBCO</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>CLOUD CLON CORP</td><td>APA551Hu01</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectina (10 &micro; L/mL)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de síntesis de primera cadena</td><td>TAKARA BIO</td><td>6110A</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>GIBCO</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>QUALIGENS</td><td>Q39411</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>M8787</td><td></td></tr><tr><td>Aceite Rojo O</td><td>SIGMA</td><td>1320065</td><td></td></tr><tr><td>PBS (solución salina tamponada con fosfato)</td><td>GIBCO</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>PCR thermocycler&nbsp;</td><td>APPLIED BIOSYSTEMS</td><td>Termociclador Quantstudio 12K Flex&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina (100 UI/mL)</td><td>GIBCO</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirius Red</td><td>ALFA AESAR</td><td>2610108</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo primario (colágeno de ratón tipo II)</td><td>DSHB</td><td>DSHB II II6B3</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>ROCHE</td><td>10165913103</td><td></td></tr><tr><td>Quant-iT Picogreen reactivo de dsDNA THERMO</td><td>SCIENTIFIC</td><td>P7589</td><td></td></tr><tr><td>Frigorífico</td><td>ELANPRO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNeasy MiniKit</td><td>QIAGEN</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Safranina O</td><td>QUALIGENS</td><td>Q39962</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario (anticuerpo IgG anti-ratón de cabra, conjugado HRP)</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>31430</td><td></td></tr><tr><td>Baño de agua agitado&nbsp;</td>Kits diferenciadores <td>REMI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StemPro&nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>1007201, A1007001 y A1007101</td><td></td></tr><tr><td>matraz T-25&nbsp;</td><td>CORNING</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>TakyonTM Low Rox SYBR Master Mix dTTP Azul&nbsp;</td><td>EUROGENTEC</td><td>UF-LSMT-B0701</td><td></td></tr><tr><td>TGF&beta;</td><td>ABCAM</td><td>ab277760</td><td></td></tr><tr><td>Cultivo de tejidos Petridish</td><td>TARSONS</td><td>960010</td><td></td></tr><tr><td>Azul de toluidina</td><td>QUALIGENS</td><td>2040</td><td></td></tr><tr><td>Azul de tripán&nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina EDTA</td><td>GIBCO</td><td>25200072</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento de condrocitos y condroprogenitores mediante adhesión de fibronectina y ensayo migratorio

Isolation of Chondrocytes and Chondroprogenitors Using Fibronectin Adhesion and Migratory Assay

A partir de 86,9 mg de cortes de cartílago, se observó un rendimiento de células condrocitos de 1,72 x 105 células. Al cargarse, los condrocitos se adhieren rápidamente, presentando un aspecto inicial de adoquín redondeado y transformándose en un estado fibroblástico al expandirse más (Figura 1 A,B). La siembra de estos condrocitos en placas de fibronectina generalmente da como resultado una adhesión del 2%, con cada célula experimentando un crecimiento clonal (Figura 2 C,D), alcanzando una población que se duplica de 5 en los días 10-12 (32 células/clon). Los clones dentro del área de 10 cm² se combinan y se expanden hasta el paso necesario para producir FAA-CPs. Los explantes de cartílago, sostenidos en cultivo después de la incubación de la colagenasa, exhiben un aflojamiento de la matriz extracelular, y la migración se observa generalmente ya al7º día (Figura 2E). Tanto los FAA-CP como los MCP muestran una estructura en forma de huso, una característica comúnmente asociada con los BM-MSC, adquiriendo una estructura en forma de panal antes de la confluencia (Figura 1E, F).
Los tres tipos de células aisladas, a saber, condrocitos, FAA-CP y MCP, se monitorean de cerca mediante imágenes de contraste de fase. Los FAA-CP se transfieren solo después de la confirmación de cinco duplicaciones de población.
La caracterización fenotípica de las células aisladas y expandidas suele incluir el análisis de citometría de flujo para los marcadores putativos de condrogénesis, a saber, CD146 y CD166, así como el análisis de la expresión génica para los marcadores de condrogénesis (SOX-9, ACAN, COL2A1), el marcador de fibrocartílago COL1A1 y los marcadores de hipertrofia (RUNX2 y COL10A1). Los tres grupos celulares muestran una alta expresión (&gt;95%) de CD105, CD73 y CD90; expresión baja a negativa de CD34 y CD45; y alta expresión (&gt;98%) de CD166, con expresión moderada de CD146 dependiente del donante (40%-75%)(Figura 2A).
Los resultados de la qRT-PCR muestran una expresión comparable y alta de SOX-9, ACAN y también COL1A1, un marcador de fibrocartílago, ya que las células se cultivan antes de la evaluación (Figura 2B). Para confirmar la condrogénesis, se observa una absorción positiva de complejos de color rojo anaranjado en las áreas que contienen GAG después de la safranina O, y complejos de color azulado a violáceo después del azul alcián y el azul de toluidina en todos los grupos celulares, con una mayor proporción en los grupos FAA-CP y MCP. El análisis inmunohistoquímico de los pellets condrogénicos diferenciados para el colágeno tipo II muestra una captación fibrilar pardusca en los tres grupos (Figura 3). Además, el análisis de GAG/ADN también mostró la confirmación de la diferenciación condrogénica con los grupos FAA-CP que mostraron una mayor expresión (Figura 2C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig01.jpg"> 
Figura 1: Aislamiento y caracterización de condrocitos y condroperogenitores. El algoritmo de estudio describe el aislamiento de tres grupos celulares y sus características morfológicas bajo un microscopio de contraste de fase inmediatamente después del aislamiento y después de unos días de expansión. (A) Los condrocitos recién aislados se adhieren a los cultivos adherentes durante los primeros días del cultivo, adquiriendo un aspecto fibroblástico con mayor expansión (B). (C) Los condrocitos sometidos a un ensayo de adhesión de fibronectina muestran un crecimiento clonal, alcanzando una población que se duplica de 5 para el día 10 (D). (E) Los condroprogenitores migran desde el borde del explante hacia el día 10 de cultivo y exhiben un patrón de crecimiento en forma de huso con mayor expansión (F). Aumento de imagen de contraste de fase: 10x; Barras de escala: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig02.jpg"> 
Figura 2: Datos de caracterización molecular. (A) Análisis de citometría de flujo para marcadores MSC positivos y negativos y posibles marcadores de condrogénesis. (B) Datos de expresión de RT-PCR para los tres grupos celulares para el análisis de expresión génica de marcadores condrogénicos e hipertróficos. (C) Análisis de GAG/ADN total de los pellets diferenciados condrogénicos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig03.jpg"> 
Figura 3: Tinción confirmatoria tras la diferenciación condrogénica. Safranina O y análisis inmunohistoquímico de colágeno tipo II entre los tres grupos celulares. Barras de escala: para aumento de 10x, 50 μm; Aumento de 40x, 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Aislamiento de condrocitos y condroprogenitores mediante adhesión de fibronectina y ensayo migratorio

Chondroprogenitor cells (CPCs), recently identified as a distinct subpopulation, exhibit promise due to their mesenchymal properties, heightened ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Un sistema 3D de los condrocitos articulares humanos en cultivo de altos niveles de líquido sinovial se describe. El líquido sinovial refleja el microambiente más naturales para el cartílago articular, y puede ser fácilmente obtenido y almacenado. Así, este sistema puede ser utilizado para el estudio de la regeneración del cartílago y de terapias de detección para el tratamiento de la artritis.

Un sistema 3D para los condrocitos articulares humanos cultivo de líquido sinovial

La biosíntesis de la matriz extracelular cartilaginosa por los condrocitos pueden ser afectados por la aplicación de estímulos mecánicos. Este método describe la técnica de aplicación de dinámicas tensiones compresivas a los condrocitos encapsulados en construcciones en 3D y la evaluación de los cambios inducidos en el metabolismo de los condrocitos.

La estimulación mecánica de condrocitos-agarosa hidrogeles

La reparación del cartílago representa un desafío médico no resuelto y los enfoques basados en células para diseñar el cartílago articular humano son una solución prometedora. Aquí, describimos los hidrogeles biomiméticos tridimensionales (3D) como una herramienta ideal para la expansión y maduración de los condrocitos articulares humanos.

3D hidrogel andamios para articular condrocitos cultura y cartílago Generación

Presentamos un protocolo para generar un linaje condrogénico a partir de sangre periférica humana (PB) a través de células madre pluripotentes inducidas (iPSCs) utilizando un método de integración libre, que incluye la formación de células embrionarias (EB), expansión de células fibroblásticas y inducción condrogénica.

Diferenciación de los condrocitos de las células madre pluripotentes humanas inducidas por la sangre periféricas derivadas de la sangre

Un método para obtener nanopatrones desigual basado en el dendrímero que permiten el control de escala nanométrica de local arginina-glicina-aspártico (RGD) superficie densidad del ácido es descrito y aplicado para el estudio de la diferenciación celular de adherencia y condrogénica.

Basado en el dendrímero nanopatrones desigual para adherencia de superficie de Control local: un método para dirigir la diferenciación condrogénica

La obtención de una población pura de fibroblastos es crucial para estudiar su papel en la reparación de heridas y fibrosis. Aquí se describe un método detallado para aislar fibroblastos y miofibroblastos de corazones de ratón no lesionados y lesionados seguidos de la caracterización de su pureza y funcionalidad por inmunofluorescencia, RTPCR, clasificación celular asistida por fluorescencia, y contracción del gel de colágeno.

Aislamiento y caracterización de fibroblastos cardíacos adultos y miofibroblastos

Las células madre mesenquimales de la almohadilla de grasa infrapatelar (IFP-MSC) se pueden aislar fácilmente de la almohadilla de grasa infrapatelar de la articulación de la rodilla. Proliferan bien in vitro, forman colonias de UFC-F y se diferencian en linajes adipogénicos, condrogénicos y osteogénicos. En este documento, se proporciona la metodología para el aislamiento, expansión y diferenciación de IFP-MSC de la articulación sofocante de cabra.

Aislamiento, expansión y diferenciación de células madre mesenquimales de la almohadilla de grasa infrapatelar de la articulación sofocante de cabra

Este estudio describe un método para producir esferoides condrocíticos mediante la agregación de células en esferoides en condiciones de baja adherencia utilizando la gravedad, seguido de un cultivo de los esferoides resultantes en mini-biorreactores.

Generación de esferoides a partir de varios condrocitos utilizando condiciones de baja adherencia por gravedad y mini-biorreactores caseros

Se describe un ensayo cualitativo para la adhesión de la levadura y la invasión de agar como una medida de la diferenciación y la invasión pseudohyphal. Este ensayo simple se puede utilizar para evaluar el fenotipo invasivo de distintos mutantes, así como las señales de los efectos ambientales y las vías de señalización en la diferenciación de la levadura.

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La disección del Organizador y explantes Animal Polo de Xenopus laevis embriones y de la Asamblea de un ensayo de adhesión celular

Aprende a aislar condrocitos y condroprogenitores mediante digestión enzimática y ensayos de adhesión a fibronectina. Este método mejora las estrategias terapéuticas para patologías cartilaginosas.

Aislamiento de condrocitos y condroprogenitores mediante adhesión de fibronectina y ensayo migratorio

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