Name: Trasplante celular de alta resolución en embriones y larvas de pez cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Aprenda el trasplante celular de alta resolución en embriones y larvas de Danio rerio para estudiar la dinámica espaciotemporal de señalización neuronal durante el desarrollo y la regeneración.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Trasplante robusto de células de pez cebra para la investigación de regeneración y desarrollo

<ol><li>Solini, G. E., Dong, C., Saha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+transplantation+experiments%3A+Past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic transplantation experiments: Past, present, and future.</a> Trends Dev Biol. 10, 13-30 (2017).</li>
<li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGilbert%2C+SF+%22A+Conceptual+History+of+Modern+Embryology%22">A Conceptual History of Modern Embryology</a>. , Springer. New York, NY. (1991).</li>
<li>Spemann, H., Mangold, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+embryonic+primordia+by+implantation+of+organizers+from+a+different+species.+1923%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of embryonic primordia by implantation of organizers from a different species. 1923.</a> Int J Dev Biol. 45 (1), 13-38 (2001).</li>
<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lineage Tracing.</a> Cell. 148 (1), 33-45 (2012).</li>
<li>Gansner, J. M., Dang, M., Ammerman, M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+22+-+Transplantation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 22 - Transplantation in zebrafish.</a> Methods in Cell Biol. 138, 629-647 (2017).</li>
<li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+of+the+interphase+nucleus+in+Japanese+quail+%28Coturnix+coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Biol+Fr+Belg%22%5BJournal%5D)">Details of the interphase nucleus in Japanese quail (Coturnix coturnix japonica).</a> Bull Biol Fr Belg. 103 (3), 435-452 (1969).</li>
<li>Ho, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+movements+and+cell+fate+during+zebrafish+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Suppl%22%5BJournal%5D)">Cell movements and cell fate during zebrafish gastrulation.</a> Dev Suppl. , 65-73 (1992).</li>
<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+patterning+deciphered+in+avian+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Developmental patterning deciphered in avian chimeras.</a> Development, Growth & Differentiation. 50, S11-S28 (2008).</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332 (6031), 811-816 (2011).</li>
<li>Balaban, E., Teillet, M. A., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+quail-chick+chimera+system+to+the+study+of+brain+development+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Application of the quail-chick chimera system to the study of brain development and behavior.</a> Science. 241 (4871), 1339-1342 (1988).</li>
<li>Carmany-Rampey, A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+mosaic+analysis+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Modern mosaic analysis in the zebrafish.</a> Methods. 39 (3), 228-238 (2006).</li>
<li>Kragl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+keep+a+memory+of+their+tissue+origin+during+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration.</a> Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).</li>
<li>Rojo-Laguna, J. I., Garcia-Cabot, S., Saló, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+transplantation+in+planarians%3A+A+useful+tool+for+molecular+analysis+of+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue transplantation in planarians: A useful tool for molecular analysis of pattern formation.</a> Semin Cell Dev Biol. 87, 116-124 (2019).</li>
<li>Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+choreography+of+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular choreography of appendage regeneration.</a> Cell. 165 (7), 1598-1608 (2016).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+are+barely+required+for+the+patterning+and+cell+dynamics+in+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Muscles are barely required for the patterning and cell dynamics in axolotl limb regeneration.</a> Front Genet. 13, 1036641(2022).</li>
<li>Wells, K. M., Kelley, K., Baumel, M., Vieira, W. A., McCusker, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+growth+and+size+in+the+axolotl+limb+regenerate%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural control of growth and size in the axolotl limb regenerate.</a> Elife. 10, e68584(2021).</li>
<li>Otsuki, L., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+memory+in+vertebrate+regeneration%3A+a+century%27s+insights+from+the+salamander+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Positional memory in vertebrate regeneration: a century's insights from the salamander limb.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 14 (6), e040899(2022).</li>
<li>de Abreu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model of neurodevelopmental disorders.</a> Neuroscience. 445, 3-11 (2020).</li>
<li>Alper, S. R., Dorsky, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+advantages+of+zebrafish+larvae+as+a+model+for+spinal+cord+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unique advantages of zebrafish larvae as a model for spinal cord regeneration.</a> Front Mol Neurosci. 15, 983336(2022).</li>
<li>Blader, P., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+developmental+genetics+and+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish developmental genetics and central nervous system development.</a> Hum Mol Genet. 9 (6), 945-951 (2000).</li>
<li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> J Vis Exp. (29), e1394(2009).</li>
<li>Boulanger-Weill, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+interactions+between+newborn+and+mature+neurons+leading+to+integration+into+established+neuronal+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional interactions between newborn and mature neurons leading to integration into established neuronal circuits.</a> Curr Biol. 27 (12), 1707-1720 (2017).</li>
<li>Dong, J., Stuart, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgene+manipulation+in+zebrafish+by+using+recombinases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgene manipulation in zebrafish by using recombinases.</a> Methods Cell Biol. 77, 363-379 (2004).</li>
<li>Kawakami, K., Shima, A., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+functional+transposase+of+the+Tol2+element%2C+an+Ac-like+element+from+the+Japanese+medaka+fish%2C+and+its+transposition+in+the+zebrafish+germ+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification of a functional transposase of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish, and its transposition in the zebrafish germ lineage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (21), 11403-11408 (2000).</li>
<li>Hwang, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+zebrafish+using+a+CRISPR-Cas+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in zebrafish using a CRISPR-Cas system.</a> Nat Biotechnol. 31 (3), 227-229 (2013).</li>
<li>Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+primary+motoneuron+identity+in+developing+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Determination of primary motoneuron identity in developing zebrafish embryos.</a> Science. 252 (5005), 569-572 (1991).</li>
<li>Elsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+5+-+Cellular+methods%3A+detailed+procedure+for+transplanting+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 5 - Cellular methods: detailed procedure for transplanting single cells.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Poulain, F. E., Gaynes, J. A., Stacher Hörndli, C., Law, M. -Y., Chien, C. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+retinal+axon+guidance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analyzing retinal axon guidance in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 100, 3-26 (2010).</li>
<li>Masai, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+mediates+retinal+lamination%2C+maintenance+of+forebrain+compartments+and+patterning+of+retinal+neurites%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">N-cadherin mediates retinal lamination, maintenance of forebrain compartments and patterning of retinal neurites.</a> Development. 130 (11), 2479-2494 (2003).</li>
<li>Raible, D. W., Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+interactions+in+zebrafish+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regulative interactions in zebrafish neural crest.</a> Development. 122 (2), 501-507 (1996).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Barsh, G. R., Isabella, A. J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+motor+neuron+topographic+map+determined+by+parallel+mechanisms+of+hox5+expression+and+time+of+axon+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Vagus motor neuron topographic map determined by parallel mechanisms of hox5 expression and time of axon initiation.</a> Curr Biol. 27 (24), 3812-3825 (2017).</li>
<li>Isabella, A. J., Stonick, J. A., Dubrulle, J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+positional+memory+guides+target-specific+axon+regeneration+in+the+zebrafish+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Intrinsic positional memory guides target-specific axon regeneration in the zebrafish vagus nerve.</a> Development. 148 (18), 199706(2021).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1%3A+General+methods+for+zebrafish+care%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 1: General methods for zebrafish care.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Grant, P. K., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroepithelial+basement+membrane+serves+as+a+boundary+and+a+substrate+for+neuron+migration+in+the+zebrafish+hindbrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">The neuroepithelial basement membrane serves as a boundary and a substrate for neuron migration in the zebrafish hindbrain.</a> Neural Dev. 5 (1), 9(2010).</li>
<li>Konantz, J., Antos, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+genetic+morpholino+approach+using+cardiac+ventricular+injection+to+transfect+multiple+difficult-to-target+tissues+in+the+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Reverse genetic morpholino approach using cardiac ventricular injection to transfect multiple difficult-to-target tissues in the zebrafish larva.</a> J Vis Exp. (88), e51595(2014).</li>
<li>Novoa, B., Figueras, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+model+for+the+study+of+inflammation+and+the+innate+immune+response+to+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: model for the study of inflammation and the innate immune response to infectious diseases.</a> Adv Exp Med Biol. 946, 253-275 (2012).</li>
<li>Speirs, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+we+learn+about+fish+neutrophil+and+macrophage+response+to+immune+challenge+from+studies+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Shellfish+Immunol%22%5BJournal%5D)">What can we learn about fish neutrophil and macrophage response to immune challenge from studies in zebrafish.</a> Fish Shellfish Immunol. 148, 109490(2024).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maturation+of+the+immune+system+in+zebrafish%2C+Danio+rerio%3A+a+gene+expression+profiling%2C+in+situ+hybridization+and+immunological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Comp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study.</a> Dev Comp Immunol. 28 (1), 9-28 (2004).</li>
<li>Wienholds, E., Schulte-Merker, S., Walderich, B., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-selected+inactivation+of+the+zebrafish+rag1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Target-selected inactivation of the zebrafish rag1 gene.</a> Science. 297 (5578), 99-102 (2002).</li>
<li>Petrie-Hanson, L., Hohn, C., Hanson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rag1+mutant+zebrafish+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of rag1 mutant zebrafish leukocytes.</a> BMC Immunol. 10, 8(2009).</li>
<li>Roh-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-dependent+cytoplasmic+transfer+during+melanoma+invasion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Macrophage-dependent cytoplasmic transfer during melanoma invasion in vivo.</a> Dev Cell. 43 (5), 549-562 (2017).</li>
<li>Bukrinsky, A., Griffin, K. J. P., Zhao, Y., Lin, S., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+spi-1-like+%28spi-1l%29+in+zebrafish+myeloid+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Essential role of spi-1-like (spi-1l) in zebrafish myeloid cell differentiation.</a> Blood. 113 (9), 2038-2046 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10 mL "jeringa de depósito"</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-459</td><td></td></tr><tr><td>150 mL filtro de vacío desechable, .2 y micro; m, PES</td><td>Corning 431153</td><td></td><td></td></tr><tr><td>bloque calefactor de 20 x 12 mm</td><td>Corning</td><td>480122</td><td></td></tr><tr><td>llave de paso de 3 vías</td><td>Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>455991</tr><tr><td>3 x 1 Corredera de vidrio esmerilado</td><td>VWR</td><td>48312-004</td><td></td></tr><tr><td>40x Objetivo de inmersión en agua</td><td>Nikon MRD07420</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de calcio dihidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td></td></tr><tr><td>Manipulador grueso</td><td>Narishige</td><td>MN-4</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de microjeringa personalizada</td><td>Universidad de Oregón</td><td>N/A</td><td>Fabricado por el taller mecánico de la Universidad de Oregón (tsa.uoregon@gmail.com). A continuación se enumera una alternativa disponible en el mercado.</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzas</td><td>Fine Science Tools</td><td>1129500</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse FN1 "Microscopio de trasplante"</td><td>Nikon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>mango de electrodo</td><td>World Precision Instruments</td><td>5444</td><td></td></tr><tr><td>Pluma Cuchilla quirúrgica estéril, #11</td><td>VWR</td><td>21899-530</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador fino, tres ejes Hidráulico de aceite&nbsp;</td><td>Narishige</td><td>MMO-203</td><td></td></tr><tr><td>HEPES pH 7.2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-100G</td><td></td></tr><tr><td>Alta Precisión #3 Estilo Mango de Bisturí</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-163</td><td></td></tr><tr><td>Kimble Pipeta Pasteur Desechable de Borosilicato, Punta Ancha, 5.75 en</td><td>DWK Life Sciences</td><td>63A53WT</td><td></td></tr><tr><td>KIMBLE Adaptador de Cromatografía&nbsp;</td><td>DWK Life Sciences</td><td>420408-0000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Aceite Mineral Ligero</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3516-1L</td><td></td></tr><tr><td>LSE Calentador digital de baño seco, 1 bloque, 120 V</td><td>Corning</td><td>6875SB</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de microjeringa manual</td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP</td><td>Alternativa comercial a la bomba de microjeringa personalizada</td></tr><tr><td>Soporte de microelectrodo</td><td>World Precision Instruments</td><td>MPH310</td><td></td></tr><tr><td>MicroFil Relleno de pipetas</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G67-5</td><td></td></tr><tr><td>Esmalte de uñas</td><td>Electron MIcroscopy Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Agua sin nucleasas</td><td>VWR</td><td>82007-334</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Extractor de micropipetas de tipo flameado/marrón</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>p4458-100ML</td><td>5.000 unidades de penicilina y 5 mg de estreptomicina/mL</td></tr><tr><td>bomba de pipeta 10 mL</td><td>Bel-Art</td><td>37898-0000</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Professional Super Glue</td><td>Loctite</td><td>LOC1365882</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de ensayo de</td> <td>poliestireno de fondo redondoFalcon</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Micrómetro de etapa</td><td>Meiji Techno America</td><td>MA285</td><td></td></tr><tr><td>Jeringas sin aguja, 50 mL</td><td>BD Medical</td><td>309635</td><td></td></tr><tr><td>Tricaína Metanosulfonato</td><td>Syndel USA</td><td>SYNCMGAUS03</td><td></td></tr><tr><td>Trilene XL Hilo de pescar</td><td>Berkley</td><td>XLFS6-15</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de polietileno Nº 205</td><td>BD Medical</td><td>427445</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td><td>Invitrogen 16520050</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas calibradas Wiretrol II</td><td>Drummond 50002010</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

trasplante celular de alta resolución en embriones y larvas de pez cebra

High-resolution Cell Transplantation in Embryonic and Larval Zebrafish

Los resultados de los experimentos de trasplante se observan directamente mediante la visualización de células donantes marcadas con fluorescencia en animales huéspedes en los momentos apropiados después del trasplante utilizando un microscopio de fluorescencia. Aquí, trasplantamos neuronas vagas anteriores individuales a 3 dpf. A continuación, se incubaron los animales huéspedes durante 12 o 48 h, se anestesiaron, se montaron en LMA en un cubreobjetos de vidrio y se obtuvieron imágenes con un microscopio confocal (Figura 5). A las 12 h post-trasplante (hpt), observamos una neurona donante trasplantada con éxito (Figura 5A). Podemos confirmar la correcta posición de la célula, ya que se encuentra entre las neuronas vagas del huésped en la región anterior del núcleo motor del vago del huésped; la célula también parece intacta y sana, como lo indica la extensión de varias protuberancias cortas de neuritas (Figura 5A). A los 2 días después del trasplante (dpt), podemos confirmar de nuevo que una sola neurona ha sido trasplantada con éxito a la posición correcta del núcleo del huésped (Figura 5B). En este punto, observamos que la neurona ha extendido un nuevo axón hasta el 4º arco faríngeo (Figura 5B). La observación directa también revela cuándo el procedimiento ha fracasado. En este ejemplo, observamos un huésped de 2 dpt en el que no hay ninguna neurona donante; más bien, es evidente una pequeña mancha verde, probablemente un fragmento de una neurona donante que murió después del trasplante (Figura 5C). Aunque las tasas de éxito del trasplante variarán en función de la experiencia del usuario y del número y tipo de células trasplantadas, experimentamos una tasa de éxito (definida como la presencia de una neurona superviviente que ha extendido un axón en el huésped a 2-3 dpt) del 66% (n = 453 trasplantes) para los trasplantes de neuronas motoras vagas realizados a 3-4 dpf33.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig01.jpg"> Figura 1: Descripción general del aparato de trasplante. (A) Microscopio de fluorescencia vertical; (B) Objetivo de inmersión en agua 40x; (C) micromanipulador grueso; (D) micromanipulador fino; (E) soporte de microelectrodos; (F) mango del electrodo; (G) llave de paso de tres vías; (H) bomba de microjeringa; (I) tubería de polietileno; (J) adaptadores de cromatografía; (K) Jeringa de depósito de 10 mL. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig02.jpg"> Figura 2: Montaje de animales para trasplante. (A) Un portaobjetos de vidrio esmerilado de 3 pulgadas x 1 pulgada con esmalte de uñas transparente aplicado en un contorno rectangular (línea discontinua). (B) Animales donantes (flecha) y hospedadores (punta de flecha) montados en gotas de agarosa, alineados verticalmente con el sitio objetivo del trasplante (cerebro posterior) orientados hacia la derecha. (C) Agarosa con el borde derecho y las cuñas recortadas para exponer el sitio objetivo del trasplante. Recuadro: zoom de la región en caja. (D) Portaobjetos de trasplante inundados con solución de Ringer con penicilina-estreptomicina y tricaína. Barras de escala = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig03.jpg"> Figura 3: Preparación de la aguja de trasplante. (A) Aguja de trasplante rota sobre un micrómetro de etapa. (B) Relleno de pipeta (1) insertado en la aguja de trasplante (2) para llenar la aguja con aceite mineral. (C) Portaobjetos de trasplante preparados y aguja en su lugar en el microscopio de trasplante. 1: Menisco de agua entre el objetivo de inmersión de 40x y el portaobjetos inundado 2: Aguja de trasplante 3: Soporte de microelectrodos. (D) Punta de una aguja de trasplante rota con menisco oleoso estable (punta de flecha) vista a través del microscopio de trasplante con un aumento de 40x. Barras de escala = 100 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig04.jpg"> Figura 4: El proceso de trasplante bajo el microscopio. (A) Aguja colocada fuera del animal donante, dirigida a las neuronas motoras del vago (verde, punta de flecha). (B) Aguja colocada dentro del animal donante después de tomar las neuronas del donante marcadas con fluorescencia (puntas de flecha). (C) Aguja que contiene varias neuronas donantes (puntas de flecha) colocadas fuera del animal huésped, dirigida a las neuronas motoras del huésped anterior (rojo, asterisco). (D) Animal huésped después del trasplante con aguja retirada. Un grupo de neuronas donantes trasplantadas que expresan GFP (punta de flecha) han sido expulsadas al huésped. Barras de escala = 30 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig05.jpg"> Figura 5: Resultados representativos. (A,B) Trasplantes exitosos. (A) La región anterior del núcleo motor vago de un huésped de 12 hpt (magenta) que contiene una neurona donante (verde, negro en A'). La neurona donante ha extendido varias neuritas (flechas en A'). (B) El núcleo motor vago (B-B') y las ramas del axón faríngeo (B''-B''', ramas del axón marcadas) de un huésped de 2 dpt (magenta) que contiene una neurona donante (verde, negro en B', B'''). La neurona donante ha extendido un nuevo axón a la rama 4 (puntas de flecha). Las figuras 5A,B representan diferentes animales. (C) Trasplante fallido. El núcleo motor vago de un huésped de 2 dpt (magenta). No hay neurona donante; más bien, hay una pequeña mancha (verde, negra en C'), que probablemente representa un fragmento de una neurona donante muerta (punta de flecha). Barras de escala = 20 μm. Abreviaturas: dpt = días después del trasplante; HPT = horas después del trasplante. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Trasplante celular de alta resolución en embriones y larvas de pez cebra

Development and regeneration occur by a process of genetically encoded spatiotemporally dynamic cellular interactions. The use of cell transplantation ...

high-resolution-cell-transplantation-in-embryonic-and-larval-zebrafish

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Pez cebra trasplante de células permite la combinación de la genética y la embriología para generar quimeras tejido específico. Este vídeo demuestra gástrula etapas trasplantes de células que han permitido a nuestro laboratorio para investigar el papel de las poblaciones de astro y señales específicas de orientación durante la formación de la comisura del cerebro anterior.

Tejido diana quimeras embrionarias: pez cebra Gástrula Trasplante de células

Demostramos un protocolo para generar embriones quiméricos de pez cebra para vivir el comportamiento de imagen celular durante la embriogénesis.

El trasplante de las buenas prácticas agrarias-que expresa Blastómeros de imágenes en vivo del desarrollo de la retina y el cerebro en embriones de pez cebra quiméricos

El pez cebra, un pequeño pez tropical, se ha convertido en un modelo popular para el estudio de la función de genes durante el desarrollo de vertebrados y la enfermedad. La expresión temporal y espacial de los genes diana se puede determinar...

Alta resolución todo el montaje de<em&gt; In Situ</em&gt; La hibridación en embriones de pez cebra para estudiar la expresión génica y la función

Aquí, presentamos un protocolo para el trasplante de células de músculo esquelético de pez cebra y rabdomiosarcoma embrionario (ERMS) en pez cebra mutante homocigoto rag2E450fs adulto inmunocomprometido. Este protocolo permite el análisis eficiente de la regeneración y transformación maligna de las células musculares.

Trasplante de células musculares normales y malignas en inmunológico comprometido adultos de pez cebra

Este protocolo describe un método para aislar células individuales de embriones de pez cebra, enriquecer para obtener células de interés, capturar células de pez cebra en sistemas multiplex de células individuales basados en microfluidos y evaluar la expresión génica de células individuales.

Aislamiento y caracterización de células individuales a partir de embriones de pez cebra

el seguimiento en directo de la retina progenitores WT individuales en los antecedentes genéticos distintos permite la evaluación de la contribución de la señalización no autónomo celular durante la neurogénesis. Aquí, una combinación de gen desmontables, la generación de quimera a través de la transferencia de embriones y la imagen de lapso de tiempo confocal in vivo se utilizó para este propósito.

En vivo de imágenes de transgénicos de la Expresión Génica en el Estimado de retina progenitores en embriones de pez cebra quiméricos para estudiar celulares Influencias no autónomos

Presentamos un protocolo eficiente y fácil de usar para la preparación de cultivos celulares primarios de células de embriones de pez cebra para transfección celular directo imágenes así como un protocolo para preparar células primarias del cerebro del pez cebra adulto.

Cultura y transfección de células primarias de pez cebra

Las manipulaciones embriológicas como la extirpación y el trasplante de células son herramientas importantes para estudiar el desarrollo temprano. Este protocolo describe un dispositivo de trasplante simple y efectivo para realizar estas manipulaciones en embriones de pez cebra.

Un dispositivo de trasplante simple y efectivo para embriones de pez cebra

Este trabajo describe un protocolo para el sistema modular de transgénesis Tol2, un método de clonación basado en pasarela para crear e inyectar construcciones transgénicas en embriones de pez cebra.

El sistema Zebrafish Tol2: un enfoque de transgénesis modular y flexible basado en pasarelas

Describimos un protocolo para el xenotrasplante en la yema de embriones transparentes de pez cebra que se optimiza mediante un método de estadificación simple y rápido. Los análisis posteriores a la inyección incluyen la supervivencia y la evaluación de la carga de enfermedad de las células xenotrasplantadas mediante citometría de flujo.

Un método sencillo, rápido y eficaz para el análisis de xenotrasplantes tumorales en embriones transparentes de pez cebra

Aprenda el trasplante celular de alta resolución en embriones y larvas de Danio rerio para estudiar la dinámica espaciotemporal de señalización neuronal durante el desarrollo y la regeneración.

Trasplante celular de alta resolución en embriones y larvas de pez cebra

Explorar más videos