Name: Optimización de la preparación de antígenos para el ensayo de inhibición de la hemaglutinación de la serología del virus de la enfermedad de Newcastle (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Aprende a optimizar la preparación de antígenos para ensayos de inhibición de la hemaglutinación del virus de la enfermedad de Newcastle. Este método mejora la detección de anticuerpos y la vigilancia en aves de corral.

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La aprobación del protocolo fue otorgada por el comité institucional local de cuidado y uso de animales. Todos los procedimientos con antígenos de virus vivos y muestras de suero clínico se realizaron en un laboratorio de Bioseguridad Nivel 2, de acuerdo con los protocolos de seguridad establecidos.
1. Preparación de suspensión de glóbulos rojos de pollo al 1%
<ol>
	<li>Añada 3 mL de solución de Alserver (anticoagulante) en un tubo de centrífuga cónico estéril de 15 mL.</li>
	<li>Recoja 1 mL de sangre de la vena del ala de cada uno de los tres pollos no inmunes (sin anticuerpos contra el VEN). Transfiera inmediatamente la sangre al tubo que contiene el anticoagulante y mezcle suavemente.</li>
	<li>Llene el tubo con solución salina estéril tamponada con fosfato 1x (PBS, pH 7,2-7,4) hasta un volumen total de 12 ml y mezcle suavemente. Centrifugar a 500 × g durante 10 min utilizando un rotor horizontal.</li>
	<li>Retire con cuidado el sobrenadante y la capa de glóbulos blancos. Repita los pasos 1.3 y 1.4 2x para obtener el pellet RBC.</li>
	<li>Pipetear 1 mL del pellet de RBC en 99 mL de PBS estéril, para preparar una suspensión de RBC al 1%. NOTA: El volumen requerido de la suspensión de glóbulos rojos de pollo al 1% se estima en 3 mL/placa (25 μL/pocillo x 96 pocillos x 1,25 = 3,0 mL; donde 1,25 representa el desperdicio de pipeteo para garantizar un volumen suficiente).</li>
</ol>
2. Reconstitución del antígeno liofilizado o suero
<ol>
	<li>Añadir 2 mL de PBS estéril a la ampolla que contiene el antígeno liofilizado o suero. Agite suavemente la ampolla y déjela reposar durante 2-3 minutos para minimizar las burbujas y asegurar la disolución completa. NOTA: Siga las instrucciones específicas del fabricante, ya que en este estudio no se compararon diferentes tipos de materiales liofilizados.</li>
	<li>Alicuente la solución reconstituida en tubos de centrífuga de 1,5 mL y congele a -20 °C hasta su uso. NOTA: Vuelva a determinar el título de HA cada vez que se descongele y use el antígeno, o cuando se prepare una nueva suspensión de glóbulos rojos.</li>
</ol>
3. Valoración de antígenos de HA
<ol>
	<li>Dispensar 40, 80, 120 y 160 μL de PBS, respectivamente, en cuatro pocillos adyacentes de una placa de microtitulación desechable de 96 pocillos con fondo en V, luego agregar 20 μL de antígeno a cada pocillo y mezclar pipeteando hacia arriba y hacia abajo 10 veces para lograr diluciones de 1:3, 1:5, 1:7 y 1:9, respectivamente. En la Figura 1 se muestra un diagrama esquemático de la operación de dilución.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig1.jpg"> 
Figura 1: Diagrama esquemático que ilustra el procedimiento para diluir la solución de antígeno en el ensayo de hemaglutinación. La solución de antígeno se diluye en PBS en proporciones de 1:3, 1:5, 1:7 y 1:9, respectivamente. El PBS en pocillos o tubos de centrífuga se representa en azul, mientras que los antígenos se muestran en verde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<ol start="2">
	<li>Etiquete una nueva placa de microtitulación. Agregue 25 μL de PBS a cada pocillo en las filas 1-5.</li>
	<li>Coloque 25 μL de las soluciones de antígeno diluido en los primeros pocillos de las filas 1-5 con una pipeta multicanal y mezcle pipeteando hacia arriba y hacia abajo al menos 5 veces.</li>
	<li>Transfiera 25 μL del primer pocillo de cada fila al segundo pocillo, mezclando bien. Continúe transfiriendo de un pozo al siguiente, hasta la 11ª columna, para crear diluciones en serie dobles (1:2 a 1:2048). Deseche 25 μL después de la 11ª columna.</li>
	<li>Agregue 25 μL de PBS a cada pocillo, comenzando con los pocillos que contienen la concentración de antígeno más baja.</li>
	<li>Agregue 25 μL de suspensión de glóbulos rojos de pollo al 1% a cada pocillo, nuevamente comenzando con los pocillos que contienen la concentración de antígeno más baja.</li>
	<li>Agite la placa en un agitador de microplacas durante ~ 20 s para mezclar bien.</li>
	<li>Déjelo reposar en la mesa de trabajo a temperatura ambiente (20-25 °C) durante ~30 min hasta que el RBC de la 12ª columna se asiente por completo. Para conocer el diseño de la placa, consulte la Figura 2.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig2.jpg"> 
Figura 2: Disposición esquemática de una microplaca utilizada en el ensayo de hemaglutinación. La primera columna de las filas 1 a 5 contiene diluciones iniciales sin diluir y varias diluciones de la solución de antígeno, seguidas de una dilución en serie doble de izquierda a derecha hasta la columna 11. El control PBS se coloca en la última columna. El gradiente de oscuro a claro indica una disminución de la concentración de antígenos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<ol start="9">
	<li>Lea y registre los resultados. La HA se determina inclinando la placa 90° durante ~25 s y observando la presencia o ausencia de flujo en forma de lágrima de los glóbulos rojos. La dilución más alta, que muestra hemaglutinación completa (sin flujo al agua), representa 1 unidad de AH. Los pozos de la 12ª columna sirven como controles RBC (negativos).</li>
	<li>Calcule el título de HA de cada fila utilizando la Tabla 1, cuyo máximo se utiliza para la preparación de la solución de antígeno 4-HAU. Por ejemplo, si a, b, c, d y e son iguales a 9, 8, 7, 6, 6, respectivamente, entonces 3 x 28 = 768 es el valor máximo y es el título de HA del stock de antígenos.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antígenos</td>
			<td>Columna de dilución más alta de HA completo</td>
			<td>Título de HA de material sin diluir</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Existencias sin diluir</td>
			<td>un</td>
			<td>2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dilución 3 veces</td>
			<td>b</td>
			<td>3 x 2b</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dilución de 5 veces</td>
			<td>c</td>
			<td>5 x 2c</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dilución de 7 veces</td>
			<td>d</td>
			<td>7 x 2d</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dilución de 9 veces</td>
			<td>e</td>
			<td>9 x 2e</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: Resultados del ensayo de HA y cálculo del título de HA de la solución madre.
4. Preparación de la solución de antígeno 4-HAU
<ol>
	<li>Calcular el factor de dilución para la preparación de la solución de antígeno 4-HAU: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq3.jpg">. Determine el volumen total de 4-HAU necesario: V = 3 ml x número de microplacas. A continuación, calcule los volúmenes necesarios de solución madre de antígeno: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq5.jpg">, y PBS: Vp = V - Va. NOTA: Los volúmenes se miden en mililitros. Calcule 3 mL por placa de microtitulación del 4-HAU (25 μL/pocillo x 96 pocillos x 1,25 = 3 mL).</li>
	<li>Pipetear el volumen calculado de PBS en un recipiente, luego agregar el volumen correspondiente de solución madre de antígeno y mezclar bien para obtener la solución de antígeno 4-HAU. NOTA: La solución de antígeno 4-HAU debe usarse lo antes posible.</li>
</ol>
5. Valoración inversa de la solución de antígeno 4-HAU
<ol>
	<li>Dispensar 25, 50, 75, 100, 125 y 150 μL de PBS en seis pocillos adyacentes de una placa de microtitulación, luego agregue 25 μL de la solución de antígeno 4-HAU a cada pocillo y mezcle pipeteando hacia arriba y hacia abajo 10 veces. NOTA: Diluya la solución de antígeno 4-HAU con PBS en diluciones de 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 y 1:7. En la Figura 3 se muestra un diagrama esquemático de la operación de dilución.</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig3.jpg"> 
Figura 3: Diagrama esquemático del procedimiento de dilución de la solución de 4 unidades de hemaglutinación en retrotitulación. La solución de trabajo 4-HAU se diluye con PBS en proporciones de 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 y 1:7. El PBS se representa en azul y los antígenos en verde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<ol start="2">
	<li>Transfiera 25 μL de cada solución de antígeno diluida a los pocillos de otra fila utilizando una pipeta multicanal. Añadir 25 μL de PBS a un pozo extra como un control negativo.</li>
	<li>Agregue 25 μL de PBS a cada pocillo, luego agregue 25 μL de glóbulos rojos de pollo al 1% a cada pocillo.</li>
	<li>Agite la placa en un agitador de microplacas durante ~ 20 s para mezclar.</li>
	<li>Déjelo reposar en la mesa de trabajo a temperatura ambiente (20-25 °C) durante ~30 minutos hasta que los glóbulos rojos del control negativo se hayan asentado por completo.</li>
	<li>Lea y registre los resultados. NOTA: El pocillo de control negativo no debe mostrar HA. Idealmente, la dilución 1:4 es exactamente la dilución más alta con HA completo. Si el título de la solución de 4-HAU es superior a 4, la dilución más alta puede ser 1:5, 1:6 o 1:7; si es menor, puede ser 1:2 o 1:3. En la Figura 4 se muestra un diseño esquemático de la valoración inversa y los resultados representativos.</li>
</ol>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig4.jpg"> 
Figura 4: Disposición esquemática de los pozos para la retrovaloración y resultado representativo. La solución de trabajo diluida de 4-HAU se transfiere a una nueva fila, con un control PBS adicional agregado. El gradiente de verde oscuro a verde claro indica la concentración de antígeno de mayor a menor. Los resultados representativos demuestran que la dilución 1:4 es la dilución más alta, mostrando una hemaglutinación completa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<ol start="7">
	<li>Ajuste o reformule la solución de antígeno 4-HAU si es necesario. NOTA: Si el volumen de la solución de antígeno 4-HAU utilizada en la retrovaloración es del ≤1% del volumen total (el volumen de la solución de antígeno 4-HAU ≥ 15 mL), consulte la Tabla 2 para obtener ajustes específicos. Por ejemplo, si la dilución más alta con HA completo es 1:2, el título de la solución de antígeno 4-HAU es ahora 2, y se debe agregar un volumen igual de antígeno que en la preparación anterior de la solución de antígeno 4-UA. Por el contrario, si la dilución más alta de AH completo es 1:6, el título es ahora 6 y se debe reponer la mitad del volumen de PBS. Si el volumen utilizado en la retrovaloración supera el 1% del total (el volumen de la solución de antígeno 4-HAU &lt; 15 ml), reformule la solución de antígeno 4-HAU utilizando el factor de dilución corregido. Consulte la Tabla 3 para ver las correcciones específicas. Por ejemplo, si la dilución más alta de HA completo es 1:2, el título de la solución de antígeno 4-HAU es ahora 2 y el factor de dilución debe ajustarse a 1/2 del original. Por el contrario, si la dilución más alta de HA completo es 1:6, el título de la solución de antígeno 4-HAU es ahora 6 y el factor de dilución se ajusta a 3/2 del original.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Título de HA de la valoración inversa</td>
			<td>Reposición de antígeno o PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>VA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>VA/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>Vp/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>Vp/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>3Vp/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 2: Tabla de referencia para ajustar la concentración de 4-HAU en función de los resultados de la retrovaloración. Va y Vp representan los volúmenes de antígeno y PBS utilizados en la formulación de la solución de antígeno 4-HAU, respectivamente.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Título de HA de la valoración inversa</td>
			<td>Corrección del factor de dilución</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>3D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>5D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>3D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>7D/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 3: Tabla de referencia de la corrección del factor de dilución para la repreparación del antígeno 4-HAU. D representa el factor de dilución utilizado previamente en la preparación del antígeno 4-HAU.
6. Preparación del suero
<ol>
	<li>Recoja ~ 1 ml de sangre de las alitas de pollo sin usar un anticoagulante.</li>
	<li>Transfiera la sangre a un tubo de centrífuga de 1,5 mL e incube a 37 °C durante ~2 h. Centrifugar a 3.000 x g durante 10 minutos y aspirar cuidadosamente el sobrenadante en un tubo nuevo.</li>
</ol>
7. Ensayo HI
<ol>
	<li>Etiquete las placas de microtitulación de acuerdo con el diseño del ensayo. Añada 25 μL de PBS a cada pocillo de las columnas 1 a 11, y 50 μL a los pocillos de la columna 12, utilizando una pipeta multicanal.</li>
	<li>Agregue 25 μL de suero al primer pocillo de cada fila, incluidas las filas de control de suero positivas y negativas. Mezcle bien pipeteando hacia arriba y hacia abajo al menos 5 veces.</li>
	<li>Transfiera 25 μL del primer pocillo de cada fila al segundo pocillo y mezcle bien. Continúe transfiriendo y mezclando del segundo pocillo al tercero, y así sucesivamente, hasta la 10ª columna. Deseche 25 μL de líquido del pocillo en la 10ª columna después de mezclar.</li>
	<li>Agregue 25 μL de antígeno 4-HAU a cada pocillo en las columnas 1-11 en la dirección de la concentración sérica baja a alta.</li>
	<li>Agite la placa en un agitador de microplacas durante ~20 s. Déjelo reposar en la mesa de trabajo durante ~30 min.</li>
	<li>Agregue 25 μL de glóbulos rojos de pollo al 1% a cada pocillo en la dirección de la concentración sérica baja a alta.</li>
	<li>Agite la placa en un agitador de microplacas durante ~ 20 s para mezclar bien. Déjelo reposar en la mesa de trabajo durante ~30 minutos hasta que los glóbulos rojos de los pozos de control PBS estén completamente asentados.</li>
	<li>Lea y registre los resultados. NOTA: El título de HI es la dilución sérica más alta que inhibe completamente la hemaglutinación del antígeno 4-HAU. En la última columna de cada fila se puede observar un flujo de glóbulos rojos en forma de lágrima, inclinando la placa 90° durante 25 s. La HA completa (sin transmisión) se puede observar en el penúltimo pozo desde el final de cada fila. Los resultados válidos de las pruebas exigen que el título de IH del control sérico positivo esté dentro de una dilución del título de IH conocido; el título de IH del control sérico negativo será de ≤ 2 log2; y la ausencia de auto-HA del control de RBC. Para obtener un diagrama esquemático del flujo de trabajo del ensayo de alta disponibilidad, consulte la figura 5.</li>
</ol>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig5.jpg"> 
Figura 5: Diagrama esquemático del flujo de trabajo del ensayo de hemaglutinación. El PBS está representado en azul, el suero en amarillo, la solución de antígeno 4-HAU en verde y la suspensión de glóbulos rojos de pollo al 1% en rojo. Las flechas indican el orden de dispensación de líquidos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig5large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<meta charset="utf8"></head><body>Preparación simplificada del antígeno 4-HAU para la detección precisa de anticuerpos contra el VEN

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</ol>

El método optimizado propuesto en este artículo presenta un enfoque para preparar con precisión la solución de antígeno 4-HAU. A pesar de que las directrices de la OIE y de la UE sugieren diluciones iniciales para la valoración del AH, no proporcionan detalles precisos sobre las proporciones de dilución a utilizar ni ofrecen metodologías específicas11,12. Además, a pesar de que la FAO y la OIE recomiendan la retrotitulación como medio para mejorar la precisión del 4-HAU, carecen de u...

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Tubo de centrífuga estéril (15 mL) &nbsp;</td><td>Centrífuga de</td> mesa de <td></td> baja velocidad refrigerada por aire Labshark 130201030 <td></td></tr><tr><td></td><td>Titan</td><td>LDC-5</td><td></td></tr><tr><td>Solución de Alserve</td><td></td> Centrífuga E607058 <td></td><td>Sangon Biotech</td></tr><tr><td></td><td>DLAB</td><td>9032002121</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta Pasteur Desechable</td><td>Titan</td><td>SWXG-004</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa estéril desechable (1 mL)</td><td>Beyotime</td><td>FS801-30PCS Placa de</td><td></td></tr><tr><td>microtitulación desechable de fondo en V (96 pocillos)</td><td>Labshark</td><td></td><td></td>130207001</tr><tr><td>Agitador de microplacas</td><td>Jiangsu Xinkang Medical Equipment Co., Ltd</td><td>XK96-3</td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Negativo Sera</td><td>Qingdao Regen Diagnostics Center</td><td></td><td></td>de Desarrollo</tr><tr><td>NDV HI Positivo Sera</td><td>Qingdao Regen Diagnostics Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Test Antigen Antigen</td><td>Qingdao Qingdao Regen Diagnostics Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS Solución (1x)&nbsp;</td>Tubo de centrífuga estéril <td>Adamas Life</td><td>C8020</td><td></td></tr><tr><td>(1,5 ml)</td><td>Labshark</td><td>130201012</td><td></td></tr></tbody></table>

optimización de la preparación de antígenos para el ensayo de inhibición de la hemaglutinación de la serología del virus de la enfermedad de newcastle

Optimization of Antigen Preparation for Hemagglutination Inhibition Assay of Newcastle Disease Virus Serology

Validación del título de la solución de antígeno 4-HAU formulada mediante el método optimizado El estudio empleó varias diluciones de la solución madre de antígeno para determinar con precisión el título de HA, lo que facilitó el cálculo del factor de dilución para la preparación de la solución de antígeno 4-HAU. Los resultados revelan que el método optimizado es eficiente y preciso, lo que reduce el número de procedimientos repetitivos de valoración y ajuste. En el primer escenario, un título inicial...

Optimización de la preparación de antígenos para el ensayo de inhibición de la hemaglutinación de la serología del virus de la enfermedad de Newcastle

Accurate assessment of Newcastle disease virus (NDV) antibody titers is crucial for effective poultry disease control and surveillance. This article ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

El video muestra un ensayo de inhibición de la hemaglutinación para detectar anticuerpos séricos contra antígenos específicos. La confirmación de la inhibición de la hemaglutinación en el pocillo de prueba y la hemaglutinación en el pocillo de control se logra a través de patrones visuales distintos. Este ensayo desempeña un papel crucial en la evaluación de la respuesta inmunitaria, la eficacia de las vacunas y el estudio de las infecciones virales en virología e inmunología.

Ensayo de inhibición de la hemaglutinación para detectar anticuerpos séricos contra un antígeno diana

Este video muestra ensayos de microneutralización para medir anticuerpos neutralizantes utilizando células de riñón canino Madin-Darby que sobreexpresan ácido siálico ligado a α2,6 en sueros humanos. Este ensayo se utiliza a menudo para la serología humana de la...

Un ensayo de microneutralización para medir los títulos de anticuerpos neutralizantes en el suero humano

Este video muestra un ensayo que mide los títulos de anticuerpos inhibidores de la neuraminidasa (NA) de la influenza en una muestra de suero. Se añade una muestra de suero que contiene anticuerpos contra el NA a una placa de micropocillos recubierta de fetuina. Al agregar el virus, los anticuerpos evitan que el NA viral escinda la fetina y exponga su fracción de galactosa. A continuación, se añade una lectina conjugada con peroxidasa, que se une a la galactosa expuesta. El título de...

Un ensayo para medir los títulos de anticuerpos de inhibición de la neuraminidasa de la influenza

Virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) se ha estudiado ampliamente en los últimos años con el fin de desarrollar nuevos vectores para la vacunación y la terapia, entre otros. Estos estudios han sido posible debido a las técnicas para rescatar virus recombinante a partir de cDNA, tales como las que se describen aquí.

Rescate del virus de la enfermedad de Newcastle recombinante a partir de cDNA

A continuación, presentamos un protocolo para generar un adenovirus divalente tipo 5 (Ad5) vectores de prueba de principio Ad5 / H5-HVR1-Kwas-HVR5-Su 6 mediante la utilización de la estrategia de antígeno de la cápside-Incorporación. Este vector se demostró la aptitud para exhibir cualitativa, la capacidad de escapar de sueros Ad5-positivo in vitro, y la antigenicidad, así como la inmunogenicidad de los antígenos incorporados.

La utilización de la Estrategia de la cápside-Incorporación Antigen para el desarrollo de enfoques adenovirus serotipo 5-Vectored de vacunas

Describimos el ensayo de lectina ligado a enzimas (ELLA) para medir los títulos de anticuerpos inhibidores de la neuraminidasa (NA) de la influenza en sueros. El ensayo utiliza aglutinina de cacahuete para cuantificar los residuos de galactosa que se vuelven accesibles cuando la NA elimina el ácido siálico de las placas de 96 pocillos recubiertas de fetuina.

La medición de la influenza neuraminidasa inhibición títulos de anticuerpos mediante un ensayo de lectina ligado a enzimas

Este estudio describe una   -Imagen basado ensayo de micro-neutralización para analizar las relaciones antigénicas entre los virus. El protocolo emplea un escáner de superficie plana y tiene cuatro pasos, incluyendo la titulación, la cuantificación de titulación, neutralización, y la cuantificación de neutralización. El ensayo funciona bien con pdm09 corriente que circula la gripe A (H1N1), A (H3N2), virus A y B.

Optimización de un ensayo cuantitativo micro-neutralización

Los protocolos presentados describen cómo realizar un ensayo de inhibición de hemaglutinación para cuantificar los títulos de anticuerpos específicos de la gripe de las muestras de suero de los receptores de la vacuna de influenza. El primer ensayo determina las concentraciones óptimas de antígeno viral por hemaglutinación. El segundo ensayo cuantifica los títulos de anticuerpos específicos de la gripe por inhibición de la hemaglutinación.

Un ensayo de hemaglutinación optimizado inhibición (HI) para cuantificar los títulos de anticuerpos específicos de la gripe

Aquí proporcionamos un procedimiento detallado para la producción, purificación y cuantificación del virus de la enfermedad de Newcastle recombinante de alto título. Este protocolo produce consistentemente &gt; 6 × 109 unidades formadoras de placa/ml, proporcionando cantidades de virus apropiadas para estudios in vivo en animales. Se describen ensayos de control de calidad adicionales para garantizar la seguridad in vivo .

Producción de virus de la enfermedad de Newcastle recombinante de alto título a partir de líquido alantoico

Se describe un método para procesar y la pantalla de campo recogidos mosquitos para una diversidad de virus mediante el ensayo de cultivo de células Vero. Mediante el empleo de esta técnica, hemos detectado nueve virus distintos de 4 familias taxonómicas de mosquitos recogidos en Connecticut.

Detección del virus infeccioso de campo recogidos por los mosquitos del ensayo cultivo celular Vero

Aprende a optimizar la preparación de antígenos para ensayos de inhibición de la hemaglutinación del virus de la enfermedad de Newcastle. Este método mejora la detección de anticuerpos y la vigilancia en aves de corral.

Optimización de la preparación de antígenos para el ensayo de inhibición de la hemaglutinación de la serología del virus de la enfermedad de Newcastle (Video) | JoVE Journal

Optimización de la preparación de antígenos para el ensayo de inhibición de la hemaglutinación de la serología del virus de la enfermedad de Newcastle

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