Name: Enriquecimiento de proteínas subcelulares en Leptospira mediante un enfoque de fraccionamiento basado en Triton X-114 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Aprende a enriquecer proteínas subcelulares en Leptospira mediante fraccionamiento con Triton X-114 y espectrometría de masas. Este método permite identificar factores de virulencia en bacterias patógenas gramnegativas.

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<li>Madathiparambil, M. G., Cattavarayane, S., Perumana, S. R., Manickam, G. D., Sehgal, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+46+kDa+gelatinase+on+the+outer+membrane+of+Leptospira%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Presence of 46 kDa gelatinase on the outer membrane of Leptospira.</a> Curr Microbiol. 62 (5), 1478-1482 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ácido acético</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 695092</td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 32201</td><td></td></tr><tr><td>Acrilamida</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-3553</td><td></td></tr><tr><td>Persulfato de amonio</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-3678</td><td></td></tr><tr><td>Equilibrar</td><td>&nbsp; SHIMADUZ</td><td>&nbsp; Z741079</td><td></td></tr><tr><td>Bis Acrilamida</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; M7279</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina fracción V (BSA)</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-8022</td><td></td></tr><tr><td>Azul de bromofenol</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; B-8026</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga (50 ml)</td><td>Tarson</td><td>500020</td><td></td></tr><tr><td>Matraz cónico con tapón (150 mL)</td><td>Tarson</td><td>431030</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de enfriamiento</td><td>&nbsp; Eppendorf</td><td>&nbsp; 5355316200</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie azul brillante</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>1.12553</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de campo oscuro</td><td>&nbsp; ZEISS</td><td>&nbsp; GmbH37081</td><td></td></tr><tr><td>Toallitas delicadas para tareas</td><td>Ciencia Kimtech</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Baño seco</td><td>&nbsp; Eppendorf</td><td>&nbsp; 535531620</td><td></td></tr><tr><td>Ellinghausen&ndash; McCullough&ndash; Johnson&ndash; Harris (EMJH) medio, Difco</td><td>&nbsp; Difco</td><td>&nbsp; 279410</td><td></td></tr><tr><td>Bandejas de gel: Las bandejas de gel deben tener al menos 2 cm de dimensiones más anchas y tener una superficie lisa y plana con tapa.</td><td>&nbsp; Hoefer</td><td>&nbsp; No aplicable</td><td></td></tr><tr><td>Vaso de vidrio (150 ml)</td><td>Tarson</td><td>421030</td><td></td></tr><tr><td>Glicina G8790</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; G-8898</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro secante Immobilon</td><td>Millipore</td><td>IBFP0813C</td><td></td></tr><tr><td>Configuración semiseca de inmunotransferencia</td><td>&nbsp; ATTA</td><td>&nbsp; AE-6675</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora: para incubar las bandejas de gel durante 18 horas a 37 ° C.</td><td>&nbsp; EYELA</td><td>&nbsp; SLI-700</td><td></td></tr><tr><td>Flujo de aire laminar</td><td>&nbsp; No aplicable</td><td>&nbsp; No aplicable</td><td></td></tr><tr><td>Luminol</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 09253</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio M8266</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; M8266</td><td></td></tr><tr><td>Agitador magnético</td><td>&nbsp; TARSON</td><td>&nbsp; 6040</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 17995-7</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de micropipeta (10 &micro; L&ndash; 10 ml)</td><td>Axygen</td><td>T-10, T-200-C, T-1000-C, T-10ML-C</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas</td><td>&nbsp; Eppendorf</td><td>&nbsp; EP2231300010</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos (1,5 ml Safe-Lock)</td><td>Eppendorf</td><td>EP022363212</td><td></td></tr><tr><td>Mini giro</td><td>&nbsp; Genaxy</td><td>&nbsp; GEN-MINI-6K</td><td></td></tr><tr><td>Lector multimodo</td><td>BMG LABTECH</td><td>&nbsp; S / N 413-3877</td><td></td></tr><tr><td>Leche descremada en polvo bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7409</td><td></td></tr><tr><td>Ácido P-cumárico</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; C9008</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>P4417&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Refrigerador</td><td>&nbsp; LG</td><td>&nbsp; GC-B217BLJ2</td><td></td></tr><tr><td>Balancín - Agitador oscilante o rotativo con baja velocidad para teñir el gel.</td><td>&nbsp; TARSON</td><td>&nbsp; 4080</td><td></td></tr><tr><td>CONFIGURACIÓN DE PÁGINA SDS- Aparato de electroforesis</td><td>&nbsp; Hoefer, Inc.</td><td>&nbsp; SE300-10A-1.0</td><td>&nbsp; Modelo Hoefer ' miniVE' que puede moldear gel de 10 cm x 8 cm de espesor de 1 mm.</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 5886</td><td></td></tr><tr><td>Dodecil sulfato de sodio (SDS)</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; L-4396</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; T-9281</td><td></td></tr><tr><td>Tritón X-114</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>648468</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Base (TRIS) T6066</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; T6066</td><td></td></tr><tr><td>Vórtice</td><td>&nbsp; TARSON</td><td>&nbsp; 3020</td><td></td></tr></tbody></table>

enriquecimiento de proteínas subcelulares en leptospira mediante un enfoque de fraccionamiento basado en triton x-114

Enriching Subcellular Proteins in Leptospira Using a Triton X-114-Based Fractionation Approach

En este experimento, empleamos la espiroqueta Leptospira como organismo modelo para extraer compartimentos subcelulares. Empleamos una metodología estratégica anclada en el punto de enturbiamiento y la concentración micelial crítica (CMC), aprovechando la efectividad de Triton X-114, un detergente no iónico (Figura 1). Antes de continuar, se realizó una estimación de proteínas para evaluar la concentración en cada fracción para una sola réplica biológica. Observamos una relación de ...

Enriquecimiento de proteínas subcelulares en Leptospira mediante un enfoque de fraccionamiento basado en Triton X-114

Prokaryotes lack precise subcellular organelles but exhibit distinct regions such as cytoplasm, inner membrane, periplasm, and outer membrane, where most ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

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Membrana-COLUMNA: una herramienta bioquímica para identificar las interacciones proteína-proteína de Proteínas de la Membrana En Vivo

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Enriquecimiento de lipoproteínas bacterianas y preparación de lipopéptidos N-terminal para la determinación estructural por espectrometría de masas

Un protocolo para la extracción de una chaperona de periplasmic metales de transición en el contexto de sus socios de Unión nativos y caracterización biofísica de su contenido de sustrato mediante rayos x se presenta absorción fluorescencia y radiometal.

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Este protocolo describe las técnicas utilizadas para determinar las estructuras de canal de iones por microscopia del cryo-electrón, incluyendo un sistema de baculovirus para expresar eficientemente genes en células de mamíferos con el mínimo esfuerzo y toxicidad, extracción de proteínas, purificación, y comprobación de la calidad, preparación de la red muestra y proyección, así como recopilación de datos y procesamiento.

Expresión y purificación de los humanos sensibles a lípido catiónico canal TRPC3 para la determinación estructural por microscopia del Cryo-electrón de solo-partícula

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Enriquecimiento de proteínas subcelulares en Leptospira mediante un enfoque de fraccionamiento basado en Triton X-114

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