Name: Aislamiento y registro de microglía del hipocampo de ratones adultos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:47:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Aprenda a aislar microglía del hipocampo de ratones adultos para registrar corrientes de potasio mediante patch-clamp de célula completa. Este protocolo permite estudiar la actividad de canales iónicos en su entorno nativo.

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<meta charset="utf8"></head><body>Registro electrofisiológico de la microglía del hipocampo de ratones adultos

<ol><li>Ginhoux, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+mapping+analysis+reveals+that+adult+microglia+derive+from+primitive+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages.</a> Science. 330 (6005), 841-845 (2010).</li>
<li>Tremblay, M. E., Lowery, R. L., Majewska, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+interactions+with+synapses+are+modulated+by+visual+experience%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Microglial interactions with synapses are modulated by visual experience.</a> PLoS Biol. 8 (11), e1000527(2010).</li>
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<li>Wohleb, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-microglia+interactions+in+mental+health+disorders%3A+For+better%2C+and+for+worse%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neuron-microglia interactions in mental health disorders: For better, and for worse.</a> Front Immunol. 7, 544(2016).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratskya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol Rev. 91 (2), 461-553 (2011).</li>
<li>Sarkar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+ion+channels%3A+Key+players+in+non-cell+autonomous+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Microglial ion channels: Key players in non-cell autonomous neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 174, 105861(2022).</li>
<li>Hanisch, U. K., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+Active+sensor+and+versatile+effector+cells+in+the+normal+and+pathologic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia: Active sensor and versatile effector cells in the normal and pathologic brain.</a> Nat Neurosci. 10 (11), 1387-1394 (2007).</li>
<li>Collins, H. Y., Bohlen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+rodent+microglia+to+promote+a+dynamic+ramified+morphology+in+serum-free+medium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of rodent microglia to promote a dynamic ramified morphology in serum-free medium.</a> J Vis Exp. 133, e57122(2018).</li>
<li>Lyons, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+physiologic+properties+of+microglia+and+blood-borne+cells+in+rat+brain+slices+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Distinct physiologic properties of microglia and blood-borne cells in rat brain slices after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 20 (11), 1537-1549 (2000).</li>
<li>Li, Q., Lan, X., Han, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tmem119%2FSALL1+and+CCR2%2FCD69+in+FACS-sorted+microglia-+and+monocyte%2Fmacrophage-enriched+cell+populations+after+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Expression of tmem119/SALL1 and CCR2/CD69 in FACS-sorted microglia- and monocyte/macrophage-enriched cell populations after intracerebral hemorrhage.</a> Front Cell Neurosci. 12, 520(2018).</li>
<li>Sarkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+modulates+neuroinflammation+and+neurodegeneration+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 modulates neuroinflammation and neurodegeneration in Parkinson's disease.</a> J Clin Invest. 130 (8), 4195-4212 (2020).</li>
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<li>Delbridge, A. R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+culture+microglia+exhibit+molecular+similarity+to+acutely+isolated+adult+microglia+and+provide+a+platform+to+study+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice culture microglia exhibit molecular similarity to acutely isolated adult microglia and provide a platform to study neuroinflammation.</a> Front Cell Neurosci. 14, 592005(2020).</li>
<li>Volden, T. A., Reyelts, C. D., Hoke, T. A., Arikkath, J., Bonasera, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+flow+cytometry+and+magnetic+bead-based+methods+to+enrich+cns+single+cell+suspensions+for+quiescent+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Validation of flow cytometry and magnetic bead-based methods to enrich cns single cell suspensions for quiescent microglia.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 10 (4), 65-665 (2015).</li>
<li>Wulff, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voltage-gated+kv1.3+k%28%2B%29+channel+in+effector+memory+t+cells+as+new+target+for+ms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The voltage-gated kv1.3 k(+) channel in effector memory t cells as new target for ms.</a> J Clin Invest. 111 (11), 1703-1713 (2003).</li>
<li>Tan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocytin-labeling+in+whole-cell+recording%3A+Electrophysiological+and+morphological+properties+of+pyramidal+neurons+in+CYLD-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Biocytin-labeling in whole-cell recording: Electrophysiological and morphological properties of pyramidal neurons in CYLD-deficient mice.</a> Molecules. 28 (10), 4092(2023).</li>
<li>Manitz, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+characterization+of+microglia+in+the+offspring+of+polyi%3AC+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric characterization of microglia in the offspring of polyi:C treated mice.</a> Brain Res. 1636, 172-182 (2016).</li>
<li>Xu, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+protocol+of+mouse+hippocampal+primary+microglia+culture+by+using+manual+dissociation%2C+magnetic+activated+cell+sorting+and+tic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Sheng+Li+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">A modified protocol of mouse hippocampal primary microglia culture by using manual dissociation, magnetic activated cell sorting and tic medium.</a> Sheng Li Xue Bao. 71 (6), 883-893 (2019).</li>
<li>Zelenka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+protocol+for+the+isolation+of+highly+purified+neonatal+murine+microglia+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Novel protocol for the isolation of highly purified neonatal murine microglia and astrocytes.</a> J Neurosci Methods. 366, 109420(2022).</li>
<li>Keren-Shaul, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+microglia+type+associated+with+restricting+development+of+alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A unique microglia type associated with restricting development of alzheimer's disease.</a> Cell. 169 (7), 1276-1290.e17 (2017).</li>
<li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Various+cell+populations+within+the+mononuclear+fraction+of+bone+marrow+contribute+to+the+beneficial+effects+of+autologous+bone+marrow+cell+therapy+in+a+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Various cell populations within the mononuclear fraction of bone marrow contribute to the beneficial effects of autologous bone marrow cell therapy in a rodent stroke model.</a> Transl Stroke Res. 7 (4), 322-330 (2016).</li>
<li>Gingras, M., Gagnon, V., Minotti, S., Durham, H. D., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+protocols+for+isolation+of+primary+motor+neurons%2C+astrocytes+and+microglia+from+embryonic+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized protocols for isolation of primary motor neurons, astrocytes and microglia from embryonic mouse spinal cord.</a> J Neurosci Methods. 163 (1), 111-118 (2007).</li>
<li>Ramesha, S., Rayaprolu, S., Rangaraju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+approach+to+characterize+phagocytic+properties+of+acutely-isolated+adult+microglia+and+brain+macrophages+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry approach to characterize phagocytic properties of acutely-isolated adult microglia and brain macrophages in vitro.</a> J Vis Exp. 160, e61467(2020).</li>
<li>Mccarthy, K. D., De Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J Cell Biol. 85 (3), 890-902 (1980).</li>
<li>Sakmann, B., Edwards, F., Konnerth, A., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+used+for+studying+synaptic+transmission+in+slices+of+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Q+J+Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques used for studying synaptic transmission in slices of mammalian brain.</a> Q J Exp Physiol. 74 (7), 1107-1118 (1989).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri de 100 mm</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Falcon de 15 mL BD</td><td></td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 24 pocillos</td><td>BD</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de 35 mm</td><td>Corning</td> <td>353001-50</td><td></td></tr> <tr><td>mL Tubos Falcon</td><td>BD</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; Detección de células m</td><td>Miltenyi</td><td>130-095-823</td><td>Para eliminar los grupos celulares antes de la clasificación celular</td></tr><tr><td>Kit de disociación cerebral de ratón adulto</td><td>Miltenyi</td><td>130- 107-677</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-CD11b</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA74</td><td>Cabra Anti-ratón IgG también disponible. Para bloquear las inmunoglobulinas endógenas.</td></tr><tr><td>Anticuerpo Anti-Iba 1</td><td>SYSY</td><td>234308</td><td>Cabra Anti-cobaya IgG) también disponible. Para bloquear las inmunoglobulinas endógenas.</td></tr><tr><td>Axon Digidata 1440A</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axon MultiClamp 700B Amplificador</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA Albúmina Fracción V</td><td>BioFrox</td><td>4240GR500</td><td>Suero</td></tr><tr><td>C57BL/6 ratones&nbsp;</td>Centro <td></td><td></td>de <td>Animales del Laboratorio Médico de Guangdong</td></tr><tr><td>CD11 b/c MicroBeads</td><td>Miltenyi</td><td>130-105-634</td><td></td></tr><tr><td>Hidrato de cloral</td><td>Absin</td><td>abs47051394</td><td>Ampliamente utilizado como anestesia en ratones</td></tr><tr><td>Clampfit 10.6</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Zeiss</td><td>&nbsp; LSM 800</td><td></td></tr><tr><td>Medio de cultivo</td><td>Fisher Scientific</td><td></td> <td>C11995500BT-DAPI</td></tr> <tr><td>colorante</td><td>Beyotime</td><td>C1002</td><td></td></tr><tr><td>Extractor de electrodos</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Servicebio</td><td>G4203</td><td></td></tr><tr><td>Agitador horizontal</td><td>SCILOGEX</td><td>SLK-O3000-S</td><td></td></tr><tr><td>Software de análisis de imágenes</td><td>Fiji</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Columnas MACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Separadores MACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Fisher Scientific</td><td>T353-500</td><td>Use una solución fresca al 4% en 1X PBS, pH 7.2-7.4.</td></tr><tr><td>Poli-L-lisina</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0313</td><td>Recubrimiento antideslizante</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento y registro de microglía del hipocampo de ratones adultos

Isolation and Whole-Cell Patch-Clamp Recording of Hippocampal Microglia from Adult Mice

Brevemente, el proceso implica el aislamiento de la microglía del hipocampo del cerebro de ratón adulto, seguido de un registro de parche de estas células (Figura 1). El procedimiento comienza con la disección del hipocampo de ratones adultos C57BL/6J de 3 a 5 meses de edad. Específicamente, se extrae todo el cerebro después de la perfusión y se coloca en una placa de cultivo que contiene PBS helado (Figura 2A). Para asegurar el aislamiento agudo de las células del hipocampo, se extirpa la corteza cerebral y se aísla intacto el tejido del hipocampo en forma de media luna (Figura 2B).
Para obtener una calidad celular óptima y posteriores registros de alta calidad de patch-clamp de células completas, es crucial controlar el tiempo de digestión durante la preparación de la suspensión de una sola célula. El estudio agitó manualmente el tejido del hipocampo en la mezcla de enzimas y limitó estrictamente el período de digestión a no más de 15 minutos (Figura 3). A continuación, las células se aislaron mediante el método MACS, alcanzando una pureza de 86,20% ± 0,68%19,20. Para confirmar que estas células clasificadas eran microglía, se probaron marcadores de superficie microglial por inmunofluorescencia utilizando anticuerpos anti-Iba1 y anti-CD11b, que se utilizan ampliamente para detectar la microglía18. Los resultados indicaron que las células aisladas eran CD11b e Iba1 positivas, lo que confirma el aislamiento exitoso de la microglía (Figura 4).
Finalmente, para evaluar si la microglía aislada agudamente es de alta calidad para los experimentos de seguimiento, describimos cómo realizar registros de patch-clamp de células completas para evaluar las corrientes de potasio de la microglía. La microglía registrada tuvo una capacitancia de membrana promedio de 10.42 ± 2.05 (Figura 5). Los resultados demostraron que las corrientes microgliales de potasio podían registrarse, lo que indica que la microglía agudamente aislada es adecuada para estudios neurobiológicos.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig01.jpg"> 
Figura 1: Resumen del procedimiento experimental. Hay cuatro pasos principales: los tejidos cerebrales se extraen cuidadosamente y el hipocampo se disecciona bilateralmente; Los tejidos del hipocampo se digieren para preparar una suspensión unicelular utilizando una mezcla de enzimas como se detalla en la sección de protocolo; las células objetivo se aíslan mediante un método de clasificación de células activado magnéticamente; y las corrientes de potasio en células aisladas agudamente se analizan mediante el registro de patch-clamp de células completas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig02.jpg"> 
Figura 2: Disección del hipocampo. (A) Todo el cerebro de un ratón de 3 a 5 meses de edad. (B) Hipocampo bilateral aislado. Barra de escala: 0,5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig03.jpg"> 
Figura 3: Diagrama esquemático que muestra la digestión de los tejidos del hipocampo. Ilustración de los pasos experimentales críticos, asegurando que el tejido del hipocampo se digiera en una suspensión unicelular mediante la adición de mezclas de enzimas a 37 °C con agitación continua durante un máximo de 15 minutos. Haga <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig03large.jpg" target="_blank">clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig04.jpg"> 
Figura 4: Identificación de la microglía del hipocampo aislada de forma aguda. Imágenes confocales representativas que muestran células positivas para CD11b (verde) e Iba1 (rojo) purificadas del hipocampo, lo que confirma que las células aisladas son microglía. Barra de escala: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig05.jpg"> 
Figura 5: Registro de las corrientes de potasio de la microglía de toda la célula. (A) Se coloca un electrodo de registro en la superficie de la microglía del hipocampo aislada. Barra de escala: 20 μm. (B) Corrientes representativas de potasio de la microglía del hipocampo agudamente aislada en condiciones de pinza de voltaje. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Aislamiento y registro de microglía del hipocampo de ratones adultos

Microglia are resident immune cells in the brain that interact with neurons to maintain the homeostasis of the central nervous system (CNS). Studies show ...

isolation-whole-cell-patch-clamp-recording-hippocampal-microglia-from

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

La preparación de cortes de cerebro de agudos de hipocampo aislado, así como los registros simultáneos electrofisiológicas de los astrocitos y las neuronas...

Dos registros electrofisiológicos de sinápticamente respuestas evocadas neuronal y astroglial en agudas rodajas de hipocampo

El video muestra una técnica para aislar la microglía de la corteza del cerebro de un ratón adulto. En primer lugar, la corteza se somete a segmentación y homogeneización para eliminar las neuronas y otras células gliales, preservando la microglía. Después de eso, la suspensión celular se expone a microesferas magnéticas antimielina y a un campo magnético, separando efectivamente la microglía y las células mieloides de los restos de mielina y las células que contienen mielina.

Aislamiento de la microglía de la corteza del cerebro de un ratón adulto

El video muestra un protocolo para estudiar las interacciones sinápticas y las respuestas neuronales en un corte de cerebro de hipocampo de ratón transfectado. Consiste en iluminar neuronas sensoriales de largo alcance para desencadenar potenciales de acción y registrar los potenciales postsinápticos excitatorios resultantes en la neurona registrada mediante la técnica de patch-clamp de célula completa.

Fotoestimulación y registros de pinza de parche de células enteras de neuronas en cortes de hipocampo de ratón

Este video muestra el registro de la actividad rítmica de la red neuronal, también conocida como oscilaciones theta, en un hipocampo aislado. Los electrodos se insertan en varias capas y posiciones espaciales para detectar y analizar las oscilaciones theta. Esto muestra las composiciones neuronales únicas y la conectividad de la red neuronal a través de diferentes capas del hipocampo.

Registro in vitro de oscilaciones theta en el hipocampo del ratón

Una clave para el éxito de la investigación de la biología microglial es la preservación de immunofunction microglial ex vivo durante el aislamiento del tejido del SNC. Aislar microglia mediante agitación rotatoria resultados en cultivos de células de alta pureza y inmunofuncional según la evaluación de imágenes fluorescentes, inmunocitoquímica y ELISA después de la activación microglia con el lipopolisacárido estímulos proinflamatorias (LPS) y Pam 3 CSK 4 (Pam).

Aislamiento de cortical Microglia con Inmunofenotipo Conservas y funcionalidad de murinos Neonatos

Redes corticales son controlados por un conjunto pequeño, pero diverso de interneuronas inhibidoras. Investigación funcional de interneuronas por lo tanto requiere la grabación específica y la identificación rigurosa. Aquí se describe un enfoque combinado que involucra conjunto de células grabaciones de pares individuales o sinápticamente acoplados de neuronas con el etiquetado intracelular, post-hoc morfológica y inmuno análisis.

Plenario de células patch-clamp grabaciones de Morphologically- e identificados-neuroquímicamente interneuronas del hipocampo

Aquí, presentamos un protocolo para la grabación de la red neuronal rítmica teta y oscilaciones gamma de una preparación de hipocampo aislado todo. Describimos los pasos experimentales desde la extracción del hipocampo hasta los detalles de las grabaciones de parches de campo, unitarios y de células enteras, así como la estimulación optogenética del ritmo teta.

Tuning en la banda Theta Hippocampal<em&gt; In Vitro</em&gt;: Metodologías para la grabación del circuito septohippocampal de roedores aislados

Proporcionamos un protocolo para el aislamiento de la microglia de diferentes regiones diseccionadas de un hemisferio cerebral de ratón adulto, seguido de la preparación de la biblioteca semiautomática para la secuenciación profunda de ARN de una sola célula de transcriptomes de longitud completa. Este método ayudará a dilucidar la heterogeneidad funcional de la microglia en salud y enfermedad.

Aislamiento de microglia específica de la región del hemisferio cerebral de un ratón adulto para la secuenciación profunda del ARN de una sola célula

Presentamos un protocolo para preparar rodajas agudas del hipocampo dorsal-intermedio de ratones. Comparamos esta preparación transversal con el corte coronal en términos de calidad de las grabaciones y preservación de las características morfológicas de las neuronas grabadas.

Preparación de rodajas agudas del hipocampo dorsal para la grabación de células enteras y la reconstrucción neuronal en el dentate gyrus de ratones adultos

Este artículo describe un método para la observación crónica in vivo de la microglía en reposo en el hipocampo de ratón CA1 utilizando cirugía controlada con precisión y microscopía de dos fotones.

In vivo Imágenes crónicas de dos fotones de microglia en el hipocampo del ratón

Describimos un protocolo para aislar células microgliales del hipotálamo del ratón (o pequeñas estructuras cerebrales equivalentes) utilizando la clasificación de células activadas magnéticamente (MACS), en un tiempo relativamente corto. La microglía hipotalámica clasificada por MACS se puede utilizar para análisis ex vivo y se puede sembrar para realizar ensayos in vitro .

Aislamiento de microglía hipotalámica a partir de cerebro de ratón adulto recién perfundido mediante clasificación de células activadas magnéticamente  

Aprenda a aislar microglía del hipocampo de ratones adultos para registrar corrientes de potasio mediante patch-clamp de célula completa. Este protocolo permite estudiar la actividad de canales iónicos en su entorno nativo.

Aislamiento y registro de microglía del hipocampo de ratones adultos

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