Name: Inducción de la entrada de juveniles de dispersión de tercera etapa de Bursaphelenchus xylophilus en criptobiosis a través de la regulación osmótica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: Aprende a inducir la criptobiosis en juveniles de tercera etapa de Bursaphelenchus xylophilus mediante regulación osmótica con cloruro de potasio. Este protocolo permite estudiar mecanismos de resistencia al estrés por bajas temperaturas.

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1. Colección de <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq02.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
<ol>
	<li>Colección de discos infectados de P. massoniana NOTA: Todos los procedimientos cumplieron con las Medidas Administrativas para el Área Epidémica de la Enfermedad del Marchitamiento del Pino y la Madera Infectada y otras regulaciones aplicables. Se seleccionó como sitio de muestreo un bosque de P. massoniana infectado por B. xylophilus en el condado de Xiangshan, ciudad de Ningbo, provincia de Zhejiang. P. massoniana, que murió de la enfermedad del marchitamiento del pino, fue talada dentro del sitio de muestreo.<ol>
		<li>Recoja troncos redondos (de 5 cm de grosor) de las secciones superior, media e inferior del tronco principal de los árboles talados.</li>
		<li>Cortar los troncos redondos recolectados de P. massoniana en rodajas de 0,5-1 cm de grosor, luego recórtelos en tiras pequeñas de 2-3 cm de largo.</li>
		<li>Coloque las pequeñas tiras de madera en bolsas selladas y guárdelas en un laboratorio para su uso posterior.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Extracción de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
	<ol>
		<li>Conecte un tubo de goma al extremo estrecho de un embudo de vidrio de cuello largo con un diámetro aproximado de 15 cm. Asegure el tubo de goma con una llave de presión. Coloque el embudo ensamblado en un soporte de embudo.</li>
		<li>Envuelva las pequeñas tiras de madera completamente en una sola capa de papel de seda y luego colóquelas en el embudo. Agregue agua destilada al embudo hasta que todas las tiras de madera estén sumergidas. NOTA: Después de reposar durante 12-24 h, los nematodos migraron fuera de las tiras de madera y se asentaron en el fondo del embudo10. El papel de seda evitaba que los restos de madera se asentaran y permitía el paso de los nematodos.</li>
		<li>Suelte lentamente la llave de presión en la parte inferior del embudo y deje que 2000-5000 μL de la mezcla se filtren en una placa de Petri (5 cm de diámetro) para el examen microscópico y la identificación morfológica.</li>
		<li>Identifique <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus mediante la observación de características como estiletes, bulbos esofágicos medianos, gotas de lípidos y formas de cola "en forma de dedo"11.</li>
		<li>Bajo un microscopio, transfiera B. xylophilus individual <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> a un portaobjetos aspirando 10 μL de líquido junto con un nematodo usando una pipeta de 10 μL cada vez. Repita este proceso 30 veces para recolectar aproximadamente 300 μL de la mezcla que contiene nematodos.</li>
		<li>Después de la extracción de B. xylophilus, esterilice las tiras de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> madera restantes y los materiales de madera infectados para evitar una mayor contaminación.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Control del proceso de regulación osmótica
<ol>
	<li>Preparación de la mezcla de regulación osmótica<ol>
		<li>Prepare una solución acuosa de KCl al 8%.</li>
		<li>Con una pipeta, agregue 10 μL de la solución acuosa de KCl al 8% al portaobjetos que contiene la mezcla de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, produciendo aproximadamente 310 μL de una mezcla de nematodos y solución de KCl.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Regulación del aumento de la presión osmótica y la deshidratación de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus<ol>
		<li>Coloque el portaobjetos en la platina del microscopio, permitiendo que el agua se evapore de forma natural. Aumentaría gradualmente la presión osmótica del entorno circundante, lo que haría que los nematodos se deshidrataran durante aproximadamente 30-60 minutos. NOTA: El operador solo necesita esperar a que el agua se evapore naturalmente hasta que los cristales de KCL precipiten y observar el estado de los nematodos bajo un microscopio. Se necesitan unos 30-60 minutos para que 310 μL de la mezcla se evaporen naturalmente hasta que precipiten los cristales de KCL.</li>
		<li>Observe el proceso de deshidratación (p. ej., enroscamiento del cuerpo, agregación, etc.) de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus bajo el microscopio. Cuando el agua se evapora por completo y los cristales de KCl precipitan, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus deja de moverse y entra en criptobiosis.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Tratamiento del estrés a baja temperatura del criptobiótico <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
	<ol>
		<li>Coloque el criptobiótico <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus en un ambiente de temperatura constante de -20 °C durante 24 h.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Regulación de la disminución de la presión osmótica y rehidratación de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
	<ol>
		<li>Añadir aproximadamente 300 μL de agua destilada alrededor de los juveniles que habían sido sometidos a un tratamiento a baja temperatura con pipeta. El proceso de rehidratación, que dura unos 30-60 minutos, disminuye gradualmente la presión osmótica de su entorno circundante.</li>
		<li>Observe el proceso de rehidratación de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus (por ejemplo, estiramiento del cuerpo, reanudación del movimiento, etc.) bajo el microscopio. Calcular la tasa de supervivencia a las 24 h.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Criptobiosis de los juveniles de Bursaphelenchus xylophilus

<ol><li>Li, Y., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+on+the+trend+of+invasion+and+expansion+of+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Forest+Pest+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Analysis on the trend of invasion and expansion of Bursaphelenchus xylophilus.</a> Forest Pest and Disease. 37 (5), 1-4 (2018).</li>
<li>Futai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pine+wood+nematode%2C+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus.</a> Annu Rev Phytopathol. 51 (51), ?61(2013).</li>
<li>Crowe, J. H., Cooper, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryptobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Am%22%5BJournal%5D)">Cryptobiosis.</a> Sci Am. 225, 30-36 (1971).</li>
<li>Wharton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis.</a> Curr Biol. 25, 1107-1125 (2015).</li>
<li>Browne, J., Tunnacliffe, A., Burnell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%3A+plant+desiccation+gene+found+in+a+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis: plant desiccation gene found in a nematode.</a> Nature. 416 (6876), 38(2002).</li>
<li>Shatilovich, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+nematodes+from+late+Pleistocene+permafrost+of+the+Kolyma+river+lowland%5BTitle%5D)+AND+%22Dokl+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Viable nematodes from late Pleistocene permafrost of the Kolyma river lowland.</a> Dokl Biol Sci. 480 (1), 100-102 (2018).</li>
<li>Schottenfeld-Roames, J., Ghabrial, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osmotic+regulation+of+seamless+tube+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Osmotic regulation of seamless tube growth.</a> Nat Cell Biol. 15 (2), 137-139 (2013).</li>
<li>Erkut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trehalose+renders+the+dauer+larva+of+Caenorhabditis+elegans+resistant+to+extreme+desiccation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Trehalose renders the dauer larva of Caenorhabditis elegans resistant to extreme desiccation.</a> Curr Biol. 21 (1), 1331-1336 (2012).</li>
<li>Pan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Third-stage+dispersal+juveniles+of+Bursaphelenchus+xylophilus+can+resist+low-temperature+stress+by+entering+cryptobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biology%22%5BJournal%5D)">Third-stage dispersal juveniles of Bursaphelenchus xylophilus can resist low-temperature stress by entering cryptobiosis.</a> Biology. 10 (8), 785(2021).</li>
<li>Mao, X. F., Li, H. X., Chen, X. Y., Hu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+efficiency+of+soil+nematodes+by+different+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+J+Ecol%22%5BJournal%5D)">Extraction efficiency of soil nematodes by different methods.</a> Chinese J Ecol. 23 (3), 149-151 (2004).</li>
<li>Pan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+pine+wood+nematode+in+Pinus+koraiensis+in+Fengcheng%2C+Liaoning+province%5BTitle%5D)+AND+%22Forest+Pest+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of pine wood nematode in Pinus koraiensis in Fengcheng, Liaoning province.</a> Forest Pest and Disease. 38 (1), 4(2019).</li>
<li>Pan, L., Cui, R., Li, Y., Feng, Y., Zhang, X. Investigation of pinewood nematodes in Pinus tabuliformis Carr. under low-temperature conditions in Fushun, China. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPan%2C+L+%22Forests%22">Forests</a>. 11 (9), 993(2020).</li>
<li>Madin, K. A. C., Crowe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis+in+nematodes%3A+Carbohydrate+and+lipid+metabolism+during+dehydration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis in nematodes: Carbohydrate and lipid metabolism during dehydration.</a> J Exp Zool. 3, 193(2010).</li>
<li>Wharton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%3A+The+model+worm+as+a+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis: The model worm as a model.</a> Curr Biol. 21 (15), 578-579 (2011).</li>
<li>Li, Y., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+risk+of+invasion+and+expansion+of+pine+wood+nematode+in+the+middle+temperate+zone+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22J+Temperate+Res%22%5BJournal%5D)">High risk of invasion and expansion of pine wood nematode in the middle temperate zone of China.</a> J Temperate Res. 1 (1), 4(2018).</li>
</ol>

En este estudio, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> se colectó B. xylophilus de P. massoniana muerta en Ningbo, provincia de Zhejiang. Cabe destacar que <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus fue seleccionado de una población mixta con diferentes estadios. Específicamente, se eligieron troncos redondos con una alta densidad de B. xylophilus, seguidos del tamizaje de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. Durante el invierno, cuando la temperatura mínima diaria en la provincia de Liaoning es de alrededor de -20 °C, se puede obtener una gran cantidad de B. xylophilus de un solo estadio <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> a partir de Pinus tabuliformis muerto, lo que simplificó el proceso de selección en este experimento12.
Durante el proceso criptobiótico, la lenta tasa de deshidratación de los nematodos beneficia su supervivencia y evita el daño estructural a sus proteínas13. El tiempo de deshidratación es crítico para determinar la tasa de supervivencia de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. En este estudio, se utilizó una solución de KCl a una concentración inicial del 8%, y su concentración se incrementó gradualmente con la evaporación natural del agua, lo que permitió que <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus se deshidratara lentamente y entrara en criptobiosis. Si el agua se evapora demasiado rápido o los nematodos se colocan directamente en una solución de KCl de alta concentración, su tasa de supervivencia disminuye significativamente.
El método descrito en este estudio tiene varias ventajas. Los materiales experimentales son fácilmente accesibles, requiriendo solo solución de KCl y agua destilada para regular la deshidratación y rehidratación de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. Los procedimientos son sencillos: la deshidratación se produjo a través de la evaporación natural y la rehidratación se logró mediante la adición de agua destilada. Todo el proceso se puede completar en 2 h. Este método cuenta con altas tasas de éxito y supervivencia, con la mayor parte de B. xylophilus entrando en criptobiosis después de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> la deshidratación y la mayoría reviviendo después de la rehidratación, respectivamente11.
El método propuesto es aplicable para regular el estado criptobiótico tanto de B. xylophilus como <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> de los juveniles de dispersión de cuarta etapa (<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq03.jpg" style="margin: auto;">)14. Sin embargo, puede no ser eficaz para la propagación de B. xylophilus.
En los últimos años, la enfermedad del marchitamiento del pino causada por B. xylophilus se ha expandido desde el sur de China hasta las zonas septentrionales. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, que habita en los pinos de estas regiones más frías del norte, tiende a exhibir una mayor resistencia al frío15. El método propuesto puede inducir criptobiosis en <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, mejorando su resistencia al frío y la sequía. En conjunto, este método puede proporcionar apoyo técnico para estudiar los mecanismos de resistencia al estrés de B. xylophilus y el mecanismo de transmisión de la enfermedad del marchitamiento del pino.

La enfermedad del marchitamiento del pino es una de las enfermedades forestales más graves de China1. El nematodo de la madera de pino Bursaphelenchus xylophilus (B. xylophilus) representa una amenaza significativa para las especies de pino como Pinus massoniana (P. massoniana) al reproducirse dentro del huésped, lo que provoca un rápido marchitamiento y muerte. Bajo condiciones ambientales desfavorables después de la muerte del huésped, los juveniles reproductivos de B. xylophilus pueden entrar en juveniles pre-dauer (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">). Estos juveniles buscan insectos vectores para continuar su transferencia y propagación, causando extensas mortandades de pinares2.
La criptobiosis es un estado en el que los organismos pierden casi toda su agua interna y entran en anhidrobiosis bajo un estrés ambiental extremo. En este proceso, los organismos se deshidratan gradualmente, lo que resulta en un movimiento detenido, un metabolismo reducido yun ciclo de vida suspendido. En condiciones adecuadas, pueden recuperarse tras la rehidratación. La criptobiosis permite a los organismos resistir ambientes extremos, como las bajas temperaturas, y prolongar su vida útil5. Los nematodos que sobrevivieron en criptobiosis durante 30.000 años se encontraron en el permafrost antártico6.
Estudios previos han demostrado que los nematodos pueden adaptarse a varios factores de estrés abiótico, como la baja temperatura, la sequía y la alta presión osmótica, durante la deshidratación ajustando su permeabilidad superficial. Además, los nematodos pueden enroscar sus cuerpos para disminuir el área de superficie y minimizar la tasa de pérdida de agua. Por ejemplo, Caenorhabditis elegans regula el equilibrio osmótico, permitiendo que los iones y las moléculas pequeñas pasen libremente a través de su cutícula, mientras que las moléculas más grandes nopueden. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus también exhibe criptobiosis. Durante las etapas de deshidratación y rehidratación de la criptobiosis, la regulación osmótica es esencial para controlar el intercambio de sustancias a través de la cutícula, por lo que es fundamental para ingresar o recuperarse de la criptobiosis9.
El presente estudio presenta un método para inducir criptobiosis en <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus a través de la regulación osmótica. Este método es simple, eficiente y altamente confiable, y proporciona soporte técnico para investigar los mecanismos de resistencia al estrés de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus.

<table><tbody><tr><td>Portaobjetos de cristal</td><td>Bioland</td><td>GS7101-7525</td><td>75 mm &tiempos; 25 mm &tiempos; 1 milímetro</td></tr><tr><td>Embudo de vidrio de cuello largo</td><td>Tecnología experimental Nanjing Kangluoda</td><td>N/A</td><td>150 milímetros</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Phenix</td><td>XSP-35-1600X</td><td>PH100-2B41L-IPL</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Tecnología experimental Nanjing Kangluoda</td><td>&nbsp; TB-624935792745</td><td>50 mm &tiempos; 50 milímetros</td></tr><tr><td>Pinchcock</td><td>Tecnología experimental Nanjing Kangluoda</td><td>&nbsp; TB-624973311743</td><td>36 mm &tiempos; 11 mm&nbsp; &tiempos; 55 milímetros</td></tr><tr><td>Pipeta</td><td>Eppendorf</td><td>3123000012</td><td>10&ndash; 100 &micro; L</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio (KCL)</td><td>Solarbio Ciencias de la Vida</td><td>P9921</td><td>500 gramos</td></tr><tr><td>Tubo de goma</td><td>Tecnología experimental Nanjing Kangluoda</td><td>TB-624923457094</td><td>7 mm &tiempos; 5 milímetros</td></tr><tr><td>Esterilizador</td><td>BinJiang&nbsp;</td><td>https://detail.1688.com/offer/644766597053.html?_t=1730892390541&spm= a2615.7691456.co_0_0_wangpu _score_0_0_0_0_1_0_0000_0.0</td><td>75L</td></tr><tr><td>Papel tisú&nbsp;</td><td>Huella de corazón a corazón</td><td>M3</td><td>22,5 cm &tiempos; 21,5 cm</td></tr></tbody></table>

inducción de la entrada de juveniles de dispersión de tercera etapa de bursaphelenchus xylophilus en criptobiosis a través de la regulación osmótica

Inducing the Entry of Third Stage Dispersal Juveniles of Bursaphelenchus xylophilus into Cryptobiosis Through Osmotic Regulation

La criptobiosis es un estado en el que los organismos pierden casi toda su agua interna y entran en anhidrobiosis bajo un estrés ambiental extremo. La dispersión de los juveniles de la tercera etapa (juveniles pre-dauer, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">) de Bursaphelenchus xylophilus puede entrar en criptobiosis a través de la deshidratación y revivir tras la rehidratación cuando las condiciones ambientales mejoran. La regulación osmótica es crucial para su supervivencia en este proceso. En este estudio, se recolectaron especímenes de B. xylophilus de Pinus massoniana muerto debido a la enfermedad del marchitamiento del pino en Ningbo, provincia de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> Zhejiang, China. Después de la inmersión en una solución <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> de cloruro de potasio (KCl) al 8%, B. xylophilus entró en un estado criptobiótico después de una deshidratación gradual debido al aumento de la presión osmótica externa por evaporación natural del agua. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus pudo resistir el estrés a baja temperatura a -20 °C. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus pudo revivir después de la rehidratación, con una tasa de supervivencia del 92,1%. Este proceso puede regular la entrada de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus en la criptobiosis, lo que les permite resistir entornos extremos. Este método descrito en nuestro estudio es sencillo y fiable, proporcionando soporte técnico para el estudio de los mecanismos de resistencia al estrés de B. xylophilus.

En la solución de KCl al 8%, a medida que el agua se evaporaba, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus inicialmente exhibió un notable "enroscamiento" mientras permanecía móvil (Figura 1A). Una vez que el agua se evaporó por completo, los nematodos cesaron su movimiento y se enroscaron, con superficies deprimidas y gotas lipídicas acumuladas (Figura 1B), lo que indica su entrada en el estado criptobiótico. Tras la adición de agua destilada a su entorno circundante, los nematodos se rehidrataron y revivieron (Figura 1C). Después de que el agua se evapore, aparecerán cristales de KCL (Figura 1D). La Figura 1E muestra las características morfológicas de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus.
Un experimento de deshidratación demostró que en una solución inicial de KCl al 8%, la evaporación del agua hizo <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> que B. xylophilus perdiera agua. Después de la deshidratación, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus fue sometido a estrés a baja temperatura a -20 °C durante 24 h; la tasa promedio de supervivencia fue de 92,1%11. En comparación con una tasa de supervivencia del 0% en el grupo de control que no había entrado en un estado criptobiótico, los datos anteriores sugirieron que la deshidratación podría mejorar significativamente la tasa de supervivencia de B. xylophilus en condiciones de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> baja temperatura.
Durante la fase de rehidratación posterior a la criptobiosis de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, observamos que el 100% de los nematodos exhibieron "burbujas" in vivo al ser transferidos de una solución de KCl al 40% a agua destilada (Figura 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67350/67350fig01.jpg"> 
Figura 1: Proceso de deshidratación-criptobiosis-rehidratación de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. Esta imagen ilustra el proceso de criptobiosis en <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, incluyendo la (A) etapa de deshidratación, (B) etapa de criptobiosis, (C) etapa de rehidratación, (D) etapa de cristalización de KCL y (E) <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67350/67350fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67350/67350fig02.jpg"> 
Figura 2: Acumulación de gránulos de grasa en B. xylophilus no revivido<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">. Esta imagen muestra el estado de B. xylophilus después de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> la rehidratación, caracterizado por la presencia de gránulos de grasa en forma de burbuja in vivo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67350/67350fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Inducción de la entrada de juveniles de dispersión de tercera etapa de Bursaphelenchus xylophilus en criptobiosis a través de la regulación osmótica

Cryptobiosis is a state where organisms lose nearly all their internal water and enter anhydrobiosis under extreme environmental stress. The dispersal ...

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Investigación

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Biología

Este vídeo explica los mecanismos de resistencia en las plantas a la herbivoría y demuestra una prueba de no-elección que estima la contribución relativa de antibiosis y tolerancia al salivazo de resistencia...

Caracterización de los mecanismos de resistencia Herbívoro: salivazo en Brachiaria Spp. como ejemplo

Vampiric Aislamiento de líquido extracelular de<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

En este video, mostramos un método para producir una población sincronizada con el desarrollo de C. elegans adultos estériles. El protocolo de ejemplo sincroniza gusanos para estudiar las tasas de consumo de oxígeno en animales vivos.

Sincronización de nematodos: un método para obtener poblaciones de gusanos en etapas idénticas de desarrollo

Se presenta un protocolo para investigar el comportamiento de apareamiento del nematodo del pino, Bursaphelenchus xylophilus. Las características de comportamiento de B. xylophilus se describen en el proceso de apareamiento.

La observación y cuantificación de la conducta de apareamiento en el nematodo del pino, Bursaphelenchus xylophilus

Los mosquitos Aedes aegypti infectados con Wolbachia están siendo liberados en las poblaciones naturales para suprimir la transmisión de arbovirus. Se describen métodos para posterior Ae. aegypti con Wolbachia infecciones en el laboratorio para los experimentos y la liberación del campo, tomar precauciones para reducir al mínimo la selección y adaptación de laboratorio.

Mantener los mosquitos Aedes aegypti infectados con Wolbachia

Agudo, exposición a tóxicos ambientales puede afectar desarrollo con efectos a largo plazo. Protocolos detallados se proporcionan para ilustrar una estrategia utilizando un modelo eficaz de laboratorio para estudiar el efecto de la exposición embrionaria temprana a bisfenol A. Ofrecemos Análisis de comportamiento para monitorear la efectividad de nuestros bio-ensayos de exposición de sustancias tóxicas y fecundidad.

Consecuencias conductuales y reproductivas a largo plazo de exposición embrionaria a dosis bajas sustancias tóxicas

Aquí, presentamos un protocolo para investigar la preferencia de pupación de las larvas maduras de Ectropis grisescens en respuesta a factores del suelo (p. ej., contenido de humedad y tipo de sustrato) utilizando bioensayos de elección. También presentamos un protocolo de pruebas biológicas no opción para determinar los factores que afectan los comportamientos de pupación y supervivencia de E. grisescens.

Y pruebas biológicas No opción para estudiar la preferencia de pupación y emergencia éxito de Ectropis grisescens

Aquí, describimos un protocolo detallado para aislar el extracto nuclear activo de la etapa larvaria 4 de C. elegans y visualizar la actividad de transcripción en un sistema in vitro .

Aislamiento del extracto nuclear activo de Caenorhabditis elegans y reconstitución para la transcripción in vitro

Los nematodos entomopatógenos viven en simbiosis con las bacterias y juntos infectan con éxito a los insectos al socavar su sistema inmunológico innato. Para promover la investigación sobre la base genética de la infección por nematodos, se describen métodos para mantener y manipular genéticamente los nematodos entomopatógenos.

Cultivo y manipulación genética de nematodos entomopatógenos

Este artículo describe el mantenimiento en laboratorio (incluyendo el apareamiento y la alimentación) de la mosca díptera inferior Bradysia (Sciara) coprophila.

Mantenimiento de laboratorio de la mosca díptera inferior Bradysia (Sciara) coprophila: un nuevo/viejo organismo modelo emergente

Presentamos dos métodos para que los agricultores propaguen en masa nematodos entomopatógenos como bioinsecticidas. El primer método utiliza gel de poliacrilamida como sustrato de cultivo del nematodo, mientras que el segundo emplea algodón recubierto de polímero como sustrato de cultivo. Ambos métodos dependen de la propagación in vivo de nematodos dentro de cadáveres de insectos.

Propagación in vivo basada en cultivadores de nematodos entomopatógenos

Aprende a inducir la criptobiosis en juveniles de tercera etapa de Bursaphelenchus xylophilus mediante regulación osmótica con cloruro de potasio. Este protocolo permite estudiar mecanismos de resistencia al estrés por bajas temperaturas.

Inducción de la entrada de juveniles de dispersión de tercera etapa de Bursaphelenchus xylophilus en criptobiosis a través de la regulación osmótica (Video) | JoVE Journal

Inducción de la entrada de juveniles de dispersión de tercera etapa de Bursaphelenchus xylophilus en criptobiosis a través de la regulación osmótica

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