Interferencia de ARN larvario en el gusano de seda Bombyx mori a través de la entrega de nanopartículas de quitosano/dsRNA
October 4th, 2024
Aquí se presenta un protocolo para la administración de nanopartículas de quitosano/dsRNA en larvas de gusano de seda Bombyx mori para inducir el silenciamiento génico a través de la ingestión.
El objetivo de esta investigación es desarrollar una metodología para alimentar a las larvas del gusano de seda Bombyx mori con dsRNA, resultando en un efecto de silenciamiento génico. Esto ayudará en los estudios de regulación génica y en el cribado de genes de alto rendimiento. El quitosano es un polímero barato, no tóxico y biodegradable.
Se ha descubierto que las nanopartículas de quitosano/dsRNA son eficaces para causar el efecto ARNi al alimentar a los mosquitos. En el gusano de seda, el ARNi solo se logra mediante la inyección de dsRNA hasta ahora. Sin embargo, se requieren suficientes dispositivos autenticados para la inyección.
Esta técnica también requiere mucho tiempo. La alimentación es un comportamiento natural en los insectos. Todavía no se ha informado de la alimentación de las nanopartículas de quitosano dsRNA al gusano de seda para causar el efecto silenciador.
Además, esta técnica ahorra mano de obra, es rentable y fácil de realizar.
Visión general
Este estudio presenta un nuevo protocolo para la administración de nanopartículas de quitosano/dsRNA a las larvas de gusano de seda (Bombyx mori) mediante alimentación, destinado a inducir el silencimiento génico. La metodología está diseñada para facilitar estudios de regulación génica y cribado genético de alto rendimiento, mostrando efectos significativos de silencimiento en genes objetivo.
Componentes clave del estudio
Área de investigación
- Regulación genética
- Interferencia de ARN (RNAi)
- Sistemas modelo de insectos
Antecedentes
- El quitosano es un polímero biodegradable que tiene potencial en los sistemas de entrega de genes.
- Los métodos tradicionales de RNAi en gusanos de seda requerían inyección, lo cual es intensivo en mano de obra.
- Este enfoque de alimentación presenta una alternativa rentable y fácil.
Métodos utilizados
- Preparación de nanopartículas de quitosano/dsRNA para la administración oral.
- Uso de larvas de gusano de seda (Bombyx mori) como sistema biológico.
- Aplicación de métodos de centrifugación y espectrofotometría para evaluar la concentración de dsRNA.
Resultados principales
- Se logró un silencimiento exitoso de ARN con una reducción del 79% en los transcritos del gen BmToll9-2.
- Las larvas de gusano de seda tratadas con dsRNA eran visiblemente más pequeñas que los grupos de control.
- Los capullos de las larvas tratadas eran significativamente más pequeños, demostrando la efectividad del tratamiento.
Conclusiones
- El estudio demuestra con éxito un nuevo método para el RNAi en larvas de gusano de seda mediante alimentación.
- Este enfoque proporciona una técnica eficiente y que ahorra mano de obra para estudios genéticos en insectos.
