Name: Modelo de curación de heridas por quemaduras similar a un tablero de ajedrez de ratones basado en un dispositivo de calentamiento digital (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: Aprende a crear un modelo de curación de heridas por quemaduras en ratones usando un dispositivo de calentamiento digital. Este protocolo genera quemaduras de espesor completo reproducibles para evaluar tratamientos como el hidrogel TKH.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modelo consistente de lesiones por quemaduras en ratones para la evaluación de apósitos terapéuticos

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Punta de pipeta de 1 ml</td><td>KIRGEN,USA</td><td>KG1333</td><td>Se utiliza para localizar sitios de heridas por quemaduras</td></tr><tr><td>3 M Tegaderm film</td><td>3M,USA</td><td>1624WCN 6 cm x 7 cm</td><td>Para la cubierta de la herida después de la inducción de quemaduras</td></tr><tr><td>4% paraformaldehído (PFA)</td><td>Biosharp,China</td><td>BL539A</td><td>Se utiliza para fijar las muestras de piel</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Sigma-Aldrich,EE. UU</td>. <td>PHR8955-50MG</td><td>Para el manejo del dolor de los ratones</td></tr><tr><td>C57BL/6 ratones</td><td>Chengdu Dashuo empresa de animales experimentales, China</td><td>ninguno</td><td>Para el establecimiento de la</td></tr><tr><td>crema depilatoria</td> modelo de quemaduras <td>Veet, China</td> <td>&mdash;</td><td>Para la depilación del dorso de los ratones</td></tr><tr><td>Dispositivo de calentamiento digital</td><td>Shenzhen Kapper Technology Company, China</td><td>No.936D</td><td>Para la inducción de quemaduras de los ratones</td></tr><tr><td>Afeitadora eléctrica</td><td>AUX, China</td><td>AUX-A5</td><td>Para la depilación del dorso de los ratones</td></tr><tr><td>Papel de filtro</td> <td>y mdash;</td><td>&mdash;</td><td>Se utiliza para desplegar las muestras de piel</td></tr><tr><td>Software GraphPad</td><td>&mdash;</td><td>Prisma GraphPad 9.5.0</td><td>Para el análisis del área de la herida por quemadura</td></tr><tr><td>Guantes resistentes al calor</td><td>&mdash;</td><td>&mdash;</td><td>Se utiliza para sujetar la punta del dispositivo de calefacción digital</td></tr><tr><td>Kit de tinción de hematoxilina y eosina</td><td>Solarbio,China</td><td>G1120</td><td>Para el análisis histológico de los portaobjetos</td></tr><tr><td>ImageJ software</td><td>&mdash;</td><td>ImagenJ 1.54f</td><td>Para el análisis del área de la herida por quemadura</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD, China</td><td>R510-22-10</td><td>Para la anestesia de los ratones</td></tr><tr><td>Kit de tinción tricrómico de Masson</td><td>Solarbio, China</td><td>G1340</td><td>Para el análisis histológico de los portaobjetos</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus, Japón &nbsp;</td><td>VS200 ASW</td><td>Se utiliza para escanear el H& Portaobjetos teñidos E y Masson</td></tr><tr><td>Cassette de tejido</td><td>CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD, China</td><td>31050102W</td><td>Para la deshidratación de tejidos con parafina y la inclusión de parafina</td></tr></tbody></table>

modelo de curación de heridas por quemaduras similar a un tablero de ajedrez de ratones basado en un dispositivo de calentamiento digital

Chessboard-like Burn Wound Healing Model of Mice Based on Digital Heating Device

En este protocolo, se crearon heridas por quemaduras similares a un tablero de ajedrez con una duración de quemadura de 10 s a 97 °C mediante el dispositivo de calentamiento digital (Figura 1). La punta del dispositivo está hecha de cobre puro, que es conocido por su excelente conducción de calor y sus capacidades de calentamiento rápido. La empuñadura sostenida por el experimentador está hecha de material de policarbonato, que proporciona resistencia al calor y no inflamabilidad. En comparación con los métodos de placa/barra de metal precalentado o de agua hirviendo o caliente, este dispositivo demuestra un rendimiento de seguridad superior y reduce el tiempo de anestesia en ratones, acortando en consecuencia la duración total del experimento.
El proceso general de inducción y análisis de quemaduras se muestra en la Figura 2. Cada animal tenía seis heridas por quemaduras en el dorso, dispuestas como se muestra en la Figura 2E. Se evaluó el tamaño de la herida en estos animales y se recolectaron muestras de piel para su análisis histológico, incluida la tinción con tricrómico H&amp;E y Masson en los días 1, 3, 7, 10 y 14 posteriores a la quemadura, respectivamente.
Cada herida por quemadura tenía forma circular con un área igual, así como una profundidad uniforme después de la inducción de la quemadura. El color del borde de la lesión por quemadura cambió de blanco ceroso a rojo, acompañado de una zona hiperémica debido a la respuesta inflamatoria inmediata a la lesión. Además, el tamaño de la herida por quemadura aumentó ligeramente durante las 72 horas posteriores a la quemadura (Figura 4A).
El análisis microscópico de las secciones de las heridas teñidas con tricrómico H&amp;E y Masson (Figura 4B) reveló la destrucción completa de la capa epidérmica y daños en todo el espesor de la dermis, afectando tanto a la grasa subcutánea como al músculo. El examen histológico indicó que el proceso de cicatrización de la herida se encontraba en la etapa inflamatoria en el día 3, caracterizado por vasodilatación y una infiltración sustancial de células inflamatorias. Se observó una reducción notable en el área de la herida el día 7 posterior a la quemadura en comparación con el día 3, como se observa en las imágenes microscópicas de las muestras. El tejido de granulación y cardiovascular se forma, y las fibras de colágeno se depositan densamente el día 14, lo que significa que la cicatrización de heridas entra en la etapa de remodelación. Las heridas se recuperaron sin infección evidente durante todo el proceso de curación.
Además, se evaluaron las capacidades de cicatrización de heridas mediante la cuantificación de los datos de cicatrización de heridas y el análisis de los trazados de heridas (Figura 5). Se observó que la recuperación de la herida mejoró en las heridas tratadas con hidrogel de péptido TKH12,14, lo que se evidenció en áreas de la herida significativamente más pequeñas en los días 7, 10 y 14.
El intervalo entre heridas adyacentes (Figura 6), ya sea transversal o longitudinal, no confirmó diferencias en comparación con la piel no quemada. La epidermis, la dermis y los tejidos subcutáneos estaban intactos, y no había infiltración linfocitaria ni vasodilatación. El proceso de cicatrización de las dos heridas no interfiere entre sí. Por lo tanto, se pueden aplicar diferentes fármacos o apósitos al tratamiento de heridas en base al modelo para evaluar el efecto in vivo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig01.jpg"> 
Figura 1: Dispositivo de calentamiento digital para la inducción de quemaduras. El dispositivo de calentamiento digital utilizado para inducir lesiones por quemaduras. (a) El controlador de temperatura permite ajustes de temperatura que oscilan entre 50 y 450 °C. (b) La base del soporte se utiliza para sujetar la punta de combustión. (c) La punta del dispositivo se puede cambiar a diferentes tamaños. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig02.jpg"> 
Figura 2: Esquema del modelo de herida en forma de tablero de ajedrez. Un esquema paso a paso para reproducir el modelo de herida en forma de tablero de ajedrez descrito en el artículo. (A) Un ratón de 8 semanas de edad se utiliza como modelo para experimentos de curación de heridas. (B) El cabello se retira del área designada para herir. (C) Los seis puntos de herida se marcan con una punta de pipeta de 1 mL. (D) Se utiliza un dispositivo de calentamiento digital para crear seis heridas por quemaduras en el centro de cada sitio marcado (E). (F) Una imagen en primer plano del dorso después de la inducción de la quemadura. (G) Las muestras de piel (aproximadamente 1 cm × 1 cm) se recolectan los días 3, 7, 10 y 14. (H) Las muestras de piel se aplanan con papel filoso y se transfieren a casetes de inclusión. (I) se realiza la deshidratación de la parafina, y (J) las muestras se seccionan a 5 μm de espesor. (K) Las secciones se tiñen con hematoxilina y eosina (H&amp;E), y tricrómico de Masson. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig03.jpg"> 
Figura 3: Proceso de inducción de lesiones por quemaduras de espesor completo. (A) El diámetro de una punta de pipeta de 1 mL y (B) la punta del dispositivo de calentamiento digital son de 9 mm y 4 mm, respectivamente. (C) El área dorsal del ratón se afeita con una afeitadora eléctrica. (D) Se aplica crema depilatoria durante 3 min. (E) Se limpia y seca la zona afeitada, y se marcan los puntos de herida con una punta de pipeta esterilizada de 1 ml. (F) El dispositivo de calentamiento digital se aplica a 97 °C durante 10 s para crear seis quemaduras. (G) Se aplica hielo a las heridas de las quemaduras para controlar el dolor. (H) Toda la parte posterior del ratón muestra las seis heridas por quemaduras de espesor completo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig04.jpg"> 
Figura 4: Imágenes representativas de las heridas por quemaduras y análisis histológico. (A) Imágenes de las heridas por quemaduras en los días 3, 7, 10 y 14, que muestran la progresión de la cicatrización. (B) Las imágenes histológicas teñidas con H&amp;E y tricrómico de Masson demuestran cicatrización de heridas y regeneración de la piel. Barras de escala = 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig05.jpg"> 
Figura 5: Variación del tamaño de la herida a lo largo del tiempo. (A) La variación en el tamaño de la herida en animales control y tratados con hidrogel TKH a lo largo del tiempo, analizada con el software ImageJ. (B) Se presentan los datos correspondientes de rastreo de heridas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig06.jpg"> 
Figura 6: Heridas por quemaduras adyacentes y análisis histológico. (A) Imágenes representativas de las heridas por quemaduras adyacentes el día 1. (B) Muestras de heridas adyacentes recolectadas para análisis histológico el día 3 (encerradas en un círculo rojo). (C) El papel de filtro se utiliza para aplanar las muestras de tejido antes de la deshidratación de la parafina. (D) H&amp;E y análisis tricrómico de Masson de heridas adyacentes. Barras de escala: 1 mm y 200 μm (ampliadas). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig06large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Modelo de curación de heridas por quemaduras similar a un tablero de ajedrez de ratones basado en un dispositivo de calentamiento digital

Severe burn injuries are among the most traumatic and physically debilitating conditions, impacting nearly every organ system and resulting in ...

chessboard-like-burn-wound-healing-model-mice-based-on-digital

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Fuente: Wang, Y., et al. In Vivo Investigación de la terapia antimicrobiana de luz azul para infecciones por quemaduras multirresistentes a Acinetobacter baumannii mediante imágenes de bioluminiscencia. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra cómo establecer una infección por quemaduras en un modelo murino aplicando un bloque de latón calentado seguido de un inoculo bacteriano patógeno. Las bacterias colonizan la matriz extracelular expuesta y forman un biofilm, lo que permite estudios in vivo...

Establecimiento de un modelo murino de infecciones por quemaduras con bacterias patógenas

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Un modelo que imite el escenario clínico de lesiones por quemaduras e infecciones es necesario para avanzar en la investigación de quemaduras. El presente protocolo demuestra un modelo simple y reproducible de infección por quemaduras de rata comparable al de los seres humanos. Esto facilita el estudio de quemaduras e infecciones después de quemaduras para desarrollar nuevos tratamientos antibióticos tópicos.

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Este protocolo describe un modelo reproducible de heridas por quemaduras de múltiples profundidades en un minicerdo de Yucatán.

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Planimetría digital para evaluar la cinética de cierre de heridas en un modelo de ratón

Aprende a crear un modelo de curación de heridas por quemaduras en ratones usando un dispositivo de calentamiento digital. Este protocolo genera quemaduras de espesor completo reproducibles para evaluar tratamientos como el hidrogel TKH.

Modelo de curación de heridas por quemaduras similar a un tablero de ajedrez de ratones basado en un dispositivo de calentamiento digital (Video) | JoVE Journal

Modelo de curación de heridas por quemaduras similar a un tablero de ajedrez de ratones basado en un dispositivo de calentamiento digital

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