Establecimiento de modelos de ratas que imitan las terapias hormonales de afirmación de género

Nuestra investigación desarrolló modelos animales para replicar terapias hormonales de afirmación de género para personas transgénero que usan testosterona para hombres transgénero y estrógeno con antiandrógenos para mujeres transgénero. Estamos examinando si las personas que se someten a estas terapias son tan vulnerables a los productos químicos ambientales como la población general y si hay algún efecto secundario prolongado del tratamiento hormonal. Este modelo es único en su campo, ya que actualmente se dispone de datos y herramientas para evaluar la susceptibilidad potencialmente diferente a los productos químicos de las personas transgénero que se someten a terapia hormonal y sus efectos secundarios.

Un hallazgo significativo de nuestro trabajo es el uso de CPS hepático específico del sexo como marcador para evaluar el éxito de las terapias hormonales. Este enfoque, desarrollado por primera vez en nuestro estudio, proporciona una herramienta valiosa para confirmar la precisión y efectividad del modelo.

Nuestro protocolo aborda la brecha en la comprensión de los efectos a largo plazo de las terapias hormonales. También investiga si la exposición diaria a los alimentos y a las sustancias químicas ambientales puede interactuar o alterar los efectos de los tratamientos hormonales con el tiempo.

En el futuro, exploraremos si el modelo es adecuado para pruebas a largo plazo e investigaremos biomarcadores adicionales, como pruebas de comportamiento estrechas, para evaluar mejor los efectos de la terapia.

[Instructor] Comience pellizcando y levantando la piel en el lugar de la inyección para administrar testosterona y estradiol más acetato de ciproterona disuelto en aceite de sésamo. Inserte la aguja de una jeringa de un mililitro paralela a la espalda del animal. Una vez que la aguja esté dentro, inyecte lentamente 100 microlitros de testosterona o 200 microlitros de estradiol más acetato de ciproterona, según el modelo. Después de dos semanas de tratamiento, coloque cada rata anestesiada en posición supina sobre una almohadilla térmica. A continuación, prepare una jeringa de cinco mililitros con una aguja de calibre 21, asegurándose de eliminar el vacío. Use los dedos para localizar el corazón. Limpie suavemente la pared torácica e inserte la aguja con cuidado en la pared torácica lateral, perpendicular al cuerpo, en el punto alineado con los codos flexionados, entre las costillas cinco y seis. Una vez que la aguja llega al ventrículo cardíaco, la sangre ingresará a la jeringa por capilaridad. Retraiga el pistón de la jeringa lenta y continuamente hasta que se extraiga la sangre. Después del sacrificio, coloque a cada animal en la mesa de disección en decúbito supino, con las patas delanteras hacia arriba y las traseras hacia abajo. Fije las extremidades con alfileres, luego rocíe la superficie ventral del animal con una solución desinfectante para prepararse para la disección. Con unas tijeras, corte a lo largo de la línea media desde el pubis hasta la parte superior del abdomen. Haga dos cortes laterales a lo largo de las superficies mediales de cada extremidad posterior desde la incisión abdominal ventral de la línea media y exponga las vísceras abdominales. En ratas macho, extirpar los testículos ubicados en el saco escrotal intraabdominal. Presione el saco escrotal para asegurarse de que los testículos sobresalgan y agárrelos suavemente. Use alicates para sujetar la grasa visceral, luego corte con cuidado los testículos de las vísceras. Pese los testículos antes de guardarlos en una solución Bois para su análisis histopatológico. En ratas hembras, agarre el útero con delicadeza. Identifique los ovarios en los extremos de ambos cuernos uterinos y córtelos del tejido adiposo visceral circundante. Pesar los ovarios después de la escisión. A continuación, agarre el hígado con fórceps, asegurándose de que no se rompa. Use alicates para agarrar el proceso xifoides y corte el diafragma completamente con unas tijeras. Use tijeras para separar el hígado del diafragma. Levante el proceso xifoides con fórceps y extraiga el hígado de la cavidad abdominal. Después de la escisión, pese el hígado y guárdelo adecuadamente. Con unas tijeras, corte perpendicularmente a lo largo del cuello del animal. Retire la piel y la musculatura para exponer la tráquea, donde se encuentra la glándula tiroides. Recorte suavemente los extremos de la tráquea para extirpar la glándula tiroides. Después de extirpar el testículo, agarre el epidídimo, que está unido al margen posterior del testículo y está contenido dentro del escroto. Para recolectar semen, limpie la cola del epidídimo derecho eliminando la grasa y el tejido conectivo con unas tijeras. Separe la cola de la parte restante y colóquela en una placa de Petri que contenga un mililitro de DMEM. Corta la cola con unas tijeras y usa una pipeta pasada para hacer fluir suavemente el contenido y facilitar la liberación. Ahora, transfiera el líquido recolectado a un tubo de 15 mililitros y ajuste el volumen a 10 mililitros con DMEM para lograr un factor de dilución de uno a 10. Pipetear el contenido para homogeneizar y crear una suspensión. Después de agitar suavemente, tome 10 microlitros de la suspensión para cargar la cámara de Neubauer.