Planimetría digital para evaluar la cinética de cierre de heridas en un modelo de ratón

Nuestra investigación se centra en la estandarización de la medición macroscópica de heridas mediante una configuración de imagen controlada que garantiza la consistencia y la posición y distancia de la luz, con el objetivo de minimizar la variabilidad y mejorar la actualidad de la medición del cierre de heridas en modelos preclínicos. Abordamos la falta de estandarización en las mediciones microscópicas de heridas. Las metodologías actuales a menudo carecen de condiciones de control, lo que conduce a datos inconsistentes.

Nuestro protocolo ofrece nuestra configuración aplicable que garantiza una iluminación, posicionamiento y distancia uniformes, lo que reduce la probabilidad y mejora la reproducibilidad. Nuestro protocolo elimina las fuentes comunes de sesgo de medición al estandarizar las condiciones de imagen. A diferencia de los métodos manuales, garantiza la coherencia entre los experimentos, lo que permite comparaciones precisas y reduce la variabilidad en las mediciones de área y perímetro de las heridas.

Nuestro resultado permite obtener datos de medición de heridas más precisos y reproducibles al proporcionar una metodología estandarizada. Esta es la base para evaluar las intervenciones terapéuticas y la investigación preclínica de heridas. Para comenzar, fije un perfil de aluminio ranurado en el área interior del borde lateral del techo.

Coloque dos placas rectangulares de aluminio con centros de polietileno en las ranuras de los perfiles del techo para permitir el deslizamiento a través de ambos perfiles. Monta un tubo de luz LED RGB de 20 centímetros en un ángulo de 45 grados en el borde inferior del primer panel con cinta adhesiva de doble cara. A continuación, monta un panel rectangular de cartón pluma con un recorte circular central de 7,82 centímetros en cada panel del techo para permitir la instalación de la lente de la cámara.

Para la construcción del piso, primero corte cuadrados con longitudes laterales de 2,54 centímetros de cada esquina del tablero de espuma blanca de 40 por 40 centímetros. Este paso garantiza que el tablero de espuma encaje correctamente dentro de los perfiles de la superficie del suelo. Después de recortar las esquinas, coloque el tablero de espuma encima de los perfiles del área del piso.

Fije las tiras de cierre de gancho y bucle a los perfiles de aluminio A y B para manipular fácilmente los elementos internos del fotomatón. Un adhesivo fijo se fija a un centímetro del borde de dos cuadrados de cartón espuma en un lado y los coloca en las paredes delantera y trasera. Con silicona, pegue dos paneles a los lados C y D para formar las paredes laterales izquierda y derecha.

Coloque una mascarilla impresa en 3D a 11,5 centímetros del borde de un rectángulo de cartón pluma blanco precortado de 40 por 28 centímetros para mantener a los ratones bajo anestesia inhalatoria. Luego, pégalo al centro de la base de referencia. Fije el bloque de regla impreso en 3D a un centímetro del lado izquierdo de la base del mouse para acomodar el elemento de referencia de medición para el procesamiento digital de imágenes.

A continuación, fije una regla graduada de acero inoxidable de 15 centímetros al bloque de la regla e instale la base de referencia completa dentro de la cabina para el escalado de la imagen. Después de anestesiar al ratón, use un punzón de biopsia estéril de cinco milímetros para aplicar presión con movimientos circulares para crear una incisión dermoepidérmica a nivel del omóplato. Retire la solapa con pinzas dentadas y corte con unas tijeras con punta de iris.

Con unas pinzas de joyero, coloque una película dérmica circular de un centímetro de diámetro sobre la herida para evitar la contaminación y la contracción. Para capturar imágenes de las heridas, coloque la base de referencia en el centro del piso del fotomatón. A continuación, coloque el ratón anestesiado en posición prona sobre la plataforma del ratón.

Instala la pared frontal del fotomatón y captura imágenes macroscópicas. Para abrir la imagen de copia de seguridad creada en imagej, vaya a Archivo, Abrir y Buscar. A continuación, haga clic en Abrir.

Ahora maximice la imagen, seleccione la herramienta de línea recta, luego, usando la tecla más, acerque la regla junto al mouse. Dibuja una línea recta de 10 milímetros en la imagen de la regla. Vaya a analizar y establecer la escala.

Introduzca 10 como la distancia conocida. Establezca la unidad de longitud en milímetros y haga clic en Aceptar. A continuación, use la herramienta de rectángulo para seleccionar el área alrededor de la herida con un ancho y un alto de 150 y registre los valores X e Y.

A continuación, haz clic con el botón derecho del ratón en el rectángulo y selecciona duplicar. Asigne un nombre a la imagen duplicada y pulse Intro. En la nueva imagen, presione más dos veces para acercar.

Para separar la imagen en canales de color, vaya a Imagen, Tipo y Pila RGB. En la imagen del canal rojo, haga clic con el botón derecho en la imagen, seleccione duplicar y presione Aceptar en la ventana de duplicación. A continuación, haz clic en la imagen del canal rojo, selecciona la imagen, ajusta y el umbral para segmentarla.

Elija Default (Predeterminado) y haga clic en Apply (Aplicar) para aplicar el umbral. Rectifique la región de interés o el retorno de la inversión para garantizar una cobertura completa de la herida y evitar distorsiones en la segmentación. Para definir el perímetro del área de interés, seleccione Editar y, a continuación, vaya a la selección y elija Crear selección.

Después de eso, seleccione Editar, luego Selección y haga clic en Agregar al administrador para agregarlo al administrador de ROI. Para validar la segmentación, abra la ventana del administrador de ROI y seleccione el ROI que desea revisar. Haga clic en Más, Traducir, introduzca los valores X e Y registrados y pulse Aceptar.

Maximice la imagen original y, a continuación, seleccione el ROI en el administrador de ROI. Use las teclas de flecha para ajustar el ROI hasta que se alinee con la herida. Una vez confirmada la segmentación, obtenga las medidas de la herida seleccionando Analizar y medir.

El porcentaje de cierre de la herida aumentó inicialmente al 138,04% en el segundo día debido a procesos inflamatorios antes de disminuir y progresar hacia las fases de reparación y consolidación, con un cierre consistente observado después del séptimo día. La distancia de retracción del borde de la herida aumentó inicialmente durante la fase inflamatoria, pero comenzó a disminuir después del tercer día, como lo muestra la ecuación de Gilman, que indica una contracción gradual de la herida.