Name: Un enfoque no viral para generar células T receptoras de antígenos quiméricos transitorios mediante ARNm para la inmunoterapia contra el cáncer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Aprende a generar células T CAR transitorias mediante ARNm no integrante para inmunoterapia contra el cáncer. Este método no viral evita la integración genómica permanente y reduce costos de producción.

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<table><tbody><tr><td>Tinte de viabilidad 7-AAD &nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>420404</td><td></td></tr><tr><td>ACEA Citómetro de flujo Novocyte</td><td>Agilent</td><td>NovoCyte 3000</td><td></td></tr><tr><td>AIM-V medio</td><td>Gibco</td><td>12055083</td><td></td></tr><tr><td>APC anticuerpo IgG F(ab')2 antihumano de cabra</td> Jackson <td>ImmunoResearch Laboratories</td><td>109-136-097</td><td></td></tr><tr><td>Enzima de restricción BglII</td><td>Nueva Inglaterra BioLabs (NEB)</td><td>R0144L</td><td></td></tr><tr><td>3&agudo;-O-Me-m7G(5')ppp(5')G Estructura de la tapa de ARN analógica</td><td>NEB</td><td>S1411S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, alta glucosa</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads Activador T humano CD3/CD28 perlas</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate 96</td><td>Agilent</td><td>5232376001</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>459844-4L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza.com</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe SP6 Kit de síntesis de ARN</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>E2070S</td><td></td></tr><tr><td>Proteína recombinante IL-2 humana</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Marcadores de ARN del milenio</td><td>Invitrogen</td><td>AM7150</td><td></td></tr><tr><td>Kit de limpieza de ARN monarca (500 &mu; g)</td> <td>NEB</td><td>T2050L</td><td></td></tr><tr><td>N1-Metilpseudo-UTP</td><td>Trilink</td><td>N-1081-10</td><td></td></tr><tr><td>Instrumento de transfección de neón</td><td>Invitrogen</td><td>MPK5000</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de transfección de neón 100-&mu; L Kit</td><td>Invitrogen</td><td>MPK10096</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (10000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medio</td><td>Gibco</td><td>11875135</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0.05%), rojo fenol</td><td>Gibco</td><td>25300120</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Phenol:Cloroformo:Alcohol isoamílico (25:24:1, v/v)</td><td>Invitrogen</td><td>15593049</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence Instrumento de análisis celular en tiempo real (RTCA)</td><td>Agilent</td><td>RTCA MP</td><td></td></tr><tr><td>ZymoPURE II Plásmido Midiprep Kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4201</td><td></td></tr></tbody></table>

un enfoque no viral para generar células t receptoras de antígenos quiméricos transitorios mediante arnm para la inmunoterapia contra el cáncer

A Nonviral Approach to Generate Transient Chimeric Antigen Receptor T Cells Using mRNA for Cancer Immunotherapy

Construimos un CAR dirigido a HER2 de segunda generación que contiene un scFv derivado del anticuerpo monoclonal (mAb) de ratón (mAb) humanizado anti-HER24D5 47, una región transmembrana y un dominio coestimulador intracelular 4-1BB seguido del dominio de activación CD3ζ (Figura 1A). La secuencia de ADN que codifica el CAR contenía un promotor 5' SP6 para impulsar la transcripción del ARNm del CAR in vitro (Figura 1B). El ARNm de...

Un enfoque no viral para generar células T receptoras de antígenos quiméricos transitorios mediante ARNm para la inmunoterapia contra el cáncer

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has emerged as a pioneering cancer treatment, achieving unprecedented success in treating certain ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Este video muestra una técnica para fabricar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) ex vivo. Las células T humanas se incuban con perlas magnéticas recubiertas con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28, junto con un medio suplementado con interleucina-2 (IL-2), lo que conduce a la activación y proliferación de las células T. Se introducen vectores lentivirales transgénicos, lo que permite que el ARN transgénico se integre en el genoma del huésped y exprese el transgén. Esto da como...

Una técnica ex vivo para fabricar linfocitos T receptores de antígenos quiméricos

Este video muestra una técnica para la generación ex vivo de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específico de antígeno tumoral. Los vectores retrovirales portadores de ARN transgénico se mezclan con células de bazo en un medio suplementado con interleucina-2 para promover la supervivencia y proliferación de las células T. A continuación, la mezcla se transfiere a una placa recubierta con fragmentos de fibronectina humana recombinante y se centrifuga para facilitar la fusión del...

Una técnica ex vivo para generar células T receptoras de antígenos quiméricos específicos de tumores

Este video muestra una técnica para generar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específico de antígeno a través de la transducción retroviral. Los linfocitos T CD8+ murinos activados se añaden a una placa de micropocillos recubierta con fragmentos de fibronectina recombinante. A continuación, se introducen vectores retrovirales que contienen ARN transgénico que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR) específico del antígeno, y se centrifuga la placa para facilitar la...

Una técnica para la generación de células CAR-T específicas de antígenos

El actual combina protocolo célula emparejados humano TCR alfa y beta cadena secuenciación con optimiza generación de vectores retrovirales compatibles con expresión de TCR in vitro e in vivo .

Aerodinámico unicelular TCR aislamiento y generación de vectores retrovirales para In Vitro y In Vivo expresión de TCR humana

Describimos un enfoque para generar de forma fiable células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) y probar su diferenciación y función in vitro e in vivo.

Fabricación de células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) para inmunoterapia adoptiva

Este protocolo describe la metodología para el seguimiento no invasivo de células T genéticamente modificadas para expresar receptores de antígenos quiméricos in vivo con una plataforma clínicamente disponible.

Imágenes dinámicas de células T receptoras de antígeno quimérico con [18F]Tomografía por emisión de positrones tetrafluoroborato/Tomografía computarizada

En este artículo se detalla el proceso de fabricación de linfocitos T receptores de antígenos quiméricos para uso clínico, concretamente utilizando un procesador celular automatizado capaz de realizar la transducción viral y el cultivo de linfocitos T. Proporcionamos recomendaciones y describimos los escollos que deben tenerse en cuenta durante el desarrollo del proceso y la implementación de un ensayo clínico de fase inicial.

Fabricación de células T con receptor de antígeno quimérico en un procesador celular automatizado

Este protocolo agiliza la producción de vectores retrovirales y la transducción de células T murinas, lo que facilita la generación eficiente de células CAR-T de ratón.

Generación eficiente de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) murino

Este protocolo proporciona un flujo de trabajo optimizado para generar y probar células T reguladoras del receptor de antígeno quimérico humano (CAR Tregs).

Generación de linfocitos T reguladores del receptor de antígeno quimérico humano

Se proporciona un protocolo detallado para el uso de la tecnología CRISPR/Cas9 para lograr un knock-in dirigido altamente eficiente de grandes construcciones multicistrónicas en células T humanas primarias a través de la vía de reparación del ADN de unión de extremos mediada por homología (HMEJ). Las células T diseñadas con este protocolo adaptable a las buenas prácticas de fabricación actuales mantienen una excelente expansión celular, citotoxicidad y producción de citocinas.

Ingeniería no viral de células T humanas primarias mediante la integración dirigida de grandes plantillas de ADN mediada por homología

Este protocolo describe los pasos esenciales para el cultivo de células T primarias, incluyendo su aislamiento, activación, expansión y transfección transitoria mediante electroporación de ARNm. Además, se propone un flujo de trabajo y un panel de anticuerpos para el análisis citométrico de flujo del fenotipo, marcadores de activación, viabilidad y expresión del receptor quimérico de antígenos (CAR).

Aislamiento, cultivo y transfección transitoria de células T humanas primarias para generar células T del Receptor de Antígenos Quiméricos (CAR)

Aprende a generar células T CAR transitorias mediante ARNm no integrante para inmunoterapia contra el cáncer. Este método no viral evita la integración genómica permanente y reduce costos de producción.

Un enfoque no viral para generar células T receptoras de antígenos quiméricos transitorios mediante ARNm para la inmunoterapia contra el cáncer (Video) | JoVE Journal

Un enfoque no viral para generar células T receptoras de antígenos quiméricos transitorios mediante ARNm para la inmunoterapia contra el cáncer

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