Name: Aislamiento y absorción de células dendríticas de pequeñas vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Aprende a aislar vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus y estudiar su absorción por células dendríticas derivadas de médula ósea. Este método revela mecanismos de inmunomodulación parasitaria.

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<table><tbody><tr><td>Tubos de 1,5 ml</td><td>Henso</td><td>N14059</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 24 pocillos</td><td>JetBiofil</td><td>CAP011024</td><td>Poliestireno, fondo plano, placa estéril</td></tr><tr><td>de 6 pocillos &nbsp;</td><td>Henso Medical Co. Ltd.</td><td>N14221</td><td>Fondo plano, material PS,</td></tr><tr><td>Colador estéril de células de polipropileno de 70 mm</td><td>Biologix Group Limited</td><td>15-1070</td><td>Tinte estéril</td></tr><tr><td>azul alcián 8 GX</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-214517B</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora automática de CO2</td><td>Nuarire</td><td>UN-5100E/g</td><td></td>Laboratorio de</tr><tr><td>albúmina de suero bovino</td><td>DH 1443151</td><td></td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo monoclonal CD11c-PECy5&nbsp; &nbsp; 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>15-0114-82</td><td>clon (N418)</td></tr><tr><td>CD40 Anticuerpo monoclonal-FITC 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0402-82</td><td>clon (HM40-3)</td></tr><tr><td>CD80 Anticuerpo monoclonal-APC 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>17-0801-82</td><td>clon (16-10A-1)</td></tr><tr><td>CD86 Anticuerpo monoclonal-FITC&nbsp; 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0862-82</td><td>clon (GL-1)</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>IEC CL31R</td> Microscopio confocal multivelocidad <td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td>Nikon Microscopio confocal C1</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos 15 ml de diámetro 17 x 120 mm</td><td>Citotest</td><td>4610-1865</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>107K4034</td><td></td></tr><tr><td>D-glucosa</td><td>Merk</td><td>1.78343</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Anedra</td><td>6646</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino 500 mL</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>12352207 Sistema de citometría de flujo</td><td>BD Biosciences</td><td>BD FACSCanto&trade; II</td><td></td></tr><tr><td>Célula Zeta Capilar Plegada&nbsp;</td><td>Malvern Panalytical</td><td>DTS1070</td><td></td></tr><tr><td>Sal de sulfato de gentamicina</td><td>Sigma</td><td>G1264</td><td></td></tr><tr><td>Solución de glutaraldehído</td><td>Fluka</td><td>49630</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Gibco</td><td>11344041</td><td></td></tr><tr><td>Aguja hipoderémica 21 G x 1"25/8</td><td>Weigao</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aguja hipoderémica estéril 25 G x 5/8"</td> <td>Weigao</td><td></td><td>estéril</td></tr><tr><td>Microscopio invertido</td><td>Leica</td><td>DMIL LED Fluo</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Holliday</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipopolisacárido&nbsp; 5 mg</td><td>Invitrogen</td><td>tlrl-rslps</td><td>LPS de la bacteria Gram-negativa E. coli K12. Agonistas TLR2/4</td></tr><tr><td>Clorhidrato de loperamida</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.08162</td><td></td></tr><tr><td>Medio 199&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11150059</td><td></td></tr><tr><td>Azul de metileno</td><td>Anedra</td><td>6337</td><td></td></tr><tr><td>MHC clase I (H2kb) Anticuerpo monoclonal-PE 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>12-5958-82</td><td>clon (AF6-88.5.5.3)</td></tr><tr><td>MHC clase II (IA/IE) Anticuerpo monoclonal-FITC&nbsp; 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-5321-82</td><td>clon (M5/114.15.2)</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus</td><td>CX31</td><td></td></tr><tr><td>Ratón murino recombinante Flt3L.</td><td>PrepoTech</td><td>250-31L-10UG</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-One</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Agar Scientific</td><td>R1018</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina G sal de sodio</td><td>Sigma</td><td>P3032-10MU</td><td></td></tr><tr><td>PKH26</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>Timper</td><td></td><td>monobásico de fosfato de potasio</td><td>para fosfato tamponado Solución salina (PBS)</td></tr><tr><td>Tampón de lisis de glóbulos rojos 100 ml</td><td>Roche</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>RPMI medio&nbsp; 1640 1x 500 mL</td><td>Sigma-Aldrich (Gibco)</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Cacodilato de sodio&nbsp; &nbsp;</td><td>Cloruro de sodio Sigma-Aldrich</td><td>C0250</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Anedra</td><td>7647-14-5</td><td>para solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td></tr> <tr><td>Fosfato de sodio dibásico (anhidro) p. a.</td><td>Biopack</td><td>1639.07</td><td>Para solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td></tr> <tr><td>Sal de sulfato de estreptomicina Jeringa</td><td>Sigma</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>10 ml</td> de tubos de policarbonato <td>estériles</td><td>de pared gruesa Bremen</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>13 x 55 mm, capacidad nominal 4 ml</td></tr><tr><td>Microscopio electrónico de transmisión</td><td>Jeol</td><td>JEOL JSM 100CX II</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga</td><td>Beckman</td><td>Optima LE-80k&nbsp;</td><td>Rotor de 90 Ti</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Richmond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano&nbsp;</td><td>Malvern&nbsp;</td><td>Nano ZSizer-ZEN3600</td><td>Para realizar mediciones de dispersión de luz dinámica y potencial zeta</td></tr></tbody></table>

aislamiento y absorción de células dendríticas de pequeñas vesículas extracelulares de echinococcus granulosus

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus

En la Figura 1 se muestra un diagrama de flujo que resume los principales pasos para mantener cultivos puros de la etapa larvaria de E. granulosus, el aislamiento y la caracterización de las sEV y su absorción por las células dendríticas murinas. Para lograr una alta producción de sEV a partir de protoscoleces y metacestodos de E. granulosus, se empleó un método de cultivo in vitro previamente desarrollado en el laboratorio para maximizar la supervivencia y la home...

Aislamiento y absorción de células dendríticas de pequeñas vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus

The secretion of extracellular vesicles by cestodes is crucial for enabling cellular communication not only among parasites but also with host tissues. In ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Fuente: Watson, D. C., et.al. Aislamiento y purificación escalables de vesículas extracelulares de Escherichia coli y otras bacterias. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el aislamiento y la concentración de vesículas extracelulares (EV) derivadas de la membrana externa de bacterias modificadas genéticamente. El proceso consiste en cultivar las bacterias para liberar vehículos eléctricos, seguido de pasos secuenciales de centrifugación y filtración para eliminar células y desechos.

Aislamiento y enriquecimiento de vesículas extracelulares derivadas de la membrana externa de bacterias

Este video describe un método basado en cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) para aislar vesículas extracelulares o EV derivadas de las células inmunitarias del cerebro: la microglía. Los VE actúan como carga molecular para administrar mediadores, que regulan una respuesta inmunitaria. Por lo tanto, los EV aislados se pueden utilizar como modelo in vitro para estudiar la diafonía entre la microglía y las neuronas durante una respuesta inmunitaria neuronal.

Aislamiento basado en SEC de vesículas extracelulares derivadas de la microglía: una técnica para aislar vesículas extracelulares de medios de cultivo condicionados por la microglía

Existe un creciente interés en la comprensión de las funciones inmunológicas de subpoblaciones específicas de células en las placas de Peyer (PP), los sitios primarios de inducción de los tejidos linfoides asociados al intestino. Aquí resumimos los protocolos paralelos para preparar PP preparativos de célula única para el análisis de citometría de flujo y cryosections PP para inmunoticción.

Aislar y inmunoticción Los linfocitos y las células dendríticas de las placas de Peyer murinas de

Este protocolo detalla un método para aislar células presentadoras de antígeno de timo humano a través de diferentes etapas de la digestión enzimática del tejido seguido por centrifugación de densidad de la suspensión de células individuales y la clasificación finalmente magnético y / o FACS de las poblaciones de células de interés.

Aislamiento de células dendríticas mieloides y células epiteliales de timo humano

Aquí describimos un método para aislar y purificar las células dendríticas de diferentes compartimentos anatómicos en el tracto reproductor femenino humano para la evaluación de sus características fenotípicas y funcionales. Este método puede adaptarse para aislar a otras células inmunes o las células dendríticas de otros tejidos de la mucosa.

Aislamiento de las células dendríticas del tracto reproductivo femenino humano estudios fenotípica y funcional

Aquí, presentamos un protocolo para describir el aislamiento de las vesículas extracelulares (EVs) en medio de cultivo en vitro de adultos Schistosoma japonicum.

Aislamiento y caracterización de las vesículas extracelulares de adultos Schistosoma japonicum

El presente informe destaca los requisitos cronológicos para el aislamiento de vesículas extracelulares (EV) de la microglia o de los macrófagos sanguíneos. Los vehículos eléctricos derivados de la microglia se evaluaron como reguladores del crecimiento de la neurita, mientras que los vehículos eléctricos derivados de macrófagos sanguíneos se estudiaron en el control de la invasión de células de glioma C6 en ensayos in vitro. El objetivo es comprender mejor estas funciones EV como mediadores...

Caracterización de vesículas extracelulares derivadas de células inmunes y estudio del impacto funcional en el entorno celular

Describimos una técnica de transducción transitoria rápida en diferentes etapas de desarrollo de Echinococcus granulosus utilizando vectores lentivirales de tercera generación.

Transducción transitoria de las formas estrobiladas de Echinococcus granulosus

Las bacterias secretan vesículas extracelulares (EV) de tamaño nanométrico que transportan moléculas biológicas bioactivas. La investigación EV se centra en comprender su biogénesis, su papel en las interacciones y enfermedades microbio-microbio y huésped-microbio, así como sus posibles aplicaciones terapéuticas. Se presenta un flujo de trabajo para el aislamiento escalable de vehículos eléctricos de varias bacterias para facilitar la estandarización de la investigación de vehículos eléctricos.

Aislamiento escalable y purificación de vesículas extracelulares de Escherichia coli y otras bacterias

El protocolo propuesto incluye pautas sobre cómo evitar la contaminación con endotoxinas durante el aislamiento de vesículas extracelulares de sobrenadantes de cultivos celulares y cómo evaluarlas adecuadamente.

Aislamiento de vesículas extracelulares de bajo contenido de endotoxinas derivadas de líneas celulares cancerosas

Aprende a aislar vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus y estudiar su absorción por células dendríticas derivadas de médula ósea. Este método revela mecanismos de inmunomodulación parasitaria.

Aislamiento y absorción de células dendríticas de pequeñas vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus

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