Name: Trasplante de pulmón de bioingeniería utilizando pulmones de ratón descelularizados y células endoteliales humanas primarias (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:25:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Aprende el protocolo estandarizado para bioingeniería pulmonar mediante descelularización y recelularización de pulmones de ratón con células endoteliales humanas primarias. Este método optimiza la investigación en trasplante de órganos.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>DESCELULARIZACIÓN</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27 G x 1/2 pulg. BD PrecisionGlide Needle</td><td>BD</td><td>305109</td><td>O equivalente Aguja de inyección de 27 G</td></tr><tr><td>BD Insyte IV Catéter 20 GA X 1.8 8IN</td><td>BD</td><td>381237</td><td>O equivalente 20 G</td></tr> IV catéter <tr><td>Sutura de seda con cuchilla (4-0)</td><td>Nesco</td><td>GA04SB</td><td>O equivalente</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>Catéter para vena yugular de rata, PU 2Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C20PU-MJV1301</td><td>Recomendado para ratones que pesan 30 g o menos.</td></tr><tr><td>Catéter para vena yugular de rata, PU 3Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C30PU-RJV1307</td><td>Recomendado para ratones que pesan más de 30 g.</td></tr><tr><td>DNasa I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>Inyectores PinPort</td><td>Instech</td><td>PNP3M</td><td></td></tr><tr><td>, 22 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F22-50</td><td>Se adapta a C30PU-RJV1307</td></tr><tr><td>PinPorts, 25 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F25-50</td><td>Se adapta a C20PU-MJV1301</td></tr><tr><td>Deoxicolato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa estéril, 5 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>genérico Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr><tr><td>CULTIVO</td><td></td><td></td><td></td>CELULAR</tr><tr><td>EGM-2 Medio de crecimiento de células endoteliales-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC &ndash; Células endoteliales de la vena umbilical humana</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>BIORREACTOR BASADO EN PERFUSIÓN Aguja</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr>de<td>20 G</td><td>Llave</td> de paso genérica <td></td><td></td></tr><tr><td>de 3 vías</td><td>Barrenador de</td> corcho genérico <td></td><td></td></tr><tr><td></td> Tamaño de perforación <td>genérico</td><td></td>, <td>6-10 mm</td></tr><tr><td>Cabezal de bomba EasyLoad III</td><td>Cole-Parmer</td><td>243934</td><td></td></tr><tr><td>Glass bote</td><td>Hario</td><td>SCN-200T</td><td>Diámetro interior: 80 mm</td></tr><tr><td>Agitador magnético de calentamiento</td><td>Accesorio de</td> señuelo genérico<td></td><td></td></tr><tr><td>, PVDF, para tubo blando</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-01</td><td>Hembra, se ajusta a tubos con diámetro interior de 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Accesorio de señuelo, PVDF, para tubo blando</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-01</td><td>Macho, se adapta a tubos con diámetro interior de 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Accesorio de señuelo, PVDF, para tubo blando</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-03</td><td>Hembra, se adapta a tubos con diámetro interno de 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Accesorio de señuelo, PVDF, para tubo blando</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-03</td><td>Macho, se adapta a tubos con diámetro interno de 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Barra de agitación magnética</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Variador modular de precisión digital con E/S remota y controlador de sobremesa</td><td>Cole-Parmer</td><td>07557-00</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de bomba de precisión Masterflex L/S, PharMed BPT, L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-16</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Tubo de bomba de prisión, silicona curada con platino, L/S 14</td><td>Cole-Parmer</td><td>96410-14</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP Unidad de filtro de jeringa, 0.22 &micro; m, polietersulfona, 33 mm, esterilizado con rayos gamma</td><td>Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 250 mL botella de hierba, tapón de rosca GL-45</td><td>Corning</td><td>1395-250</td><td></td></tr><tr><td>Septos de silicona para GL45 Tapón de rosca PBT de tapa abierta</td><td>Corning</td><td>1395-455S</td><td></td></tr><tr><td>Tapón de luz de silicona</td><td>IMG</td><td>07763-18</td><td>Diámetro superior: 87 mm, Diámetro inferior: 75 mm</td></tr><tr><td>Jeringa estéril, 10 mL, 50 mL</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CIRUGÍA DE RATÓN (Aislamiento del bloqueo corazón-pulmón | Trasplante de pulmón)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 Ataduras de nailon</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Ataduras de seda</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Ataduras de seda</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pinza arterial, 45 mm curvada, ranurada</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>C-17-45</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte IV Catéter 24GA</td><td>BD 381512</td><td></td><td>O catéter intravenoso equivalente 24G</td></tr><tr><td>Pinzas vasculares Bulldog 45mm curvadas</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>M2</td><td></td></tr><tr><td>Tartrato de butorfanol</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolina Sódica</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dumont fórceps #5/45</td><td>Fine Science Tools</td><td>1251-35</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte estilo vannas finas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15403-08 Punta de</td><td>45&grados, 0.01 x 0.06 mm</td></tr><tr><td>Kit de cauterización Gemini</td> Harvard <td>Apparatus</td><td>RS-300</td><td></td></tr><tr><td>Pinza Halsted-Mosquito punta curva, 125 mm Centro de</td><td>investigación biológica</td><td>16181670</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas Hegar, 150 mm</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BM065R</td><td></td></tr><tr><td>Solución de heparina</td><td>Mochida Seiyaku</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidina</td><td>Nippon Zenyaku Kogyo</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Micropinzas rectas</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BD33R</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Ventilador</td> de ratón <td>Sandoz N/A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Harvard Apparatus</td><td>Modelo 687&trade;</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina normal, grado clínico</td><td>Otsuka Pharmaceutical N</td><td>/ A</td><td></td></tr><tr><td>placa de Petri, 60 x 15 mm</td><td>BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Safelet Cath PU Catéter de poliuretano calibre 20</td><td>Nipro</td><td>09-031</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de acero inoxidable Sakaki curvadas 14 cm</td><td>Centro de investigación biológica</td><td>64152034</td><td></td></tr><tr><td>Soporte de bisturí</td> Centro <td>de investigación biológica</td><td>16101040</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de retracción para animales pequeños</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí de hoja de repuesto #11</td><td>Muranaka Medical Instruments</td><td>567-001-03</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte, 15 cm</td><td>Centro de investigación biológica</td><td>PRI13-3736</td><td></td></tr><tr><td>Estereomicroscopio</td><td>Leica Microsystems</td><td>M525</td><td>Es preferible un microscopio quirúrgico de grado clínico con un sistema de brazo flexible.</td></tr><tr><td>Clip de aneurisma de titanio Sugita curvo delgado, No.98</td><td>Mizuho medical</td><td>17-001-98</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de clip de titanio Sugita, 110 mm</td><td>Mizuho medical</td><td>17-013-53</td><td></td></tr><tr><td>Calentador eléctrico de temperatura ajustable</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hisopo de algodón ultrafino</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MANGUITO</td><td></td><td></td><td></td>VASCULAR Y BRONQUIAL</tr><tr><td>Fino papel de lija</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Venula 20 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1160</td><td></td></tr><tr><td>Venula 22 gauge Teflon</td><td>angiocatheter Top</td><td>1161</td><td></td></tr><tr><td>Venula 24 gauge Teflon</td><td>angiocatheter Top</td><td>1124</td><td></td></tr></tbody></table>

trasplante de pulmón de bioingeniería utilizando pulmones de ratón descelularizados y células endoteliales humanas primarias

Transplantation of Bioengineered Lung Using Decellularized Mouse Lungs and Primary Human Endothelial Cells

Siguiendo el protocolo de descelularización, los pulmones de ratón son visiblemente blancos y translúcidos (Figura 6A). Los componentes celulares deben eliminarse por completo, pero la estructura alveolar permanece intacta en la observación histológica (Figura 6B, C). Los pulmones de ratón recelularizados que utilizan 3 × 107 HUVEC con un cultivo de biorreactor basado en perfusión de 2 días muestran una distribución homogénea de los H...

Trasplante de pulmón de bioingeniería utilizando pulmones de ratón descelularizados y células endoteliales humanas primarias

Lung transplantation is a critical treatment for patients with end-stage lung diseases like idiopathic pulmonary fibrosis, but challenges such as donor ...

transplantation-bioengineered-lung-using-decellularized-mouse-lungs

Research

Investigación

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Bioengineering

Bioingeniería

Hemos desarrollado una matriz extracelular y de pulmón descelularizada biorreactor novela biomiméticos que se puede utilizar para generar tejido pulmonar funcional. Por la siembra de las células en la matriz y el cultivo en el biorreactor, que generan tejido que demuestra el intercambio de gases eficaz cuando se trasplantan en vivo por periodos cortos de tiempo.

Procedimiento para la Ingeniería de pulmón

La descelularización de todo el órgano produce andamios biológicos naturales que pueden ser utilizados para la medicina regenerativa. Se presenta la descripción de un modelo de regeneración pulmonar en primates no humanos en el que se descelularizan pulmones completos y luego se siembran con células madre adultas y células endoteliales en un biorreactor que facilita la circulación vascular y la ventilación de medios líquidos.

Descelularización y recelularización pulmonar de primates no humanos mediante un biorreactor especializado de órganos grandes

Con el fin de comprender los mecanismos celulares y moleculares que subyacen a la formación de neotejido y el desarrollo de estenosis en las válvulas del corazón de la ingeniería tisular, se desarrolló un modelo murino de trasplante heterotópico de válvula cardiaca. Una válvula cardíaca pulmonar fue trasplantado al receptor mediante la técnica de trasplante cardíaco heterotópico.

El trasplante de la válvula pulmonar Utilizando un modelo de ratón de heterotópico trasplante cardiaco

La recapitulación del microambiente específico del órgano, que estimula la angiogénesis local, es indispensable para la regeneración exitosa de los tejidos dañados. Este informe demuestra un método novedoso para implantar geles de fibrina en la superficie pulmonar de ratones vivos con el fin de explorar cómo el microambiente específico del pulmón modula la angiogénesis y la regeneración alveolar en ratones adultos.

El implante de gel de fibrina en pulmón de ratón para el Estudio de la angiogénesis pulmón específico

A continuación, presentamos un protocolo para generar ingeniería tisular injertos de vasos que son funcionales para el injerto en ratones por doble siembra de células madre pluripotentes inducidas parcialmente (PIPSC) - deriva células musculares lisas y PIPSC - células endoteliales derivadas de un biorreactor andamio buque descelularizado.

Generación y Acrecentamiento de buques de ingeniería de tejidos en un modelo de ratón

Este protocolo dirige eficientemente madre embrionarias de ratón endodermo definitivo derivado de las células de las vías respiratorias para madurar las células epiteliales. Esta técnica utiliza la diferenciación 3 dimensiones andamios pulmonares descelularizados para dirigir especificación linaje de pulmón, en un entorno de cultivo definido, libre de suero.

Generación de células epiteliales de las vías respiratorias del ratón ESC-Obtenido usando Descelularizado pulmón andamios

Este protocolo describe un método para generar tejidos pulmonares reproducibles y diseñados a pequeña escala, mediante la repoblación de rodajas pulmonares descelularizadas cortadas con precisión con células epiteliales alveolares tipo 2, fibroblastos y células endoteliales.

Tejidos pulmonares diseñados preparados a partir de rodajas pulmonares descelularizadas

En este artículo, las células endoteliales pulmonares primarias se aislaron y cultivaron de ratones neonatos.

Aislamiento de células endoteliales pulmonares primarias de ratón

Aquí se presenta un protocolo para el aislamiento del tejido pulmonar descelularizado regional. Este protocolo proporciona una poderosa herramienta para estudiar las complejidades en la matriz extracelular y las interacciones célula-matriz.

Disección y aislamiento de tejido pulmonar descelularizado específico de la región

Aquí, presentamos un protocolo para obtener imágenes intravitales del pulmón izquierdo del ratón trasplantado utilizando microscopía de dos fotones. Esto representa una herramienta valiosa para estudiar la dinámica celular y las interacciones en tiempo real después del trasplante de pulmón murino.

Microscopía intravital de dos fotones del pulmón de ratón trasplantado

Aprende el protocolo estandarizado para bioingeniería pulmonar mediante descelularización y recelularización de pulmones de ratón con células endoteliales humanas primarias. Este método optimiza la investigación en trasplante de órganos.

Trasplante de pulmón de bioingeniería utilizando pulmones de ratón descelularizados y células endoteliales humanas primarias

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