Name: Fenotipado basado en purificación, expansión y citometría de flujo de células madre mesenquimales de médula ósea derivadas de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: Aprende a purificar y expandir células madre mesenquimales de médula ósea de ratón mediante citometría de flujo. Este protocolo económico mejora la proliferación y diferenciación celular para investigación preclínica.

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<ol><li>Chu, D. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+the+progress+of+isolation%2C+culture%2C+storage%2C+and+clinical+application+of+human+bone+marrow+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">An update on the progress of isolation, culture, storage, and clinical application of human bone marrow mesenchymal stem/stromal cells.</a> Int J Mol Sci. 21 (3), 708(2020).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Transl%22%5BJournal%5D)">An improved protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> J Orthop Transl. 3 (1), 26-33 (2015).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+from+apoptotic+BMSCs+ameliorate+osteoporosis+via+transporting+regenerative+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles from apoptotic BMSCs ameliorate osteoporosis via transporting regenerative signals.</a> Theranostics. 14 (9), 3583-3602 (2024).</li>
<li>Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+and+osteoclast+progenitors+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and differentiation of bone marrow stromal cells and osteoclast progenitors from mice.</a> J Vis Exp. (131), e56750(2018).</li>
<li>Chu, D. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+stem+cells+for+therapy%3A+An+update+on+the+progress+of+isolation%2C+culture%2C+storage%2C+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue stem cells for therapy: An update on the progress of isolation, culture, storage, and clinical application.</a> J Clin Med. 8 (7), 917(2019).</li>
<li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+fibrotic+diseases%E2%80%94the+two+sides+of+the+same+coin%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in fibrotic diseases—the two sides of the same coin.</a> Acta Pharmacol Sin. 44 (2), 268-287 (2023).</li>
<li>Carbone, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+cervical+dislocation+as+a+humane+euthanasia+method+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Assessing cervical dislocation as a humane euthanasia method in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 352-356 (2012).</li>
<li>Swamydas, M., Lionakis, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+purification+and+labeling+of+mouse+bone+marrow+neutrophils+for+functional+studies+and+adoptive+transfer+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation, purification and labeling of mouse bone marrow neutrophils for functional studies and adoptive transfer experiments.</a> J Vis Exp. (77), e50586(2013).</li>
<li>Grossner, T., Haberkorn, U., Hofmann, J., Gotterbarm, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+basal+cell+culture+media+upon+the+osteogenic+response+of+hMSCs+evaluated+by+99mTc-HDP+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of different basal cell culture media upon the osteogenic response of hMSCs evaluated by 99mTc-HDP labeling.</a> Int J Mol Sci. 23 (11), 6288(2022).</li>
<li>Janda, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+Wnt+agonists+that+phenocopy+canonical+Wnt+and+%CE%B2-catenin+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Surrogate Wnt agonists that phenocopy canonical Wnt and β-catenin signalling.</a> Nature. 545 (7653), 234-237 (2017).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+Alizarin+Red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of the Alizarin Red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> Int J Mol Sci. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+osteogenic+differentiation+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+in+mice+inhibited+by+cyclophosphamide+with+psoralen%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Tissue+Eng+Res%22%5BJournal%5D)">Restoration of osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in mice inhibited by cyclophosphamide with psoralen.</a> Chin J Tissue Eng Res. 29 (1), 16-23 (2025).</li>
<li>Papaccio, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+Cancer+cells%2C+cancer+stem+cells%2C+and+mesenchymal+stem+cells%3A+Influence+in+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Concise review: Cancer cells, cancer stem cells, and mesenchymal stem cells: Influence in cancer development.</a> Stem Cells Transl Med. 6 (12), 2115-2125 (2017).</li>
<li>Kolf, C. M., Cho, E., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells.+Biology+of+adult+mesenchymal+stem+cells%3A+Regulation+of+niche%2C+self-renewal+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells. Biology of adult mesenchymal stem cells: Regulation of niche, self-renewal and differentiation.</a> Arthritis Res Ther. 9 (1), 204(2007).</li>
<li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li>
<li>Abdallah, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+reliable+protocol+for+long-term+culture+of+murine+bone+marrow+stromal+%28mesenchymal%29+stem+cells+that+retained+their+in+vitro+and+in+vivo+stemness+in+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">A simple and reliable protocol for long-term culture of murine bone marrow stromal (mesenchymal) stem cells that retained their in vitro and in vivo stemness in long-term culture.</a> Biol Proced Online. 21 (1), 3(2019).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+sequencing+reveals+gene+expression+signatures+associated+with+bone+marrow+stromal+cell+subpopulations+and+time+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Single cell sequencing reveals gene expression signatures associated with bone marrow stromal cell subpopulations and time in culture.</a> J Transl Med. 17 (1), 23(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Jeringa de 1 ml (aguja de jeringa de 22 G)</td><td>AMABLE GRUPO (KDL)</td><td>60017031</td><td></td></tr><tr><td>NBT/BCIP de 1 paso</td><td>Biotecnología Pierce, Inc.</td><td>34042</td><td>Tinción de fosfatasa alcalina</td></tr><tr><td>Formalina tamponada neutra al 10%</td><td>Wexis</td><td>5200250</td><td>Fijación celular</td></tr><tr><td>Placa de 6 pocillos</td><td>Selección de laboratorio</td><td>11110</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Placa de 24 pocillos</td><td>Selección de laboratorio</td><td>11310</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>40 &mu; m Filtro de células</td><td>Cornig</td><td>352340</td><td>Filtración para eliminar aglomerados</td></tr><tr><td>Jeringa de 50 ml</td><td>AMABLE GRUPO (KDL)</td><td>60017040</td><td></td></tr><tr><td>75% de etanol</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>31009001</td><td>Desinfectar la piel de los ratones</td></tr><tr><td>Alizarin Red S</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>A5533</td><td>Detección de depósitos de calcio y nódulos calcificados</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal APC CD44 (clon: IM7)</td><td>eBiociencia</td><td>17-0441-82</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>Control de isotipo IgG2b kappa de rata de APC (clon: eB149 / 10H5)</td><td>eBiociencia</td><td>17-4031-82</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Compañía Hiryama de Japón</td><td>HVE-50</td><td>Instrumentos quirúrgicos de esterilización</td></tr><tr><td>Incubadora de CO2</td><td>Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.</td><td>300583057</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Flujometría Cytoflex</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td>A00-1-1102</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>dexametasona</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>D4902</td><td>Diferenciación osteogénica de BMSC</td></tr><tr><td>Plato (100 mm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Plato (60mm)</td><td>Corning</td><td>430166</td><td>Colocación de la muestra durante el trasplante</td></tr><tr><td>Bolas de algodón desinfectante</td><td>Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd.</td><td>20230627</td><td>Desinfectar la piel de los ratones</td></tr><tr><td>Guantes estériles desechables</td><td>Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd</td><td>YT21131</td><td>Funcionamiento estéril</td></tr><tr><td>Dieta de roedores irradiados de doble león</td><td>Tecnología de alimentación animal experimental Suzhou Shuangshi Co., Ltd.</td><td>GB 14924.3</td><td>Alimentación animal</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Shanghai Biosun Sci& Tech Co., Ltd.</td><td>BS-0002-500</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>FITC Hamster Anti-Rat CD29 (clon: Ha2/5)</td><td>BD Biociencias</td><td>555003</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>FITC IgM de hámster, &lambda; 1 Control de isotipo (clon: G235-1)</td><td>BD Biociencias</td><td>553960</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>gelatina (0,1%)</td><td>OriCell</td><td>GLT-11301</td><td>Mejorar la capacidad de adhesión de las células</td></tr><tr><td>Jaula de ratones IVCs</td><td>Tecnología de equipos experimentales de animales del Rey Mono de Suzhou Co., Ltd.</td><td>HH-MMB-2</td><td>Barrera animal</td></tr><tr><td>Ácido L-ascórbico</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>A8960</td><td>Diferenciación osteogénica de BMSC</td></tr><tr><td>Rotulador Mark</td><td>Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd.</td><td>YYST5</td><td>Marcar la información celular en la placa de Petri</td></tr><tr><td>Modificación de MEM Alpha (1X)</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>SH30265</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Kit de diferenciación adipogénica de células madre mesenquimales de médula ósea de ratón</td><td>Cyagen</td><td>MUXMX-90031</td><td>Diferenciación adipogénica de BMSCs</td></tr><tr><td>Microscopio invertido Nikon Eclipse Ti2 Synstem</td><td>Japón Nikon Corporatin</td><td>Ti2-U</td><td>Observa las celdas y toma fotos</td></tr><tr><td>Tijeras oftálmicas&nbsp;</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>Y00030 JZ</td><td>Cortar la piel</td></tr><tr><td>Pinzas oftálmicas</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>BS-ZER-S-100 Biosharp</td><td>Obtener tejido óseo de ratón.</td></tr><tr><td>PIPETA PASTEUR</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>BS-XG-03M</td><td>Aspirar el medio de cultivo</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD31 (clon: Ha2/5)</td><td>BD Biociencias</td><td>553373</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>Rata PE IgG2a, &kappa; Control de isotipo (clon: R35-95)</td><td>BD Biociencias</td><td>553930</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal PE-cianina7 Ly-6A/E (Sca-1) (clon: D7)</td><td>eBiociencia</td><td>25-5981-82</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>Control de isotipo PE-Cianine7 Rat IgG2a kappa (clon: eBR2a)</td><td>eBiociencia</td><td>25-4321-82</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>2585636</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 Anti-rata antiratón CD45 (clon: Ha2 / 5)</td><td>BD Biociencias</td><td>561869</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 Rata IgG2b, &kappa; Control de isotipo (clon: A95-1)</td><td>BD Biociencias</td><td>550764</td><td>Citometría de flujo&nbsp;</td></tr><tr><td>Escalpelos</td><td>¿Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghai Medical Devices? Grupo?Co., Ltd.&nbsp;</td><td>J11010-10# JZ</td><td>Aislar las extremidades traseras y el torso del ratón y eliminar los tejidos extraños del hueso</td></tr><tr><td>Capucha estéril</td><td>Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.</td><td>ECO0.9</td><td>Mesa de operaciones quirúrgicas</td></tr><tr><td>paños quirúrgicos estériles</td><td>Equipo médico Henan Huayu Co., Ltd.</td><td>20160900</td><td>Proporcionar un área de cirugía estéril</td></tr><tr><td>Tubo (50 ml)</td><td>Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.</td><td>BLD-BL2002500</td><td>Almacenar la solución celular filtrada</td></tr><tr><td>tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>digerir las células adherentes</td></tr><tr><td>&beta;-glicerofosfato</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>G5422</td><td>Diferenciación osteogénica de BMSC</td></tr></tbody></table>

fenotipado basado en purificación, expansión y citometría de flujo de células madre mesenquimales de médula ósea derivadas de ratón

Purification, Expansion, and Flow Cytometry-Based Phenotyping of Mouse Derived Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

Las BMSC derivadas de ratones se aislaron y cultivaron durante aproximadamente 2 semanas para generar las BMSC del tercer paso (P3) (Figura 3). Como se muestra en la Figura 3A, las células recién extraídas de la médula ósea permanecieron mononucleares con gotas de grasa visibles. Las células fusiformes aparecieron en la placa de cultivo, alcanzando una confluencia del 60%-80% en el5º día de cultivo (<strong class="xfig...

Fenotipado basado en purificación, expansión y citometría de flujo de células madre mesenquimales de médula ósea derivadas de ratón

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of stem cells that can self-renew and differentiate into multiple cell lineages. Among them, MSCs found in ...

purification-expansion-flow-cytometry-based-phenotyping-mouse-derived

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Un método para analizar la distribución de progenitores hematopoyéticos de médula ósea en citometría de flujo, así como para aislar eficazmente altamente purificadas células madre hematopoyéticas (HSC) se describe. El procedimiento de aislamiento se basa esencialmente en el enriquecimiento magnética de c-kit + células y células de clasificación para purificar las CMH para los estudios celulares y moleculares.

El análisis fenotípico y aislamiento de células madre hematopoyéticas murinas y progenitores comprometidos Lineage

Se describe un protocolo para el aislamiento y purificación de los neutrófilos de médula ósea de ratón por centrifugación en gradiente de densidad y para el etiquetado de neutrófilos usando colorantes CellTracker. Esto representa un método sencillo, rápido, reproducible y económico para la obtención de un gran número de neutrófilos para los estudios funcionales aguas abajo o experimentos de transferencia adoptivos y seguimiento.

Aislamiento, Purificación y Etiquetado de neutrófilos de médula ósea de ratón de Estudios funcionales y experimentos de transferencia adoptivos

Contorneamos un protocolo para detectar la expresión simultánea de marcadores de células madre de leucemia en las células de la leucemia mieloide aguda primaria por citometría de flujo. Mostramos cómo cuantificar tres poblaciones progenitoras y una supuesta población de LSC con el aumento del grado de maduración. Se confirmó la presencia de estas poblaciones en paciente correspondientes-derivado-xenoinjertos.

Citometría de flujo para estimar las células madre de leucemia la leucemia mieloide aguda primaria y el paciente-derivado-xenoinjertos, diagnóstico y seguimiento hasta

La diagnosis MDS es difícil en ausencia de criterios morfológicos o citogenética no informativo. MFC podría ayudar a perfeccionar el proceso de diagnóstico de MDS. Para ser de utilidad para la práctica clínica, el análisis MFC debe basarse en parámetros con suficiente especificidad y sensibilidad, y resultados deben ser reproducibles entre diferentes operadores.

Guiada por la base de datos-citometría de flujo para la evaluación de la maduración de células mieloides de la médula

Demostramos cómo identificar y aislar 6 subconjuntos de progenitores mieloides de médula murine usando una combinación de magnético y fluorescencia clasificación (MACS y FACS). Este protocolo puede ser utilizado para RNA/proteína análisis, experimentos de transferencia adoptiva en vivo y en vitro ensayos de cultura (culturas de la pastilla o líquido).

Identificación y aislamiento de Oligopotent y linaje comprometido progenitores mieloides de la médula ósea de ratón

Las bombas de eflujo xenobiótico son muy activas en células hematopoyéticas madre y progenitoras (HSCCP) y causan extrusión de TMRM, un tinte fluorescente potencial de membrana mitocondrial. Aquí, presentamos un protocolo para medir con precisión el potencial de la membrana mitocondrial en los HSCCP por TMRM en presencia de Verapamil, un inhibidor de la bomba de eflujo.

Mejorar la precisión de la evaluación citométrica de flujo del potencial de la membrana mitocondrial en células hematopoyéticas de tallo y progenitor a través de la inhibición de las bombas de eflujo

Este método describe la purificación por citometría de flujo de MEP y MKp de fémures, tibias y huesos pélvicos de ratones.

Aislamiento de progenitores de megacariocitos de ratón

Aquí, describimos un protocolo simple para el aislamiento y tinción de células murinas de médula ósea para fenotipo de células madre hemopoyéticas y progenitoras junto con las células madre endoteliales y mesenquimales de nicho de soporte. También se incluye un método para enriquecer las células ubicadas en las áreas endosteal y central de la médula ósea.

Análisis por citometría de flujo de células madre y progenitoras hematopoyéticas de médula ósea murina y células de nicho estromal

Este protocolo describe el uso de la clasificación celular activada por fluorescencia de células madre mesenquimales humanas utilizando el método de clasificación de una sola célula. Específicamente, el uso de la clasificación de una sola célula puede lograr una pureza del 99% de las células inmunofenotipadas de una población heterogénea cuando se combina con un enfoque basado en citometría de flujo multiparamétrica.

Clasificación unicelular de células madre mesenquimales inmunofenotipadas de dientes deciduos exfoliados humanos

Aquí se presenta un protocolo detallado para aislar y caracterizar poblaciones microambientales de médula ósea a partir de modelos murinos de síndromes mielodisplásicos y leucemia mieloide aguda. Esta técnica identifica cambios en el nicho de la médula ósea no hematopoyética, incluidas las células endoteliales y mesenquimales del estroma, con progresión de la enfermedad.

Identificación de poblaciones microambientales de médula ósea en el síndrome mielodisplásico y la leucemia mieloide aguda

Aprende a purificar y expandir células madre mesenquimales de médula ósea de ratón mediante citometría de flujo. Este protocolo económico mejora la proliferación y diferenciación celular para investigación preclínica.

Fenotipado basado en purificación, expansión y citometría de flujo de células madre mesenquimales de médula ósea derivadas de ratón (Video) | JoVE Journal

Fenotipado basado en purificación, expansión y citometría de flujo de células madre mesenquimales de médula ósea derivadas de ratón

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