Name: Aislamiento de poblaciones vivas de células mieloides y epiteliales del pulmón de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Aprende a aislar poblaciones vivas de células mieloides y epiteliales del pulmón de ratón. Este protocolo desarrolla estrategias de selección para identificar subconjuntos celulares específicos y estudiar la reparación pulmonar tras infección viral.

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<meta charset="utf8"></head><body>Aislamiento de células inmunitarias y no inmunitarias de pulmones de ratón para citometría de flujo

<ol><li>Wanner, A., Salathé, M., O'Riordan, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucociliary+clearance+in+the+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Mucociliary clearance in the airways.</a> Am J Respir Crit Care Med. 154 (6), 1868-1902 (1996).</li>
<li>Mason, R. J., Williams, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+II+alveolar+cell.+Defender+of+the+alveolus%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Type II alveolar cell. Defender of the alveolus.</a> Am Rev Respir Dis. 115 (1), 81-91 (1977).</li>
<li>Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+type+II+cell%3A+defender+of+the+alveolus+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Res%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial type II cell: defender of the alveolus revisited.</a> Respir Res. 2 (1), 33-46 (2001).</li>
<li>Basil, M. C., Alysandratos, K. -D., Kotton, D. N., Morrisey, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+repair+and+regeneration%3A+Advanced+models+and+insights+into+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Lung repair and regeneration: Advanced models and insights into human disease.</a> Cell Stem Cell. 31 (4), 439-454 (2024).</li>
<li>Hussell, T., Bell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+macrophages%3A+plasticity+in+a+tissue-specific+context%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Alveolar macrophages: plasticity in a tissue-specific context.</a> Nat Rev Immunol. 14 (2), 81-93 (2014).</li>
<li>Gschwend, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+macrophages+rely+on+GM-CSF+from+alveolar+epithelial+type+2+cells+before+and+after+birth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Alveolar macrophages rely on GM-CSF from alveolar epithelial type 2 cells before and after birth.</a> J Exp Med. 218 (1), e20210745(2021).</li>
<li>Gillich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+cell-type+specialization+in+the+alveolus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Capillary cell-type specialization in the alveolus.</a> Nature. 586 (7831), 785-789 (2020).</li>
<li>Schyns, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-classical+tissue+monocytes+and+two+functionally+distinct+populations+of+interstitial+macrophages+populate+the+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Non-classical tissue monocytes and two functionally distinct populations of interstitial macrophages populate the mouse lung.</a> Nat Commun. 10 (1), 3964(2019).</li>
<li>Chakarov, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+interstitial+macrophage+populations+coexist+across+tissues+in+specific+subtissular+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two distinct interstitial macrophage populations coexist across tissues in specific subtissular niches.</a> Science. 363 (6432), eaat3773(2019).</li>
<li>Tsukui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-producing+lung+cell+atlas+identifies+multiple+subsets+with+distinct+localization+and+relevance+to+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Collagen-producing lung cell atlas identifies multiple subsets with distinct localization and relevance to fibrosis.</a> Nat Commun. 11 (1), 1920(1920).</li>
<li>Aegerter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza-induced+monocyte-derived+alveolar+macrophages+confer+prolonged+antibacterial+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Influenza-induced monocyte-derived alveolar macrophages confer prolonged antibacterial protection.</a> Nat Immunol. 21 (2), 145-157 (2020).</li>
<li>Johansson, C., Kirsebom, F. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+in+respiratory+viral+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils in respiratory viral infections.</a> Mucosal Immunol. 14 (4), 815-827 (2021).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-derived+alveolar+macrophages+autonomously+determine+severe+outcome+of+respiratory+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Monocyte-derived alveolar macrophages autonomously determine severe outcome of respiratory viral infection.</a> Sci Immunol. 7 (71), eabj5761(2022).</li>
<li>Moll, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+transplantation+of+syngeneic+lung+adenocarcinoma+cells+to+study+PD-L1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic transplantation of syngeneic lung adenocarcinoma cells to study PD-L1 expression.</a> J Vis Exp. (143), e58101(2019).</li>
<li>Warshamana, G. S., Corti, M., Brody, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-%CE%B1%2C+PDGF%2C+TGF-%CE%B21+expression+by+primary+mouse+bronchiolar-alveolar+epithelial+and+mesenchymal+cells%3A+TNF-%CE%B1+induces+TGF-%CE%B21%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">TNF-α, PDGF, TGF-β1 expression by primary mouse bronchiolar-alveolar epithelial and mesenchymal cells: TNF-α induces TGF-β1.</a> Exp Mol Pathol. 71 (1), 13-33 (2001).</li>
<li>Corti, M., Brody, A. R., Harrison, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+primary+culture+of+murine+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and primary culture of murine alveolar type II cells.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 14 (3), 309-315 (1996).</li>
<li>Quantius, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus+infects+epithelial+stem%2Fprogenitor+cells+of+the+distal+lung%3A+Impact+on+Fgfr2b-driven+epithelial+repair%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Influenza virus infects epithelial stem/progenitor cells of the distal lung: Impact on Fgfr2b-driven epithelial repair.</a> PLoS Pathog. 12 (5), e1005544(2016).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+perfusion+of+the+mouse+for+brain+tissue+dissection+and+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22BIO+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation.</a> BIO Protoc. 11 (8), e3988(2021).</li>
<li>Morton, J., Snider, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+collection+and+processing+of+lungs+from+aged+mice+for+histological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathobiol+Aging+Age+Relat+Dis%22%5BJournal%5D)">Guidelines for collection and processing of lungs from aged mice for histological studies.</a> Pathobiol Aging Age Relat Dis. 7 (1), 1313676(2017).</li>
<li>Bijgaart, R. J. E., van den Kong, N., Maynard, C., Plaks, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+live+imaging+of+lung+metastasis+and+their+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ex vivo live imaging of lung metastasis and their microenvironment.</a> J Vis Exp. (108), e53741(2016).</li>
<li>Shi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+purification+of+immune+cells+from+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Isolation and purification of immune cells from the liver.</a> Int Immunopharmacol. 85, 106632(2020).</li>
<li>Short, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus+damages+the+alveolar+barrier+by+disrupting+epithelial+cell+tight+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Influenza virus damages the alveolar barrier by disrupting epithelial cell tight junctions.</a> Eur Respir J. 47 (3), 954-966 (2016).</li>
<li>Laidlaw, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+cell+help+guides+formation+of+CD103%2B+lung-resident+memory+CD8%2B+T+cells+during+influenza+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">CD4+ T cell help guides formation of CD103+ lung-resident memory CD8+ T cells during influenza viral infection.</a> Immunity. 41 (4), 633-645 (2014).</li>
<li>D'Agostino, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+isolation+and+characterization+of+lung+tissue-resident+memory+T+cells+and+airway-trained+innate+immunity+after+intranasal+vaccination+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for isolation and characterization of lung tissue-resident memory T cells and airway-trained innate immunity after intranasal vaccination in mice.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101652(2022).</li>
<li>Waal, A. M., de Hiemstra, P. S., Ottenhoff, T. H., Joosten, S. A., vander Does, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+cells+interact+with+immune+cells+and+bacteria+to+shape+the+microenvironment+in+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial cells interact with immune cells and bacteria to shape the microenvironment in tuberculosis.</a> Thorax. 77 (4), 408-416 (2022).</li>
<li>Bhattacharya, J., Westphalen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-epithelial+interactions+in+pulmonary+alveoli%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Macrophage-epithelial interactions in pulmonary alveoli.</a> Semin Immunopathol. 38 (4), 461-469 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Jeringa de 1 mL con punta deslizante</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>tubo de microcentrífuga de 1,7 mL</td><td>DOT Scientific</td><td>RN1700-GMT</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de 10 mL (desechables)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-567-603</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 10 mL con punta BD Luer-Lok VWR</td><td></td><td>75846-756</td><td></td></tr><tr><td>123 unidades eBeads Cuentas de conteo</td><td>Thermo Scientific</td><td>01-1234-42</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de 12 canales (30-300ul)</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>7112-3300</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído al 16 %</td><td>VWR</td><td>100503-917</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de 23 G con bisel normal</td><td>VWR</td><td>305194</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de 27 G con bisel normal</td><td>VWR</td><td>BD305109</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de 5 ml (desechables)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>170373</td><td></td></tr><tr><td>tubos de centrífuga de 50 ml</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>28-108</td><td></td></tr><tr><td>Placa inferior redonda de 96 pocillos</td><td>Corning</td><td>3797</td><td></td></tr><tr><td>ACK tampón de lisado</td><td>Gibco</td><td>A100492-01</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-ratón CD11c</td><td>BioLegend</td><td>117311</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4/80 Anticuerpo monoclonal para ratas (PE (ficoeritrina)/Cy7)</td><td>BioLegend</td><td>123114</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-ratón CD64 (Fc&gamma; RI)</td><td>BioLegend</td><td>139306</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-ratón CD45 BioLegend</td><td></td><td>103115</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard Catéteres intravenosos blindados</td><td>VWR</td><td>381423</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-ratón I-A/I-E (MHC-II)BioLegend</td><td></td> <td>107632</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-ratón/humano CD11b</td><td>BioLegend</td><td>101235</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violeta 605 anti-ratón Ly-6C</td><td>BioLegend</td><td>128036</td><td></td></tr><tr><td>Brillante Violeta 711 anti-ratón CD45</td><td>BioLegend</td><td>103147</td><td></td></tr><tr><td>ratones C57BL/6J&nbsp;</td><td>Jackson Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cd140A (PDGFRA) Anticuerpo monoclonal (APA5), PE-Cianina7, eBioscience</td><td>Life Technologies</td><td>25-1401-82</td><td></td></tr><tr><td>CD170 (Siglec F) Anticuerpo monoclonal (1RNM44N), PE</td><td>Life Technologies</td><td>12170280</td><td></td></tr><tr><td>Filtros celulares</td><td>Centrífuga Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppenodorf</td><td>5910R</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonucleasa I de páncreas bovino (DNasa)</td><td>Millipore Sigma</td><td>DN25-100MG</td><td>Reconstituido a 20 mg/mL en DPBS como solución madre almacenada a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Dispasa</td><td>VWR</td><td>76176-668</td><td>Descongelado una vez y almacenado como alícuotas de 1 ml a -20 °C; C</td></tr><tr><td>Pinzas de disección (Dumont #7)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de disección</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience kit de fijación</td><td>Life Technologies</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR TX89125170HU</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GeminiBio</td><td>100-106</td><td>Descongelado una vez e inactivado por calor antes del almacenamiento a largo plazo como alícuotas a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>FITC anti-ratón CD31 Anticuerpo BioLegend</td><td></td><td>102406</td><td></td></tr><tr><td>Gibco RPMI 1640 Medio</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-875-093</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de vidrio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-552-3</td><td></td></tr><tr><td>depósito graduado</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1930-2235</td><td></td></tr><tr><td>Cubo de hielo</td><td>Corning</td><td>432128</td><td></td></tr><tr><td>Inyección de hidrocloruro de ketamina (100 mg/mL)</td>La <td>mezcla de eutanasia de ketamina y xialazina Dechra se puede mantener en 30 mg/mL de clorhidrato de ketamina y 4,5 mg/mL de xilacina en DPBS estéril hasta por un mes.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Millipore Sigma</td><td>5401119001</td><td>reconstituido a 5 mg/mL en DPBS como solución madre almacenada a -20 & grados; C</td></tr><tr><td>Tapas para placas de 96 pocillos</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-201-731</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora orbital Shaker</td><td>Barnstead Lab-Line</td><td>SHKE4000</td><td></td></tr><tr><td>pipeta p1000</td><td>Eppenodorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>p1000 tips</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1122-1830</td><td></td></tr><tr><td>pipeta p200</td><td>Eppenodorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>p200 puntas</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1110-1700</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-ratón CD326 (Ep-CAM)</td><td>BioLegend</td><td>118206</td><td></td></tr><tr><td>PerCP/Cyanine5.5 anti-ratón CD104 Anticuerpo</td><td>BioLegend</td><td>123614</td><td></td></tr><tr><td>PerCP/Cyanine5.5 anti-ratón Ly-6G</td><td>BioLegend</td><td>127616</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Aid&nbsp;</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Anti-ratón purificado CD16/32 </td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>Referido como "Fc block" en el texto </td></tr><tr><td>Botella de spray</td><td>VWR</td><td>23609-182</td><td></td></tr><tr><td>Sutura (tamaño 2-0)</td><td>VWR</td><td>100190-026</td><td></td></tr><tr><td>Almohadillas</td><td>VWR</td><td>56617-014</td><td></td></tr><tr><td>Xysed (xilacina 100mg/mL)</td><td>Pivetal</td><td></td><td>Vea las notas de hidrocloruro de ketamina arriba.</td></tr><tr><td>Kit de Viabilidad Zombie Aqua Fixable BioLegend</td><td></td><td>423102</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento de poblaciones vivas de células mieloides y epiteliales del pulmón de ratón

Isolation of Live Myeloid and Epithelial Cell Populations from the Mouse Lung

Un digestión exitoso dará como resultado aproximadamente 20-25 millones de células con un 90%-95% de viabilidad. Si se agregan aproximadamente 25,000 cuentas de conteo a una fracción del 8% del pulmón, las cuentas deberían comprometer el 1%-3% de los eventos recolectados. Después de la compuerta en los singletes, aproximadamente el 90%-95% de las células deben ser Zombie Aqua negativas (lo que indica viabilidad) (Figura 2A, Figura 3A).
<p class="jove_content...

Aislamiento de poblaciones vivas de células mieloides y epiteliales del pulmón de ratón

The lung is continuously exposed to pathogens and other noxious environmental stimuli, rendering it vulnerable to damage, dysfunction, and the development ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Aquí se describe un protocolo para el aislamiento y cultivo de las células endoteliales murinas pulmonar. Este método consiste en la disociación mecánica y enzimática del tejido pulmonar, así como un proceso de purificación de 2 pasos con anti-PECAM-1 y anti-ICAM-2 anticuerpos conjugados a perlas magnéticas, lo que produce una población pura de células endoteliales microvasculares su mayoría de origen.

Aislamiento y cultivo de células endoteliales pulmonares de ratones recién nacidos

En este artículo se demuestra el aislamiento de las células del pulmón murino residentes madre mesenquimales (MSC pulmón), su expansión, la caracterización y análisis de las propiedades inmunomoduladoras.

Aislamiento y Caracterización de Hoechst Baja CD45 Negativo Mouse células madre mesenquimales de pulmón

Una preparación altamente purificada de células dendríticas del pulmón del ratón se describe. Especial énfasis se da al aislamiento de subgrupo de células dendríticas convencionales.

Aislamiento de células dendríticas del pulmón de ratón

Se describe el aislamiento rápido de células primarias de murino de tipo II alveolares epiteliales (AECII) por citometría de flujo negativo de selección. Estos AECII mostrar una alta viabilidad y pureza, y son adecuados para una amplia gama de estudios funcionales y molecular respecto a su función en condiciones respiratorias tales como enfermedades autoinmunes o infecciosas.

Citometría de flujo El aislamiento de células primarias murino tipo II alveolares epiteliales de Estudios funcionales y moleculares

Este video muestra una técnica in vitro para identificar células inmunitarias que residen en pulmones murinos. Después de aislar las células inmunitarias diana del tejido pulmonar murino, se marcan en la superficie utilizando un cóctel de anticuerpos marcados con fluoróforos contra marcadores específicos en las células inmunitarias innatas y adaptativas. Además, los monocitos, macrófagos y células dendríticas se marcan mediante un marcador intracelular. A continuación, se identifican los...

Un método in vitro para identificar células inmunitarias innatas y adaptativas que residen en pulmones murinos

Este protocolo describe una técnica de aislamiento para obtener células mesenquimales del estroma residentes de pulmón primarios de ratas, mediante el uso de la digestión enzimática, la separación por gradiente de densidad, la adherencia de plástico y CD146 + selección de perlas magnéticas.

Aislamiento de CD146<sup&gt; +</sup&gt; Las células estromales mesenquimales de pulmón Residente de los pulmones de ratas

Este protocolo describe el uso de la citometría de flujo para identificar los cambios en la composición de las células inmunitarias, el perfil de citoquinas y el perfil de quimiocinas en el entorno pulmonar después de la oclusión transitoria de la arteria cerebral media, un modelo murino de accidente cerebrovascular isquémico.

Caracterización de células inmunes y mediadores proinflamatorios en el ambiente pulmonar

Este artículo proporciona una metodología detallada para los enfoques de disociación tisular y fraccionamiento celular que permiten el enriquecimiento de células epiteliales viables de las regiones proximal y distal del pulmón humano. En este caso, estos enfoques se aplican para el análisis funcional de células progenitoras epiteliales pulmonares mediante el uso de modelos de cultivo de organoides 3D.

Aislamiento y enriquecimiento de células progenitoras epiteliales pulmonares humanas para cultivo de organoides

En este artículo, las células endoteliales pulmonares primarias se aislaron y cultivaron de ratones neonatos.

Aislamiento de células endoteliales pulmonares primarias de ratón

El protocolo que se describe a continuación es una forma sencilla y eficaz de aislar células que contienen retinoides de poblaciones de células pulmonares muy heterogéneas mediante el uso de la autofluorescencia de retinoides específicos y el empleo de la clasificación de células activadas por fluorescentes.

Aislamiento de células que contienen retinoides pulmonares mediante clasificación celular

Este protocolo presenta un método basado en citometría de flujo para aislar células epiteliales alveolares tipo II (AECII) viables de pulmones murinos neonatales, juveniles o adultos (infectados o no infectados). Este enfoque permite que estudios moleculares y/o funcionales posteriores de AECII identifiquen sus funciones durante la inflamación e infección pulmonar.

Aislamiento de células epiteliales alveolares tipo II de pulmones murenos neonatales, juveniles y adultos adaptables a entornos experimentales infecciosos

Aprende a aislar poblaciones vivas de células mieloides y epiteliales del pulmón de ratón. Este protocolo desarrolla estrategias de selección para identificar subconjuntos celulares específicos y estudiar la reparación pulmonar tras infección viral.

Aislamiento de poblaciones vivas de células mieloides y epiteliales del pulmón de ratón

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