Name: Inoculación intradérmica de Mycobacterium avium en el oído de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Aprende a realizar inoculación intradérmica de Mycobacterium avium en orejas de ratón para estudiar micobacterias no tuberculosas. Este modelo permite investigar respuestas inmunitarias en condiciones controladas de exposición.

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<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
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<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Jeringa de 0,05% Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>de 1 ml</td><td>Fisher</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 agar triplacas</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G aguja roma</td><td>Fisher</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>Cabina de bioseguridad</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubadora</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr><tr><td>Cinta adhesiva de doble cara</td><td>Scotch</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de microlitros Hamilton 701N</td><td>Fisher</td><td>14-824-16</td><td></td></tr><tr><td>Puntas omnidireccionales de tejido duro</td><td>Fisher</td><td>15-340-102</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de insulina</td><td>Fisher</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>Lupa iluminada</td><td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizador de tejidos</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>Soporte de homogeneizador de tejidos</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

inoculación intradérmica de mycobacterium avium en el oído de ratón

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

Utilizamos el protocolo detallado anteriormente para determinar si se podía establecer un modelo de desafío NTM reproducible utilizando la dermis del oído como vía de infección o exposición. Las mazorcas se recolectaron de dos animales a los 28 días después del desafío, se homogeneizaron y se colocaron en placas como se describe en los medios 7H10 selectivos de micobacterias. Observamos que M. avium persistió hasta 28 días en las orejas que fueron desafiadas intradérmicamente y una ausencia de M. avium en la oreja no desafiada (Figura 2).
Si bien no observamos diseminación al oído no desafiado a los 28 días después de la infección, otros que utilizaron este modelo de dermis del oído para el modelado de TB latente han observado diseminación a otros sitios de órganos distales14. Planteamos la hipótesis de que una dosis más baja de provocación y el uso de aislado de M. avium pueden reducir la diseminación a puntos temporales posteriores que pueden reflejar mejor la exposición frente a la infección crónica. Por lo tanto, la eutanasia se realizó en cohortes de ratones desafiados con M. avium n = 5 a los 28, 56, 90 y 132 días después de la infección. Se homogeneizaron los siguientes órganos con el mismo protocolo descrito para los tejidos del oído: pulmón, bazo, ganglio linfático drenante (DLN) y cerebro. Esta vía de desafío dio lugar a una diseminación esporádica a lo largo del tiempo, en la que menos de la mitad de los animales demostraron UFC contables en los órganos analizados 56 o 90 días después de la infección (Tabla 1). A los 132 días después de la provocación con cáncer, todos los ratones tenían M. avium detectable en el bazo (n = 5/5 animales evaluados), pero parecían albergar un mínimo (n = 1/5 en DLN) o ninguna bacteria (n = 0/5 en pulmones o cerebro) en otros órganos en este punto de tiempo (Tabla 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
Figura 1: Orientación de una aguja con el lado bisel hacia arriba. Antes de la inserción de la aguja, el lado del bisel debe estar hacia arriba para administrar correctamente el inóculo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
Figura 2: Colonización del tejido del oído por M. avium 28 días después del desafío. Los ratones hembra C57BL/6 fueron desafiados en el oído con 102 UFC de Mycobacterium avium. La oreja desafiada (+) se comparó con la oreja no desafiada (-) a los 28 días, n = 2 animales individuales de un solo experimento mostrado, con cada animal en un color y símbolo diferente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Tiempo (día)</td>
			<td colspan="4">Registro de órgano10 UFC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pulmón</td>
			<td>Bazo</td>
			<td>DLN</td>
			<td>Cerebro</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3.08, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>2.81, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.78, 0.90, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.53, 3.43, ND, ND, ND</td>
			<td>2.78, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.20, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.60, 3.35, 3.26, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.60, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = ganglio linfático drenante, ND = no detectado</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: Diseminación de M. avium desde la oreja a lo largo del tiempo después del desafío. Los pulmones, el bazo, el ganglio linfático de drenaje (DLN) y el cerebro se recolectaron de n = 5 ratones por punto de tiempo después del desafío. Los tejidos homogeneizados se sembraron y se evaluó el crecimiento bacteriano. Las UFC de órganos se presentaron como logaritmo10 valores transformados donde se contaron las bacterias y no se detectaron (ND) donde no se observaron UFC a ninguna concentración plateada. Datos de curso de tiempo representativos de un experimento.

Inoculación intradérmica de Mycobacterium avium en el oído de ratón

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video demuestra la inducción de inflamación sistémica en un ratón anestesiado. La inyección de depósitos de adyuvantes de antígenos micobacterianos desencadena la liberación de citocinas y la inflamación localizada. Los vasos linfáticos se abren, lo que permite la entrada de las células inmunitarias en los ganglios linfáticos y la activación de las células T, que liberan citocinas proinflamatorias, lo que provoca una inflamación generalizada.

Inyección subcutánea de antígeno bacteriano para inducir inflamación sistémica en un modelo murino

Este video muestra un método para generar un modelo de ratón de uveítis micobacteriana cebada (PMU) para estudiar la uveítis postinfecciosa. Tras la inducción de PMU por inyección intravítrea de Mycobacterium tuberculosis muerto por calor en un ratón previamente inmunizado con el mismo inmunógeno, se analiza la progresión de la inflamación crónica en el ojo mediante imágenes y examen...

Un modelo murino de uveítis micobacteriana preparada para estudiar la uveítis posinfecciosa

El video demuestra la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón mediante la inyección de una combinación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina y Mycobacterium tuberculosis inactivada. El modelo permite a los investigadores estudiar los mecanismos de la enfermedad y probar intervenciones terapéuticas.

Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

Este video muestra un ensayo para inmunizar un modelo de ratón con esporozoítos vivos atenuados. Los esporozoítos de Plasmodium atenuados por radiación se inyectan en la cara dorsal de la oreja del ratón. Después de las inyecciones en múltiples ubicaciones en ambos oídos, se permite que el ratón se recupere.

Inmunización intradérmica con esporozoítos vivos atenuados en un modelo de ratón

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta...

La matriz extracelular se somete a la remodelación sustancial durante la cicatrización de heridas, la inflamación y la tumorigénesis. Se presenta un novedoso enfoque de inmunofluorescencia microscopía intravital de visualizar la dinámica de fibrilar, así como componentes de la matriz de tipo malla con una alta resolución espacial y temporal mediante epifluorescencia o microscopía de dos fotones.

A largo plazo intravital Inmunofluorescencia imágenes de tejido Componentes de Matriz con epifluorescencia y microscopía de dos fotones

Los mecanismos que regulan la motilidad intersticial de las células T CD4 efectoras en sitios de inflamación son relativamente desconocidos. Se presenta un enfoque no invasivo para visualizar y manipular en las células T CD4 in vitro -primed en la dermis para los oídos inflamados, lo que permite el estudio del comportamiento dinámico de estas células in situ.

La migración de células T CD4 obtener imágenes intersticial en la dermis inflamadas

Se describe un ensayo en ratones para rastrear la migración celular de la piel al ganglio linfático drenante que permite la caracterización de las células dendríticas de la piel movilizadas al ganglio linfático después de la infección de la almohadilla del pie con Bacille Calmette-Guérin.

Un ensayo basado en CFSE para estudiar la migración de la piel murina de células dendríticas en los nodos linfáticos de drenaje durante la infección con<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacilo de Calmette-Guérin

En este informe presentamos un protocolo que permite al investigador generar un modelo murino de uveítis intraocular. Más comúnmente conocida como uveítis autoinmune experimental (EAU), este modelo establecido captura muchos aspectos de la enfermedad humana. Aquí, describiremos cómo inducir y monitorear la progresión de la enfermedad utilizando varias lecturas.

Uveítis autoinmune experimental: un modelo de ratón inflamatorio intraocular

Este protocolo describe los pasos para inducir la uveítis micobacteriana preparada (PMU) en ratones. Este método describe los pasos para ayudar a producir una inflamación ocular confiable y robusta en el sistema modelo de ratón. Usando este protocolo, generamos ojos uveíticos y ojos compañeros no inflamados de animales individuales para su posterior evaluación con ensayos inmunológicos, transcriptómicos y proteómicos.

Uveítis micobacteriana (PMU) preparada como modelo para la uveítis postinfecciosa

Los ratones son generalmente resistentes a las infecciones por Mycobacterium abscessus, lo que complica el descubrimiento y desarrollo de antibióticos muy necesarios contra las infecciones pulmonares. Aquí, describimos un método de preparación de inóculo e infección intratraqueal que demostró producir una infección sostenida en ratones inmunocompetentes.

Preparación de Mycobacterium abscessus incrustado en perlas de agar para inocular ratones inmunocompetentes por vía intratraqueal

Aprende a realizar inoculación intradérmica de Mycobacterium avium en orejas de ratón para estudiar micobacterias no tuberculosas. Este modelo permite investigar respuestas inmunitarias en condiciones controladas de exposición.

Inoculación intradérmica de Mycobacterium avium en el oído de ratón

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