Name: Inervación de organoides intestinales humanos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Aprende a generar organoides intestinales humanos con sistema nervioso entérico para ingeniería de tejidos. Este método optimiza la organización celular y ofrece soluciones para el síndrome de intestino corto en pediatría.

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<ol><li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+bowel+syndrome%3A+epidemiology+and+etiology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Semin Pediatr Surg. 19 (1), 3-9 (2010).</li>
<li>Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+short+bowel+syndrome%3A+redefining+predictors+of+success%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Pediatric short bowel syndrome: redefining predictors of success.</a> Ann Surg. 242 (3), discussion 409-412 403-409 (2005).</li>
<li>Goulet, O., Pigneur, B., Charbit-Henrion, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+enteropathies+involving+defects+in+enterocyte+structure+or+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Congenital enteropathies involving defects in enterocyte structure or differentiation.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 56-57, 101784(2022).</li>
<li>Koglmeier, J., Lindley, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+diarrhoeas+and+enteropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Congenital diarrhoeas and enteropathies.</a> Nutrients. 16 (17), 2971(2024).</li>
<li>Duggan, C. P., Jaksic, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+intestinal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pediatric intestinal failure.</a> N Engl J Med. 377 (7), 666-675 (2017).</li>
<li>Spence, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+intestinal+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro.</a> Nature. 470 (7332), 105-109 (2011).</li>
<li>McCracken, K. W., Howell, J. C., Wells, J. M., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+human+intestinal+tissue+from+pluripotent+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating human intestinal tissue from pluripotent stem cells in vitro.</a> Nat Protoc. 6 (12), 1920-1928 (2011).</li>
<li>Bajpai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHD7+cooperates+with+PBAF+to+control+multipotent+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">CHD7 cooperates with PBAF to control multipotent neural crest formation.</a> Nature. 463 (7283), 958-962 (2010).</li>
<li>Workman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+human+pluripotent-stem-cell-derived+intestinal+tissues+with+a+functional+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Engineered human pluripotent-stem-cell-derived intestinal tissues with a functional enteric nervous system.</a> Nat Med. 23 (1), 49-59 (2017).</li>
<li>Schlieve, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cell+implantation+restores+enteric+nervous+system+function+and+alters+the+gastrointestinal+transcriptome+in+human+tissue-engineered+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Neural crest cell implantation restores enteric nervous system function and alters the gastrointestinal transcriptome in human tissue-engineered small intestine.</a> Stem Cell Rep. 9 (3), 883-896 (2017).</li>
<li>Fattahi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+human+ENS+lineages+for+cell+therapy+and+drug+discovery+in+Hirschsprung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Deriving human ENS lineages for cell therapy and drug discovery in Hirschsprung disease.</a> Nature. 531 (7592), 105-109 (2016).</li>
<li>Barber, K., Studer, L., Fattahi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+enteric+neuron+lineages+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Derivation of enteric neuron lineages from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 14 (4), 1261-1279 (2019).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome-wide+analysis+reveals+hallmarks+of+human+intestine+development+and+maturation+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptome-wide analysis reveals hallmarks of human intestine development and maturation in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Rep. 4 (6), 1140-1155 (2015).</li>
<li>Boyle, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+transplantation+of+human+intestinal+organoids+enhances+select+tight+junction+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo transplantation of human intestinal organoids enhances select tight junction gene expression.</a> J Surg Res. 259, 500-508 (2021).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue-engineered+small+intestine+using+embryonic+stem+cell-derived+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue-engineered small intestine using embryonic stem cell-derived human intestinal organoids.</a> Biol Open. 4 (11), 1462-1472 (2015).</li>
<li>Mahe, M. M., Brown, N. E., Poling, H. M., Helmrath, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+model+of+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo model of small intestine.</a> Methods Mol Biol. 1597, 229-245 (2017).</li>
<li>McNeill, E. P., Gupta, V. S., Sequeira, D. J., Shroyer, N. F., Speer, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+murine+host+sex+as+a+biological+variable+in+transplanted+human+intestinal+organoid+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of murine host sex as a biological variable in transplanted human intestinal organoid development.</a> Dig Dis Sci. 67 (12), 5511-5521 (2022).</li>
<li>Singh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+transplantation+sites+for+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of transplantation sites for human intestinal organoids.</a> PLoS One. 15 (8), e0237885(2020).</li>
<li>Watson, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+human+small+intestine+using+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of human small intestine using pluripotent stem cells.</a> Nat Med. 20 (11), 1310-1314 (2014).</li>
<li>Cortez, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+human+intestinal+organoids+into+the+mouse+mesentery%3A+A+more+physiologic+and+anatomic+engraftment+site%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of human intestinal organoids into the mouse mesentery: A more physiologic and anatomic engraftment site.</a> Surgery. 164 (4), 643-650 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100x Solución de aminoácidos no esenciales (NEAA)</td><td>ThermoFischer Scientific 11140050</td><td></td><td></td></tr><tr><td>tubos cónicos de 15 ml</td><td>Thermo Scientific</td><td>12565269</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07920</td><td>"reactivo de desprendimiento de células enzimáticas"</td></tr><tr><td>Suplemento B-27 (50x), sin vitamina A</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12587010</td><td>para ENCC</td></tr><tr><td>B-27 Suplemento (50x), sin suero</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>para hemacitómetro HIO</td></tr><tr><td>Bright-Line</td><td>Hausser</td><td>Scientific 3120</td><td></td></tr><tr><td>Microplacas de fijación ultrabaja Corning Costar</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-601</td><td></td></tr><tr><td>Corning Placa de fondo plano de 24 pocillos, tratada con TC</td><td>VWR</td><td>29442-044</td><td></td></tr><tr><td>Placa de fondo plano Corning 3516 6 pocillos</td><td>VWR</td><td>29442-042</td><td></td></tr><tr><td>Essential 6 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A1516401</td><td></td></tr><tr><td>Essential 8 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A2858501</td><td>Medios alternativos de células madre, utilizados para placas ENCC.</td></tr><tr><td>Pinza de punta fina</td><td>Dumont</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>Forma Steri-Cycle i160</td><td>Thermo Scientific</td><td>50145522</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Advanced DMEM/F12</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Gibco HEPES 1 M</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Medio Neurobasal</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>Glutagro, 200 mM, 100x</td><td>Corning</td><td>25-015-CI</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>ThermoFischer Scientific 35050061</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H9 humano ESC</td><td>Wicell Banco Internacional de Células Madre</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>HyCloneTM FBS Defined</td><td>VWR</td><td>16777-002</td><td></td></tr><tr><td>LabGard Cabina de seguridad biológica</td><td>Nuaire</td><td>Nu-430-400</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel GFR Matriz de membrana basal, sin fenol Corning</td><td></td><td>356231</td><td>"Clear 3D Matrix de membrana basal Clear"</td></tr><tr><td>Matrigel hESC-Qualified Matrix, LDEV-Free</td><td>Corning</td><td>354277</td><td>"Matriz de membrana basal 3D"</td></tr><tr><td>Micropipetas</td><td>Eppendorf (100-1000, 20-200, 10-100, 2-20, 0.5-10, 0.1-2.5 uL)</td><td>2231300008</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR 1</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>85850</td><td>"medios de células madre" El número de catálogo incluye el suplemento 5x, que se agregará a granel por adelantado.&nbsp;</td></tr><tr><td>Suplemento N-2 (100x)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>para HIO</td></tr><tr><td>Suplemento N-2, CTS (Sistemas de Terapia Celular)</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1370701</td><td>para ENCC. Formulación ligeramente diferente.</td></tr><tr><td>Microscopio Nikon DS-Fi2 TS-100</td><td>Nikon</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>Medios acondicionados por Noggin</td> Centro <td>Médico de Texas Centro de Enfermedades Digestivas GEMS Core, Enteroide/Organoide Sub-core</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (10,000 U/mL)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Sistemas de guía</td> celular de<td>activina A humana recombinante</td><td>GFH6-100</td><td></td></tr><tr><td>BMP-4 humano recombinante</td><td>Fisher Scientific</td><td>314BP010</td><td></td></tr><tr><td>Proteína EGF humana recombinante, CF</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>236-EG-200</td><td></td></tr><tr><td>FGF humano recombinante básico/FGF2 (146 aa) Proteína</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>233-FB-010</td><td></td></tr><tr><td>FGF-4 humano recombinante</td><td>Peprotech</td><td>100-31</td><td></td></tr><tr><td>ReLeSR</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>5872</td><td>"Reactivo de disociación de células madre"</td></tr><tr><td>Ácido retinoico</td><td>SIGMA</td><td>R2625-50MG</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microfuga sin ARNasa, 2 mL</td><td>Medio Thermo Scientific</td><td>AM12425</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medios</td> acondicionados <td>ThermoFischer Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin</td> Centro <td>Médico de Texas Centro de Enfermedades Digestivas GEMS Core, Subnúcleo enteroide/organoide</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>SB 431542, Tocris Bioscience</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-141-0</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Sorvall ST 16R</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standard Puntas de pipeta de orificio ancho</td><td>VWR</td><td>89049-166</td><td></td></tr><tr><td>Stemolecule Chir99021 en solución</td><td>Stemgent</td><td>04-0004-02</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta con filtro estéril</td><td>VWR (1000uL, 200uL, 10uL)</td><td>76322-154, 76322-150, 89174-520</td><td></td></tr><tr><td>Vitronectina XF</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>7180</td><td>Matriz de membrana basal 3D alternativa, utilizada para placas ENCC.</td></tr></tbody></table>

inervación de organoides intestinales humanos

Innervation of Human Intestinal Organoids

El SNE regula las funciones esenciales del intestino delgado maduro, incluida la peristalsis, la absorción de nutrientes, el transporte de líquidos y el mantenimiento de la barrera epitelial. Por lo tanto, el objetivo de inervar las IO es proporcionar a estas construcciones los elementos necesarios para desarrollar una funcionalidad más madura y de mayor nivel. Con este fin, nuestro laboratorio estudia específicamente el desarrollo del ENS dentro de las HIO, así como los resultados funcionales en diferentes etapas.
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Inervación de organoides intestinales humanos

The complexity of intestinal cytoarchitecture and function poses significant challenges for the creation of the bioengineered small intestine. Techniques ...

Nuestra investigación se centra en la generación de intestinos modificados mediante tejidos como solución para el síndrome del intestino corto. Nuestro laboratorio se centra en optimizar la integración de un sistema nervioso entérico y optimizar la organización espacial, la diversidad celular y la función. Esperamos que algún día podamos crear una solución que cambie la vida de los niños que sufren de insuficiencia intestinal mediante la creación de un intestino de bioingeniería.La inervación de los organoides intestinales humanos requiere imitar el desarrollo intestinal humano, y esto puede ser un desafío. El desarrollo del sistema nervioso entérico requiere tanto de señalización bioquímica como de fuerzas biomecánicas. Los estudios futuros de nuestro laboratorio se centran en optimizar el desarrollo del sistema nervioso entérico dentro de los organoides intestinales humanos.Estamos estudiando la organización espacial, así como la diversidad celular, y recientemente hemos estado utilizando una novedosa técnica de imagen 3D desarrollada por el Dr. Herath que puede caracterizar y cuantificar de manera robusta el SNE dentro de nuestros organoides intestinales. Esto nos ayudará a refinar nuestro modelo y recapitular el desarrollo y la función intestinal humana. Primero, tome la placa de células de cresta neural entérica cultivadas del día 15 a 21 o esferoides ENCC y retire con cuidado el medio del pocillo.Agregue un mililitro de un reactivo de desprendimiento de células enzimáticas tibias al pocillo e incube a 37 grados centígrados durante 30 minutos. A continuación, golpee el lado de la placa para facilitar la disociación del esferoide. Con una micropipeta P1000 con punta de boca ancha, valore la mezcla pipeteando suavemente hacia arriba y hacia abajo hasta que las células sean homogéneas.Transfiera la suspensión ENCC a un tubo cónico de 15 mililitros. Lave el pocillo con un mililitro de medio celular de cresta neural tibio para recolectar las células restantes, luego agréguelo al tubo cónico. Ahora centrifuga la suspensión celular a 300 G durante un minuto.A continuación, aspire el sobrenadante con una punta de pipeta estéril. A continuación, con una punta de pipeta de boca ancha, vuelva a suspender el pellet de célula en un mililitro de medio celular de cresta neural caliente. Recoja los esferoides cultivados del intestino medio posterior de todos los pocillos de una placa organoide intestinal humana utilizando una punta de pipeta de boca ancha y transfiérelos a un tubo cónico de 15 mililitros.Agregue el volumen calculado de la suspensión de ENCC en el tubo cónico que contiene los esferoides del intestino medio posterior. Con una punta de pipeta de boca ancha, tritite suavemente la mezcla para mezclar uniformemente los esferoides y los ENCC. Centrifugar la suspensión de celda combinada a 300 G durante un minuto.Aspire cuidadosamente el sobrenadante con una punta de pipeta estéril. A continuación, vuelva a suspender el pellet celular resultante en una matriz de membrana basal reducida con factor de crecimiento frío y libre de fenol. A continuación, pipetee la gota de 30 microlitros de los esferoides del intestino medio posterior resuspendidos y los ENCC en la matriz transparente de la membrana basal hasta el centro de cada pocillo seco.Una vez que todas las gotas estén plateadas, cubra la placa, inviértala y colóquela en una incubadora a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono durante 30 minutos. En el día cero, una vez que la matriz clara de la membrana basal se haya polimerizado, cubra cada gota con 500 microlitros de medios HIO cálidos del día cero a tres. En el tercer día, aspire cuidadosamente el medio HIO del día cero al tres desde el costado de cada pocillo sin alterar la gota clara de la matriz de la membrana basal.Reemplácelo con 500 microlitros de medios HIO cálidos del día tres a 14 y devuelva la placa a la incubadora. El día 14, examine cada pocillo bajo un microscopio para evaluar el número de estructuras HIO+ENS en desarrollo en cada gota de matriz de membrana basal 3D transparente. Agregue 30 microlitros de matriz transparente de membrana basal a tubos de microcentrífuga de dos mililitros y manténgalos en hielo.Bajo una campana de flujo laminar, utilice pinzas finas para retirar con cuidado la gota transparente de la matriz de la membrana basal 3D que contiene el HIO+ENS en suspensión. Separe suavemente las estructuras individuales de HIO+ENS con las pinzas. Con pinzas finas o una punta de pipeta de boca ancha, coloque cada estructura HIO+ENS aislada en los tubos de microcentrífuga que contienen 30 microlitros de matriz de membrana basal transparente.A continuación, pipetee una gota de 30 microlitros del HIO+ENS resuspendido en una matriz transparente de membrana basal en el centro de cada pocillo seco. Una vez que las gotas se hayan polimerizado, agregue 500 microlitros de medios cálidos y frescos del tercer día a 14 HIO+ENS a cada pocillo e incube la placa durante la noche. El día 15, aspire cuidadosamente los medios del día tres a 14 desde el costado de cada pocillo sin alterar la gota polimerizada.Reemplace los medios con 500 microlitros de medios HIO+ENS de día cálido de 15 a 28 días. El cocultivo HIO-ENS mostró un crecimiento significativo con el desarrollo de estructuras mesenquimales, formando proyecciones delgadas y nebulosas, creando un borde en forma de halo alrededor de las involuciones epiteliales hacia el día 30. Las ENCCs migraron hacia las HIOs, se integraron dentro del mesénquima, y sobrevivieron in vitro, como lo demuestra la fluorescencia de GFP dentro de las HIOs, confirmando señales adecuadas de supervivencia y diferenciación del mesénquima.Los cocultivos HIO+ENS trasplantados expresaron marcadores neuronales, incluido HuCD, y marcadores gliales como S100 beta después del crecimiento in vivo, lo que confirma la diferenciación en neuronas y glía.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Este video demuestra el método de creación de organoides nerviosos motores cultivando primero células madre pluripotentes inducidas humanas en un medio especial para formar esferoides, luego diferenciándolas en neuronas motoras usando inhibidores específicos, y finalmente cultivándolas en un chip microfluídico para extender axones y formar organoides nerviosos motores.

Desarrollo de organoides nerviosos motores derivados de iPSC humanos utilizando un chip microfluídico

Este protocolo permite la diferenciación de células pluripotentes humanas en organoides intestinales. El protocolo imita el desarrollo humano normal mediante la diferenciación de células en una población de endodermo definitivo, endodermo del intestino posterior y luego epitelio intestinal. Esto hace que el protocolo sea adecuado para estudiar tanto el desarrollo intestinal como las aplicaciones de modelización de enfermedades.

Generación de organoides intestinales derivados de hiPSC para aplicaciones de modelización del desarrollo y de enfermedades

Aquí presentamos dos protocolos que permiten el modelado de interacciones intestinales apical-específicas. las monocapas intestinales Organoide-derivadas y las culturas de la interfaz aire-líquido (ALI) facilitan la generación de epitelios bien diferenciados accesibles de lados luminales y basolaterales, mientras que los organoids intestinales polaridad-invertidos exponen su lado apical y son susceptibles a los análisis de alto rendimiento.

Métodos de cultivo para estudiar las interacciones apicales específicas utilizando modelos organoides intestinales

Aquí, se describen métodos detallados para generar, mantener y caracterizar organoides de intestino delgado y colon derivados de células madre pluripotentes humanas. Estos métodos están diseñados para mejorar la reproducibilidad, ampliar la escalabilidad y disminuir el tiempo de trabajo necesario para el recubrimiento y el paso de organoides.

Generación, mantenimiento y caracterización de organoides intestinales y colónicos derivados de células madre pluripotentes humanas

Este protocolo ofrece instrucciones detalladas para establecer organoides murinos del intestino delgado, aislar las células linfoides innatas tipo 1 de la lámina propia del intestino delgado murino y establecer cocultivos tridimensionales (3D) entre ambos tipos de células para estudiar las interacciones bidireccionales entre las células epiteliales intestinales y las células linfoides innatas tipo 1.

Cocultivo de organoides epiteliales del intestino delgado murino con células linfoides innatas

Los organoides intestinales derivados de biopsias y las tecnologías de organ-on-a-chips se combinan en una plataforma microfisiológica para recapitular la funcionalidad intestinal específica de la región.

Combinación de organoides humanos y tecnología organ-on-a-chip para modelar la funcionalidad específica de la región intestinal

Aquí, presentamos un protocolo para generar organoides intestinales de ratas y usarlos en varias aplicaciones posteriores. Las ratas suelen ser un modelo preclínico preferido, y el robusto sistema de organoides intestinales satisface la necesidad de un sistema in vitro para acompañar los estudios in vivo .

Generación y manipulación de organoides intestinales de rata

El protocolo combina la tecnología de organoides intestinales humanos con el análisis transcriptómico de células individuales para proporcionar información significativa sobre la biología intestinal previamente inexplorada.

Uso de organoides intestinales humanos para comprender el epitelio del intestino delgado a nivel transcripcional de una sola célula

Este estudio describe un protocolo para generar monocapas 2D de organoides porcinos derivados del intestino delgado y grueso. El crecimiento de estas monocapas se caracteriza por el aumento de los valores de TEER, lo que indica una sólida integridad epitelial. Además, estas monocapas exhiben respuestas secretoras fisiológicas en experimentos en cámara de Ussing después de la aplicación de forskolina.

Organoides intestinales porcinos bidimensionales que reflejan las propiedades fisiológicas del intestino nativo

El modelado del desarrollo del cerebro humano se ha visto obstaculizado debido a la complejidad sin precedentes del tejido epitelial neural. Aquí, se describe un método para la generación robusta de organoides cerebrales para delinear eventos tempranos del desarrollo del cerebro humano y para modelar la microcefalia in vitro.

Generación de derivados de IPSC organoides cerebro humano para modelar los trastornos del neurodesarrollo temprano

Aprende a generar organoides intestinales humanos con sistema nervioso entérico para ingeniería de tejidos. Este método optimiza la organización celular y ofrece soluciones para el síndrome de intestino corto en pediatría.

Inervación de organoides intestinales humanos

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