Metodología mejorada para el estudio de la osteogénesis postnatal mediante osificación intramembranosa en un modelo de lesión de médula ósea murina

Nuestra investigación se centra en la comprensión de los mecanismos de reparación ósea utilizando el modelo de lesión de la médula ósea. Nuestro objetivo es descubrir cómo se regula la osificación intramembranosa durante la cicatrización y explorar enfoques terapéuticos que puedan aprovecharse para mejorar la regeneración ósea. Estudios recientes en el campo establecieron marcadores de superficie que definen las células madre y progenitoras esqueléticas, revelando sus roles críticos en el desarrollo y la reparación ósea.

Nuestro protocolo permite investigar las contribuciones de estas células durante la osificación intramembranosa, lo que nos permite explorar su regulación y potencial para la diana terapéutica durante la reparación ósea. Nuestro protocolo aborda la brecha en la comprensión de la reparación ósea únicamente a través de la osificación intramembranosa en el contexto postnatal, utilizando un modelo que es clínicamente relevante. A diferencia de otros modelos de lesión utilizados para estudiar la osificación intramembranosa, nuestro protocolo proporciona un entorno más controlado y respuestas reproducibles a la lesión, específicamente en los huesos largos.

En el futuro, nuestro laboratorio utilizará el modelo de lesión de la médula ósea junto con enfoques farmacológicos localizados para modular transitoriamente los reguladores epigenéticos de la osteogénesis. Nuestro objetivo es mejorar la regeneración ósea y la cicatrización a través de nuevos enfoques terapéuticos. Para empezar, prepare y desinfecte todas las superficies de trabajo con un limpiador desinfectante de grado clínico.

Cubra la plataforma calefactora con una almohadilla quirúrgica estéril. Reúna y organice todos los instrumentos estériles, así como los reactivos. Ahora, pesa el ratón con una balanza de precisión.

Sobre la base de la formulación disponible de buprenorfina, calcular el volumen necesario para la administración de analgésicos. Después de anestesiar al ratón, retírelo con cuidado de la cámara de inducción. Coloque al animal en la almohadilla quirúrgica estéril en posición supina y coloque el cono de la nariz sobre la cabeza del ratón.

Retire brevemente el ratón del cono de la nariz e inyecte la dosis calculada de buprenorfina analgésico de liberación prolongada por vía subcutánea. A continuación, vuelva a colocar con cuidado el ratón en la unidad de anestesia del cono nasal. Llene una jeringa de tres mililitros equipada con una aguja de calibre 26 con solución salina estéril y colóquela a un lado.

Retire el pelaje de la extremidad trasera donde se realizará el procedimiento con maquinillas eléctricas o que funcionen con baterías. Usando aplicadores estériles con punta de algodón, aplique un exfoliante con povidona yodada al 10% en el sitio quirúrgico, seguido de la aplicación de un exfoliante con alcohol isopropílico al 70% y deje que el área se seque completamente. Ahora coloque el ratón boca arriba y flexione la rodilla de la pierna operativa.

Sostenga la pierna con la mano no dominante de modo que la rodilla esté doblada sobre el dedo medio. El segundo dedo descansa sobre el fémur y el pulgar sobre la tibia. Con un bisturí, haga una incisión horizontal pequeña y poco profunda justo debajo de la rótula.

Localice el espacio articular con la aguja colocada horizontalmente a través de la rodilla doblada y palpa el espacio entre el fémur y la tibia. Utilice esta guía anatómica para perforar manualmente el fémur distal desde la rodilla hacia el lado proximal con una aguja de calibre 25. Inserte la aguja a través o alrededor de la rótula.

Confirme la colocación correcta de la aguja en la cavidad medular con una radiografía, asegurándose de que esté lo más cerca posible del centro. Después de retirar la aguja de calibre 25, inserte inmediatamente una aguja de calibre 26 en el mismo orificio dentro de la cavidad de la médula. Escaria los lados de la cavidad medular con movimientos circulares al menos cinco veces hasta que se sienta suave.

A continuación, retire la aguja de calibre 26 y enjuague la cavidad con 1,5 a 2 mililitros de solución salina hasta que el reflujo salga limpio. Deseche de manera segura la jeringa y la aguja en un recipiente designado. A continuación, cierre la herida cutánea con una sutura adhesiva tópica.

Inmediatamente después de la cirugía, administre la dosis restante de buprenorfina de liberación prolongada según lo calculado anteriormente. Vigile al animal en la almohadilla térmica para detectar signos de respiración normal y sin obstrucciones.