Name: Edición del genoma del mosquito Aedes aegypti de la fiebre amarilla mediante CRISPR-Cas9 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Aprende a editar el genoma de Aedes aegypti mediante CRISPR-Cas9 para crear líneas knockout y knockin. Este protocolo permite el control espaciotemporal de la expresión génica con marcadores fluorescentes.

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<ol><li>Anzalone, A. V., Koblan, L. W., Liu, D. R. Genome editing with CRISPR-Cas nucleases, base editors, transposases and prime editors. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAnzalone%2C+AV+%22Nat+Biotechnol%22">Nat Biotechnol</a>. 38 (7), 824-844 (2020).</li>
<li>Garneau, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR%2FCas+bacterial+immune+system+cleaves+bacteriophage+and+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA.</a> Nature. 468 (7320), 67-71 (2010).</li>
<li>Jinek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+programmable+dual-RNA-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li>
<li>Shen, H., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+double-strand+break+repairs+and+their+application+in+plant+DNA+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">DNA double-strand break repairs and their application in plant DNA integration.</a> Genes (Basel). 13 (2), 322(2022).</li>
<li>Vinauger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+host+learning+in+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of host learning in Aedes aegypti mosquitoes.</a> Curr Biol. 28 (3), 333-344.e8 (2018).</li>
<li>Li, M., Bui, M., Yang, T., Bowman, C. S., White, B. J., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+Cas9+expression+yields+highly+efficient+genome+engineering+in+a+major+worldwide+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Germline Cas9 expression yields highly efficient genome engineering in a major worldwide disease vector.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (49), E10540-E10549 (2017).</li>
<li>Chaverra-Rodriguez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+CRISPR-Cas9+ribonucleoprotein+into+arthropod+ovaries+for+heritable+germline+gene+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of CRISPR-Cas9 ribonucleoprotein into arthropod ovaries for heritable germline gene editing.</a> Nat Commun. 9 (1), 3008(2018).</li>
<li>Rouyar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+line+for+characterizing+GABA-receptor+expression+to+study+the+neural+basis+of+olfaction+in+the+yellow-fever+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic line for characterizing GABA-receptor expression to study the neural basis of olfaction in the yellow-fever mosquito.</a> Front Physiol. 15, 1381164(2024).</li>
<li>Ang, J. X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+homology-based+DNA+repair+in+mosquitoes%3A+Impact+of+sequence+heterology+and+donor+template+source%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Considerations for homology-based DNA repair in mosquitoes: Impact of sequence heterology and donor template source.</a> PLoS Genet. 18 (2), e1010060(2022).</li>
<li>Zhang, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+precise+knockin+with+a+double+cut+HDR+donor+after+CRISPR%2FCas9-mediated+double-stranded+DNA+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient precise knockin with a double cut HDR donor after CRISPR/Cas9-mediated double-stranded DNA cleavage.</a> Genome Biol. 18 (1), 35(2017).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+advances+in+mosquito+olfaction+neurogenetics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Technological advances in mosquito olfaction neurogenetics.</a> Trends Genet. 39 (2), 154-166 (2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+sex+determination+to+suppress+mosquito+populations%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Targeting sex determination to suppress mosquito populations.</a> eLife. 12, RP90199(2024).</li>
<li>Zhan, Y., Alonso San Alberto, D., Rusch, C., Riffell, J. A., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+vision-guided+target+attraction+in+Aedes+aegypti+using+CRISPR%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biol%22%5BJournal%5D)">Elimination of vision-guided target attraction in Aedes aegypti using CRISPR.</a> Current Biol. 31 (18), 4180-4187.e6 (2021).</li>
<li>Greppi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+heat+seeking+is+driven+by+an+ancestral+cooling+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mosquito heat seeking is driven by an ancestral cooling receptor.</a> Science. 367 (6478), 681-684 (2020).</li>
<li>Potter, C. J., Tasic, B., Russler, E. V., Liang, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Q+system%3A+a+repressible+binary+system+for+transgene+expression%2C+lineage+tracing%2C+and+mosaic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Q system: a repressible binary system for transgene expression, lineage tracing, and mosaic analysis.</a> Cell. 141 (3), 536-548 (2010).</li>
<li>Riabinina, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+and+expanded+Q-system+reagents+for+genetic+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved and expanded Q-system reagents for genetic manipulations.</a> Nat Methods. 12 (3), 5 p following 222 219-222 (2015).</li>
<li>Labun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHOPCHOP+v3%3A+expanding+the+CRISPR+web+toolbox+beyond+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CHOPCHOP v3: expanding the CRISPR web toolbox beyond genome editing.</a> Nucleic Acids Res. 47 (W1), W171-W174 (2019).</li>
<li>Concordet, J. -P., Haeussler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPOR%3A+intuitive+guide+selection+for+CRISPR%2FCas9+genome+editing+experiments+and+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CRISPOR: intuitive guide selection for CRISPR/Cas9 genome editing experiments and screens.</a> Nucleic Acids Res. 46 (W1), W242-W245 (2018).</li>
<li>Williams, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+fitness+costs+in+transgenic+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantifying fitness costs in transgenic Aedes aegypti mosquitoes.</a> J Vis Exp. , e65136(2023).</li>
<li>Bassett, A. R., Tibbit, C., Ponting, C. P., Liu, J. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+targeted+mutagenesis+of+Drosophila+with+the+CRISPR%2FCas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Highly efficient targeted mutagenesis of Drosophila with the CRISPR/Cas9 system.</a> Cell Rep. 4 (1), 220-228 (2013).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Zhu, K. Y., Ramalho-Ortigao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+and+paratransgenesis+to+control+insect-borne+diseases%3A+current+status+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol+Int%22%5BJournal%5D)">Transgenesis and paratransgenesis to control insect-borne diseases: current status and future challenges.</a> Parasitol Int. 59 (1), 1-8 (2010).</li>
<li>Christian, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+DNA+double-strand+breaks+with+TAL+effector+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases.</a> Genetics. 186 (2), 757-761 (2010).</li>
<li>Kim, Y. G., Cha, J., Chandrasegaran, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+restriction+enzymes%3A+zinc+finger+fusions+to+Fok+I+cleavage+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hybrid restriction enzymes: zinc finger fusions to Fok I cleavage domain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93 (3), 1156-1160 (1996).</li>
<li>DeGennaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((orco+mutant+mosquitoes+lose+strong+preference+for+humans+and+are+not+repelled+by+volatile+DEET%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">orco mutant mosquitoes lose strong preference for humans and are not repelled by volatile DEET.</a> Nature. 498 (7455), 487-491 (2013).</li>
<li>McMeniman, C. J., Corfas, R. A., Matthews, B. J., Ritchie, S. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+integration+of+carbon+dioxide+and+other+sensory+cues+drives+mosquito+attraction+to+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal integration of carbon dioxide and other sensory cues drives mosquito attraction to humans.</a> Cell. 156 (5), 1060-1071 (2014).</li>
<li>Lobo, N. F., Clayton, J. R., Fraser, M. J., Kafatos, F. C., Collins, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+efficiency+germ-line+transformation+of+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High efficiency germ-line transformation of mosquitoes.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1312-1317 (2006).</li>
<li>Kistler, K. E., Vosshall, L. B., Matthews, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+engineering+with+CRISPR-Cas9+in+the+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Genome engineering with CRISPR-Cas9 in the mosquito Aedes aegypti.</a> Cell Rep. 11 (1), 51-60 (2015).</li>
<li>Handler, A. M., Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2nd+Transformation+of+the+Caribbean+fruit+fly%2C+Anastrephasuspensa%2C+with+a+piggyBac+vector+marked+with+polyubiquitin-regulated+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">2nd Transformation of the Caribbean fruit fly, Anastrephasuspensa, with a piggyBac vector marked with polyubiquitin-regulated GFP.</a> Insect Biochem Mol Biol. 31 (2), 199-205 (2001).</li>
<li>Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarrell%2C+RA+%222nd+Mosquito+embryo+microinjection+under+halocarbon+oil+or+in+aqueous+solution%22">2nd Mosquito embryo microinjection under halocarbon oil or in aqueous solution</a>. 2024 (7), Cold Spring Harb Protoc. (2024).</li>
<li>Sun, R., Raban, R., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+mutant+strains+with+transgenic+Cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating mutant strains with transgenic Cas9.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 671-678 (2023).</li>
<li>Giraldo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+neurogenetic+toolkit+to+decode+olfaction+in+the+African+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">An expanded neurogenetic toolkit to decode olfaction in the African malaria mosquito Anopheles gambiae.</a> Cell Rep Methods. 4 (2), 100714(2024).</li>
<li>Liu, G., Lin, Q., Jin, S., Gao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR-Cas+toolbox+and+gene+editing+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">The CRISPR-Cas toolbox and gene editing technologies.</a> Mol Cell. 82 (2), 333-347 (2022).</li>
<li>Chu, V. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+efficiency+of+homology-directed+repair+for+CRISPR-Cas9-induced+precise+gene+editing+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells.</a> Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).</li>
<li>Laursen, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humidity+sensors+that+alert+mosquitoes+to+nearby+hosts+and+egg-laying+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Humidity sensors that alert mosquitoes to nearby hosts and egg-laying sites.</a> Neuron. 111 (6), 874-887.e8 (2023).</li>
<li>Weng, S. -C., Antoshechkin, I., Marois, E., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+sex+separation+by+exploiting+differential+alternative+splicing+of+a+dominant+marker+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Efficient sex separation by exploiting differential alternative splicing of a dominant marker in Aedes aegypti.</a> PLoS Genet. 19 (11), e1011065(2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+confinable+gene+drive+system+in+the+human+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Development of a confinable gene drive system in the human disease vector.</a> eLife. 9, e51701(2020).</li>
<li>Dalla Benetta, E., et al. Engineered Antiviral Sensor Targets Infected Mosquitoes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDalla+Benetta%2C+E+%22The+CRISPR+journal%22">The CRISPR journal</a>. 6 (6), 543-556 (2023).</li>
<li>Li, H. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-Type+lectins+link+immunological+and+reproductive+processes+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">C-Type lectins link immunological and reproductive processes in Aedes aegypti.</a> iScience. 23 (9), 101486(2020).</li>
<li>van Oers, M. M., Vlak, J. M., Voorma, H. O., Thomas, A. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+3%27+untranslated+region+of+baculovirus+p10+mRNA+in+high-level+expression+of+foreign+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Role of the 3' untranslated region of baculovirus p10 mRNA in high-level expression of foreign genes.</a> J Gen Virol. 80 (Pt 8), 2253-2262 (1999).</li>
<li>Salem, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+SV40+polyA+on+gene+expression+of+baculovirus+expression+vector+systems%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The influence of SV40 polyA on gene expression of baculovirus expression vector systems.</a> PloS One. 10 (12), e0145019(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Tampón de reacción Cas9</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CB01</td><td></td></tr><tr><td>Software de Benchling</td><td>Benchling</td><td>N/A</td><td>www.benchling.com</td></tr><tr><td>Tampón de dilución Cas9</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>Proteína CB03</td><td></td></tr><tr><td>Cas9</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CP01-50</td><td></td></tr><tr><td>DH5&alpha; E. coli Células competentes</td><td>New England Biolabs</td><td>C2987</td><td></td></tr><tr><td>Cinta adhesiva de doble cara</td><td>Scotch Permanent</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de Drosophila</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>32-109</td><td></td></tr><tr><td>Papeles de filtro</td><td>GE Healthcare Ciencias de la vida&nbsp;</td><td>1450-042</td><td></td></tr><tr><td>Alimentos para peces</td><td>Tetra</td><td>B00025Z6YI</td><td>copos de peces dorados&nbsp;</td></tr><tr><td>Flugs</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td>Microscopio fluorescente <td>AS273</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>&nbsp; Fragmento de gen M165 FC</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Tecnologías de ADN integradas N</td><td>/ A</td><td></td></tr><tr><td>gRNA</td><td>Synthego</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de halocarbono 700&nbsp;</td><td>Microscopio de inyección Sigma-Aldrich</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>DM2000</td><td></td></tr><tr><td>JM109 &nbsp;Células competentes de E. coli&nbsp;</td><td>Microinyector Zymo Research</td><td>T3005</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td></td><td>FemtoJet 4x&nbsp;</td></tr><tr><td>Consejos de microcargador para llenar femtotips</td><td>Eppendorf</td><td>E5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>TransferMan 4r&nbsp;</td></tr><tr><td>Extractores de micropipetas</td><td>Instrumento Sutter</td><td>Cubierta de vidrio para microscopio P-2000</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fisherbrand&nbsp;</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio</td><td>Eisco</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>Sangre de ratón (ratones vivos utilizados para la alimentación)</td><td>Universidad de California</td><td>IACUC, Protocolo de uso animal #S17187</td><td>Utilizado para la alimentación con sangre de mosquitos; los detalles cumplen con los protocolos de ética animal</td></tr><tr><td>NEB Q5 ADN polimerasa de alta fidelidad&nbsp;</td>Kit de purificación de PCR <td>M0491S</td><td></td>de <td>New England Biolabs</td></tr><tr><td></td><td>Qiagen</td><td>28004</td><td></td></tr><tr><td>Kit de minipreparación de plásmidos&nbsp;</td><td>Filamento de cuarzo Zymo Research</td><td>D4036</td><td></td></tr><tr><td></td>Kit de limpieza de transcripción <td>QF100-70-10</td><td></td>de <td>Sutter</td></tr><tr><td>Instruments</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM1908</td><td></td></tr><tr><td>Agua ultrapura</td><td>Tecnologías de la vida</td><td>10977-023</td><td></td></tr></tbody></table>

edición del genoma del mosquito aedes aegypti de la fiebre amarilla mediante crispr-cas9

Genome Editing in the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti using CRISPR-Cas9

Diseño y validación de la segmentación génica mediada por ARNg para la recombinación de homología HDR Para garantizar que el gen deseado se dirija con precisión, recomendamos seleccionar un par de ARNg y colocar los brazos de homología 5' y 3' cerca del sitio de corte para la recombinación homóloga mediada por HDR (Figura 1A). Por ejemplo, diseñamos dos ARNg para dirigirse a ambos lados del codón de inicio del gen de interés y utilizamos e...

Edición del genoma del mosquito Aedes aegypti de la fiebre amarilla mediante CRISPR-Cas9

The emergence of the clustered, regularly interspersed, short palindromic repeats (CRISPR)-Cas9 technology has revolutionized the genetic engineering ...

genome-editing-yellow-fever-mosquito-aedes-aegypti-using-crispr

Research

Investigación

JoVE Journal

Genetics

Genética

En este video, demostramos la entrega de una construcción de impulsor genético en el embrión del mosquito Anopheles gambiae a través de la técnica de microinyección de embriones. Este procedimiento permite la integración de la construcción de ADN entregada, a través de la recombinación homóloga, en las células de la línea germinal para generar una población de mosquitos transformada.

Microinyección de embriones de mosquitos: una técnica para introducir ADN exógeno en la yema del embrión de Anopheles gambiae para generar mutaciones de la línea germinal

Se describe un método para la generación de MLG-base condicionales mutantes precipitación usando CRISPR/Cas9 edición del genoma del falciparum del Plasmodium .

CRISPR/Cas9 Gene edición para hacer condicionales mutantes de humano parásito de la Malaria por p. falciparum

Este protocolo describe procedimientos de microinyección para embriones de Culex quinquefasciatus que están optimizados para trabajar con herramientas de edición de genes CRISPR/Cas9. Esta técnica puede generar de manera eficiente mutaciones de la línea germinal heredables y específicas del sitio que se pueden usar para construir tecnologías genéticas en este vector de enfermedad poco estudiado.

Técnicas de microinyección embrionaria para una mutagénesis eficiente site-specific en Culex quinquefasciatus

CRISPR/Cas9 se utiliza cada vez más para caracterizar la función génica en organismos no modelo. Este protocolo describe cómo generar líneas eliminatorias de Culex pipiens,desde la preparación de mezclas de inyección, hasta la obtención e inyección de embriones de mosquitos, así como la forma de criar, cruzar y detectar mosquitos inyectados y su progenie para detectar mutaciones deseadas.

Preparación e inyección de embriones de mosquitos Culex para generar mutaciones nulas utilizando CRISPR/Cas9

Este protocolo detalla los pasos de crispr/cas9 mutagénesis dirigida en moscas de arena: recolección de embriones, inyección, cría de insectos e identificación, así como selección de mutaciones de interés.

Mosca de arena (Phlebotomus papatasi) Microinjeción embrionaria para CRISPR/Cas9 Mutagenesis

Aquí se presenta un protocolo de microinyección embrionaria de Helicoverpa armigera (Hübner) e identificación de mutantes knockout creado por la edición del genoma CRISPR / Cas9. Los insectos mutantes permiten una mayor investigación de la función génica y la interacción entre diferentes genes in vivo.

Microinyección embrionaria e identificación de mutantes knockout de Helicoverpa armigera editada por el genoma CRISPR/Cas9 (Hübner)

El protocolo describe cómo lograr modificaciones dirigidas al sitio en el genoma de los mosquitos de la malaria Anopheles utilizando el sistema φC31 . Las modificaciones descritas incluyen tanto la integración como el intercambio de casetes transgénicos en el genoma de las líneas de acoplamiento que llevan attP.

Integración mediada por φC31 dirigida por sitios e intercambio de casetes en anopheles vectores de malaria

Este artículo detalla un protocolo para la identificación rápida de indels inducidos por CRISPR/Cas9 y la selección de líneas mutantes en el mosquito Aedes aegypti utilizando análisis de fusión de alta resolución.

Detección indel tras mutagénesis CRISPR/Cas9 mediante análisis de fusión de alta resolución en el mosquito Aedes aegypti

Este artículo presenta los protocolos paso a paso para la mutagénesis CRISPR/Cas9 de la mosca oriental de la fruta Bactrocera dorsalis. Los pasos detallados proporcionados por este protocolo estandarizado servirán como una guía útil para generar moscas mutantes para estudios de genes funcionales en B. dorsalis.

Protocolos para la mutagénesis CRISPR/Cas9 de la mosca oriental de la fruta Bactrocera dorsalis

El presente protocolo describe cómo medir los datos de los parámetros de vida comunes en los mosquitos Aedes aegypti , incluyendo la fecundidad, el tamaño de las alas, la fertilidad, la proporción de sexos, la viabilidad, los tiempos de desarrollo, la contribución de los machos y la longevidad adulta. Estas mediciones se pueden utilizar para evaluar la aptitud de los mosquitos transgénicos.

Cuantificación de los costos de aptitud en mosquitos transgénicos Aedes aegypti

Aprende a editar el genoma de Aedes aegypti mediante CRISPR-Cas9 para crear líneas knockout y knockin. Este protocolo permite el control espaciotemporal de la expresión génica con marcadores fluorescentes.

Edición del genoma del mosquito Aedes aegypti de la fiebre amarilla mediante CRISPR-Cas9

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