Name: Análisis exhaustivo de la respuesta a los fármacos mediante el ensayo FLICK (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Aprenda a evaluar respuestas a fármacos anticancerígenos mediante el ensayo FLICK, que calcula tasas de crecimiento y muerte celular con precisión. Este método mejora el análisis de sensibilidad farmacológica en líneas celulares cancerosas.

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<ol><li>Hafner, M., Niepel, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+drug+sensitivity+metrics+improve+preclinical+cancer+pharmacogenomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Alternative drug sensitivity metrics improve preclinical cancer pharmacogenomics.</a> Nat Biotechnol. 35 (6), 500-502 (2017).</li>
<li>Dixon, S. J., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+tips+for+interpreting+cell+death+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Quick tips for interpreting cell death experiments.</a> Nat Cell Biol. 25 (12), 1720-1723 (2023).</li>
<li>Schwartz, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+GRADE%3A+An+Integrated+Analysis+of+Population+Growth+and+Cell+Death+Reveals+Drug-Specific+and+Cancer+Subtype-Specific+Response+Profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Drug GRADE: An Integrated Analysis of Population Growth and Cell Death Reveals Drug-Specific and Cancer Subtype-Specific Response Profiles.</a> Cell Rep. 31 (12), 107800(2020).</li>
<li>Hafner, M., Niepel, M., Chung, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+rate+inhibition+metrics+correct+for+confounders+in+measuring+sensitivity+to+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Growth rate inhibition metrics correct for confounders in measuring sensitivity to cancer drugs.</a> Nat Methods. 13 (6), 1-11 (2016).</li>
<li>Galluzzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cell+death+recommendations+of+the+Nomenclature+Committee+on+Cell+Death+2018%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cell death recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018.</a> Cell Death Differ. 25 (3), 486-541 (2018).</li>
<li>Tsvetkov, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+induces+cell+death+by+targeting+lipoylated+TCA+cycle+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Copper induces cell death by targeting lipoylated TCA cycle proteins.</a> Science. 375 (6586), 1254-1261 (2022).</li>
<li>Holze, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxeiptosis%2C+a+ROS-induced+caspase-independent+apoptosis-like+cell-death+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Oxeiptosis, a ROS-induced caspase-independent apoptosis-like cell-death pathway.</a> Nat Immunol. 19 (2), 130-140 (2018).</li>
<li>Maltese, W. A., Overmeyer, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methuosis+Nonapoptotic+Cell+Death+Associated+with+Vacuolization+of+Macropinosome+and+Endosome+Compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Methuosis Nonapoptotic Cell Death Associated with Vacuolization of Macropinosome and Endosome Compartments.</a> Am J Pathol. 184 (6), 1630-1642 (2014).</li>
<li>Inde, Z., Forcina, G. C., Denton, K., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+Heterogeneity+of+Cancer+Cell+Fractional+Killing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Kinetic Heterogeneity of Cancer Cell Fractional Killing.</a> Cell Rep. 32 (1), 107845(2020).</li>
<li>Forcina, G. C., Conlon, M., Wells, A., Cao, J. Y., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Quantification+of+Population+Cell+Death+Kinetics+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Systematic Quantification of Population Cell Death Kinetics in Mammalian Cells.</a> Cell Syst. 4 (6), 1-18 (2017).</li>
<li>Gelles, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+and+Population-Level+Analyses+Using+Real-Time+Kinetic+Labeling+Couples+Proliferation+and+Cell+Death+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-Cell and Population-Level Analyses Using Real-Time Kinetic Labeling Couples Proliferation and Cell Death Mechanisms.</a> Dev Cell. 51 (2), 277-291.e4 (2019).</li>
<li>Richards, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+antagonism+and+single-agent+dominance+result+from+differences+in+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Drug antagonism and single-agent dominance result from differences in death kinetics.</a> Nat Chem Biol. 16 (7), 791-800 (2020).</li>
<li>Richards, R., Honeywell, M. E., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLICK%3A+an+optimized+plate+reader-based+assay+to+infer+cell+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">FLICK: an optimized plate reader-based assay to infer cell death kinetics.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100327(2021).</li>
<li>Honeywell, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+screens+with+death+rate+analyses+reveal+mechanisms+of+drug+action%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional genomic screens with death rate analyses reveal mechanisms of drug action.</a> Nat Chem Biol. 20 (11), 1443-1452 (2024).</li>
<li>Jannoo, R., Xia, Z., Row, P. E., Kanamarlapudi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+the+Interleukin-13+Receptor+%28IL-13R%29%CE%B12+Expressing+Prostate+Cancer+by+a+Novel+Hybrid+Lytic+Peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Targeting of the Interleukin-13 Receptor (IL-13R)α2 Expressing Prostate Cancer by a Novel Hybrid Lytic Peptide.</a> Biomolecules. 13 (2), 356(2023).</li>
<li>Gelles, J. D., Chipuk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+not+add+some+SPARKL+to+your+life+%28and+death%29%21%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Oncol%22%5BJournal%5D)">Why not add some SPARKL to your life (and death)!</a> Mol Cell Oncol. 7 (1), 1685841(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Belinostat</td><td>ApexBio</td><td>A4612</td><td></td></tr><tr><td>Camptotecina</td><td>ApexBio</td><td>A2877</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga cónico, 15mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-269</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>10017CV</td><td>Para células de siembra y fármaco</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT-25950CQC</td><td>Para células</td></tr> <tr><td>de siembra y fármacoFisherbrand 96-Well, Cell Culture-Treated, Uk-Shaped Bottom Microplate</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012932</td><td>Para sembrar y fármaco células (placa de clavijas)</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One&nbsp; CELLSTAR &mu; Clear 96-well-Cell Culture-Treated, Flat-Bottom Microplate</td><td>Greiner</td><td>655090</td><td>Para células de siembra y fármaco</td></tr><tr><td>IncuCyte S3</td><td>Essen Biosciences</td><td></td><td>Cualquier microscopio de fase funcionará</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td><td>MATLAB versión R2023b, se requiere una licencia</td></tr><tr><td>Lector de fluorescencia de microplacas</td><td>Tecan</td><td>Spark</td><td>Para medir la fluorescencia de las células muertas</td></tr><tr><td>Palbociclib</td><td>ApexBio</td><td>A8316</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CM</td><td>Cualquier PBS funciona</td></tr><tr><td>Spark Lector de microplacas multimodo Tecan</td><td></td><td>https://www.tecan.com/spark-overview</td><td>SparkControl versión de software 2.2</td></tr><tr><td>Depósito estéril, 25 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-681-508</td><td>Para sembrar y drogar células</td></tr><tr><td>Tinción de ácido nucleico Sytox Green</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S7020</td><td>Tinción de ADN para medir la fluorescencia de células muertas</td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J66624-AP</td><td>Para permeabilizar células</td></tr><tr><td>U2OS</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Una línea celular de ejemplo utilizada en este protocolo</td></tr><tr><td>Z-VAD-FMK</td><td>ApexBio</td><td>A1902</td><td></td></tr></tbody></table>

análisis exhaustivo de la respuesta a los fármacos mediante el ensayo flick

Comprehensive Analysis of Drug Response using the FLICK Assay

Utilizando este protocolo, exploramos la sensibilidad de las células U2OS al inhibidor de HDAC Belinostat. Estos experimentos se realizaron utilizando 2 μM de SYTOX Green para etiquetar las células muertas (Figura 1A). Las lecturas cinéticas se realizaron utilizando un lector de placas fluorescentes a un ajuste de ganancia de 130 (Figura 1B). Las células se lisaron en una solución de Triton-X al 1,5% en PBS durante 2 h al final del ensayo (F...

Análisis exhaustivo de la respuesta a los fármacos mediante el ensayo FLICK

For understanding drug efficacy, a critical need is to characterize the extent of drug-induced cell death. Efforts to quantify the level of drug-induced ...

comprehensive-analysis-of-drug-response-using-the-flick-assay

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video ofrece un protocolo detallado para estudiar el perfil farmacológico de humanos TRPA1 canales a través de FlexStation 3. El protocolo cubre los detalles de la preparación de la célula, la carga de tinte y el funcionamiento del lector de microplacas, FlexStation 3.

Basados ​​en células de calcio de ensayo para el medio a cribado de alto rendimiento de las funciones del PRT canal utilizando FlexStation 3

Se describe el procedimiento y el análisis de datos de un sistema de detección química para la señalización de glucocorticoides hormona del estrés usando larvas de pez cebra: la de respuesta en vivo Pez Cebra actividad luciferasa (DE GRIZLY) ensayo de glucocorticoides. El ensayo sensible y específicamente detecta efectos en la señalización de glucocorticoides por compuestos que requieren metabolización o afectan la producción de glucocorticoides endógena.

Un procedimiento de detección química de glucocorticoides Señalización con un sistema indicador de pez cebra Larva luciferasa

Describimos un ensayo de sensibilidad a fármacos de alto rendimiento para células primarias de mieloma múltiple. Consiste en una reconstrucción del microambiente de la médula ósea (incluyendo matriz extracelular y estroma) en placas de pocillos múltiples, y un método no invasivo para la cuantificación longitudinal de la viabilidad celular.

Un Sistema organotípicos de alto rendimiento para la Caracterización de la sensibilidad a los fármacos de las células del mieloma múltiple primaria

Los métodos sencillos para detectar la activación selectiva de proteínas G por receptores acoplados a proteínas G siguen siendo un desafío pendiente en la señalización celular. Aquí, los biosensores de transferencia de energía por resonancia (FRET) de Förster se han desarrollado mediante la unión por pares de un GPCR a péptidos de proteínas G para sondear los cambios conformacionales a concentraciones controladas en células vivas.

Conformaciones GPCR Proteína G-selectivos mide usando sensores FRET en un fluorómetro Ensayo de suspensión de células vivas

Se presenta un alto contenido de código abierto instrumento de análisis (HCA) que utiliza imágenes de vida de fluorescencia automatizado (Flim) para ensayar las interacciones proteína utilizando Förster transferencia de energía resonante (FRET) lecturas basadas. La adquisición de datos para este instrumento openFLIM-HCA es controlado por el software escrito en μManager y se lleva a cabo el análisis de datos en FLIMfit.

Open Source de análisis de contenidos de alta Utilizando microscopía de fluorescencia automatizado de imágenes por vida

El ensayo celular se describe está diseñado para la identificación del receptor de quimiocina CXC 4 (CXCR4)-agentes interactuantes que inhiben o estimulan, ya sea competitivo o allosterically, la intracelular Ca2 + liberación iniciada por activación de CXCR4.

Un ensayo de cinética basada en fluorescencia Ca2 + movilización para identificar G proteína-juntó el Receptor agonistas, antagonistas y moduladores alostéricos

Combinaciones de fármacos sinérgicos son difíciles y lleva mucho tiempo identificar empíricamente. Aquí, describimos un método para identificar y validar sinérgicas pequeñas moléculas.

Alto rendimiento identificación de combinaciones de fármacos sinérgicos por el método de superposición2

Introducimos un protocolo para medir la respuesta de fármacos en tiempo real en rebanadas de tejido tumoral orgatípico. La estrategia experimental descrita aquí proporciona una plataforma para llevar a cabo pantallas de fármacos de rendimiento medio-alto en rodajas de tejido derivadas de tumores clínicos o de ratón en condiciones ex vivo.

Medición de la respuesta de fármacos en tiempo real en rebanadas de tejido tumoral organotípico

En este trabajo, se describe un ensayo de fluorescencia de calcio intracelular de alto rendimiento para placas de 384 pocillos para examinar bibliotecas de moléculas pequeñas en receptores acoplados a proteínas G recombinantes (GPCR). El objetivo, el receptor de cinina de la garrapata de la fiebre del ganado, Rhipicephalus microplus, se expresa en las células CHO-K1. Este ensayo identifica agonistas y antagonistas utilizando las mismas células en un ensayo de "doble adición".

Un ensayo de fluorescencia de calcio de "doble adición" para el cribado de alto rendimiento de receptores acoplados a proteínas G recombinantes

Los organoides tumorales derivados de pacientes son un sistema modelo sofisticado para la investigación básica y traslacional. Este artículo de métodos detalla el uso de imágenes fluorescentes multiplexadas de células vivas para la evaluación cinética simultánea de diferentes fenotipos de organoides.

Imágenes multiplexadas de células vivas para las respuestas a los medicamentos en modelos de organoides derivados de pacientes de cáncer

Aprenda a evaluar respuestas a fármacos anticancerígenos mediante el ensayo FLICK, que calcula tasas de crecimiento y muerte celular con precisión. Este método mejora el análisis de sensibilidad farmacológica en líneas celulares cancerosas.

Análisis exhaustivo de la respuesta a los fármacos mediante el ensayo FLICK

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