Name: Aplicación de un nuevo hidrogel de hialuronano para el cultivo tridimensional de folículos y metodología para la criopreservación de folículos ováricos de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Aprenda a cultivar folículos ováricos en 3D usando un hidrogel de hialuronano con tejido de ratón. Este método mejora la maduración de ovocitos y ofrece técnicas avanzadas de criopreservación para aplicaciones en biología reproductiva.

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<ol><li>Telfer, E. E., Andersen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+growth+and+maturation+of+primordial+follicles+and+immature+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">In vitro growth and maturation of primordial follicles and immature oocytes.</a> Fertil Steril. 115 (5), 1116-1125 (2021).</li>
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<li>Carabatsos, M. J., Sellitto, C., Goodenough, D. A., Albertini, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa+cell+heterologous+gap+junctions+are+required+for+the+coordination+of+nuclear+and+cytoplasmic+meiotic+competence%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa cell heterologous gap junctions are required for the coordination of nuclear and cytoplasmic meiotic competence.</a> Dev Biol. 226 (2), 167-179 (2000).</li>
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<li>Telfer, E., Torrance, C., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+study+of+cultured+preantral+ovarian+follicles+of+mice+after+transplantation+under+the+kidney+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Morphological study of cultured preantral ovarian follicles of mice after transplantation under the kidney capsule.</a> J Reprod Fertil. 89 (2), 565-571 (1990).</li>
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<li>Wu, J., Nayudu, P. L., Kiesel, P. S., Michelmann, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luteinizing+hormone+has+a+stage-limited+effect+on+preantral+follicle+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Luteinizing hormone has a stage-limited effect on preantral follicle development in vitro.</a> Biol Reprod. 63 (1), 320-327 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Etiquetado anti-alfa tubulina-FITC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2168</td><td></td></tr><tr><td>Etiquetado anti-beta tubulina-FITC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2043</td><td></td></tr><tr><td>BZ-X700</td><td>Clave</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plato de pozo central</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-12</td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa tipo I</td><td>Corporación Bioquímica de Worthington</td><td>LS004196</td><td></td></tr><tr><td>Ventilación de vial Crycap</td><td>Investigación de Hampton</td><td>HR4-904</td><td></td></tr><tr><td>Bucle criogénico</td><td>Investigación de Hampton</td><td>HR4-974</td><td></td></tr><tr><td>Tapa de cristal</td><td>Investigación de Hampton</td><td>HR4-733</td><td></td></tr><tr><td>Plato de cultivo 60mm</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08-772B</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Factor de crecimiento epidérmico (EGF)</td><td>R & Sistemas D</td><td>236-EG</td><td></td></tr><tr><td>Etilenglicol (EG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>293237</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino-Calor inactivado</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>Hormona estimulante del folículo (FSH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4021</td><td></td></tr><tr><td>Global-Hepes&nbsp; Medio</td><td>CooperSurgical</td><td>LGGH-100</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>Gonadotropina coriónica humana (hCG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CG10</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica humana</td><td>CooperSurgical</td><td>GHSA-125</td><td></td></tr><tr><td>Hialuronidasa</td><td>CooperSurgical</td><td>ART-4007-A</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno</td><td>CVS Pharmacy Inc.</td><td>372441</td><td></td></tr><tr><td>Insulina-transferrina-selenio (ITS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz medio (L-15)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11415-064</td><td></td></tr><tr><td>Hormona luteinizante</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9773</td><td></td></tr><tr><td>Varilla magnética</td><td>Investigación de Hampton</td><td>HR4-729</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas (1000 &micro; m)</td><td>Minitubo</td><td>19025/0050</td><td></td></tr><tr><td>Las micropipetas (175, 200 y 275&micro; m)</td><td>CooperSurgical</td><td>MXL3-175, MXL3-200, MXL3-275</td><td></td></tr><tr><td>Filtro Millex GV 0.22 &micro; m</td><td>Millipore</td><td>SLGU033RS</td><td></td></tr><tr><td>Aceite mineral</td><td>CooperSurgical</td><td>LGOL-500</td><td></td></tr><tr><td>Medio esencial mínimo alfa (MEM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>32561-037</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imágenes de ovocitos-Spindleview</td><td>Hamilton Thorne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Yoduro de propidio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4170</td><td></td></tr><tr><td>Rápido i</td><td>VitroLife</td><td>14406</td><td></td></tr><tr><td>SmartBox</td><td>VitroLife</td><td>14423</td><td></td></tr><tr><td>Sustituto de proteína sintética (SPS)</td><td>CooperSurgical</td><td>ART-3011</td><td></td></tr><tr><td>Kit de biohidrogel de hialuronano ligado a la tiramina</td><td>Núcleo de vida</td><td>ESP-00151</td><td></td></tr><tr><td>Sellador ultrasónico</td><td>VitroLife</td><td>14415</td><td></td></tr><tr><td>Plato de cultivo GPS universal 8x 100 &micro; l pozos</td><td>CooperSurgical</td><td>UGPS-010</td><td></td></tr></tbody></table>

aplicación de un nuevo hidrogel de hialuronano para el cultivo tridimensional de folículos y metodología para la criopreservación de folículos ováricos de ratón

Application of a Novel Hyaluronan Hydrogel for Three-Dimensional Follicle Culture and Methodology for Mouse Ovarian Follicle Cryopreservation

En este artículo se detalla la metodología para el uso de un nuevo gel de hialuronano ligado a la tiramina para el cultivo in vitro de folículos preantrales de ratón36,37. La Figura 6 ilustra las diferencias entre el crecimiento del folículo preantral cuando se coloca en un sistema de cultivo 2D convencional frente a un solo folículo encapsulado en gel de HA para cultivo 3D. La arquitectura de los folículos nativos se mantiene durante los 12 días de cultivo con un antro claramente visible en el último día de crecimiento.
El gel de AH es muy versátil, permitiendo el crecimiento de folículos aislados individualmente o en grupos y también el tejido ovárico se rompe mecánicamente en pequeños grupos de folículos. El gel es transparente, lo que permite visualizar los folículos incluso a diferentes profundidades. Los folículos encapsulados y FL-C exhiben expansión radial debido a la proliferación continua de células de la granulosa (Figura 7). Los diámetros iniciales de los folículos tienen un promedio de 139,8 ± 28 μm, con un diámetro de ovocitos GV de 63,5 ± 4,6 μm. En los folículos cultivados individualmente, los diámetros finales miden entre 385,6 ± 36,7 μm, un aumento de tamaño de aproximadamente 3 veces. Los ovocitos ovulados en metafase II miden alrededor de 84,8 ± 3,8 μm. Dentro de los grupos de FL cultivados, el tamaño del folículo es bastante diverso (Figura 5, Figura 7). Los ovocitos ovulados después del desencadenamiento de la hCG se encuentran cerca del folículo (Figura 8). La mayoría de los ovocitos de la metafase II se extraerán de los AOC ovulados. Los folículos que aún están incrustados después del desencadenamiento generalmente contienen ovocitos GV y metafase I.
En la Tabla 1 se contrastan las tasas de maduración entre folículos aislados y grupos FL de ovarios frescos o congelados. El FL-C de ovarios criopreservados tuvo tasas de maduración significativamente más bajas. Las observaciones microscópicas mostraron que con frecuencia se les rompía la lámina basal, lo que las hacía bastante susceptibles a la extrusión prematura de ovocitos. La fragilidad de los grupos de folículos se contrarrestó de alguna manera con la encapsulación. Se evitó el tratamiento con colagenasa de los ovarios criopreservados, ya que era especialmente perjudicial con baja supervivencia y bajo rendimiento de folículos intactos.
La criopreservación de folículos aislados es mucho más eficaz que la preservación de ovario completo. Se pueden lograr altas tasas de maduración con los dos métodos de vitrificación examinados (Tabla 2). A pesar de las grandes diferencias en las tasas de enfriamiento, la maduración de los ovocitos después de la VCI no difirió. El portador abierto CL permite una mayor eficiencia, ya que se pueden cargar hasta diez folículos en un solo portador abierto CL. Esto también acorta el tiempo total para recuperar múltiples folículos criopreservados. Sin embargo, para cualquier aplicación clínica eventual de la vitrificación de folículos humanos, puede ser preferible el sistema cerrado y sellado.
La disposición de la cromatina alrededor del nucléolo del ovocito GV se puede utilizar para identificar los ovocitos con mayor probabilidad de fertilizar después de la ovulación y desarrollarse a blastocistos38. La figura 9 ilustra la tinción en vivo de los ovocitos para visualizar el patrón de distribución de la cromatina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig01.jpg"> Figura 1: Esquema del crecimiento del folículo. Este diagrama ilustra las diferentes etapas del desarrollo del folículo, desde un folículo primario hasta la etapa preantral secundaria y, finalmente, hasta un folículo terciario completamente maduro listo para la ovulación. También se muestra una imagen microscópica de un folículo preantral típico con sus diferentes características morfológicas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig02.jpg"> Figura 2: Esquema del método de encapsulación de alta disponibilidad. La estructura del gel de hialuronano y los diferentes pasos para la incrustación del folículo se ilustran en este <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig02large.jpg" target="_blank">diagrama. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig03.jpg"> Figura 3: Aislamiento y encapsulación del folículo. (A, B) Folículo preantral seleccionado para su inclusión con aumentos de 40x y 200x. (C) El folículo apoptótico se muestra con un folículo preantral sano con el ovocito no del todo central. (D) Imagen de perla de gel de HA sembrada con folículos y (E) con dos FL-C. Imágenes tomadas con un microscopio estereoscópico para mostrar toda la perla de gel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig04.jpg"> Figura 4: Dispositivos de vitrificación para la criopreservación de folículos aislados. Con el dispositivo portador abierto CL, la etapa de vitrificación se lleva a cabo mediante la inmersión directa de los folículos en nitrógeno líquido. Por lo tanto, la velocidad de enfriamiento es extremadamente alta, más de -20.000 °C/min. Por el contrario, con el portador cerrado RI, los folículos se cargan en el palo de plástico interior y se dejan caer en una pajita exterior sumergida en nitrógeno líquido. Este método de vitrificación cerrado evita el contacto directo con el nitrógeno líquido. Sin embargo, la velocidad de enfriamiento es significativamente menor a -1220 °C/min. La carga y recuperación de folículos de cualquiera de los portadores es fácil. El portador abierto CL admitió la carga de hasta diez folículos por dispositivo en comparación con solo dos con el portador cerrado RI. Esta cifra ha sido modificada de35. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig05.jpg"> Figura 5: Imágenes representativas de los problemas encontrados. (A) Cúmulo de folículos con ovocitos en extrusión. (B) Folículos aislados con membrana de lámina basal rota y uno con un ovocito extruido. (C) Folículo incrustado debajo de una burbuja en el gel. (D) Racimo de folículos que permaneció en gel (izquierda) en comparación con el racimo incrustado demasiado profundo que finalmente se adhirió a la placa. La amplia gama de tamaños de folículos en FL-C es claramente visible. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig06.jpg"> Figura 6: Comparación del crecimiento de folículos en el cultivo convencional 2-D versus 3-D en AH. Con el crecimiento en 2D, se observó el aplanamiento del folículo y la unión de las células de la granulosa a la placa de cultivo de tejidos en el día 4, lo que dejaba al ovocito vulnerable a la migración de las células de la granulosa, la interrupción de las uniones gap y la extrusión prematura de ovocitos. El folículo encapsulado en HA permaneció suelto durante todo el intervalo de cultivo. La expansión de las células de la granulosa se produjo en todas las direcciones, encerrando el ovocito y manteniendo la arquitectura 3D. Esta cifra ha sido modificada de36. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig06large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig07.jpg"> Figura 7: Imágenes representativas de folículos encapsulados en gel de hialuronano unido a tiramina. (A) Folículo preantral recolectado después de la digestión de colagenasa de ovario fresco en el día 1. (B) Gota de gel sembrada con cuatro folículos preantrales fotografiados en el día 1 y (C) Día 4 de cultivo (D) Racimo de folículos de ovario fresco en el día 2 (E) en el día 6 y (F) en el día 9 de cultivo. (G) Racimo de folículos disecado mecánicamente a partir de ovario entero vitrificado mostrado en el día 2 y (H) en el día 6 de cultivo. (I) La formación de folículos con antro es claramente visible en el día 9 de cultivo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig07large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig08.jpg"> Figura 8: Ovulación de ovocitos. (A, B) Complejo cúmulo-ovocito ovulado (COC) que se muestra a continuación perla de gel de HA. (C) Se obtuvieron imágenes de los ovocitos después del tratamiento enzimático de los AOC con hialuronidasa para eliminar las células del cúmulo circundante. Numerosos ovocitos en metafase II. (D) Ovocito en metafase II con cuerpo polar prominente. Aumento 400x. (E) Imágenes en vivo de ovocitos en metafase II utilizando luz polarizada y un sistema de imágenes para visualizar el huso meiótico y evaluar la organización, realizadas como se describe en37. Aumento 400x. Huso birrefringente normal visible. (F) Ovocito en metafase II fijado y teñido con anti-alfa/beta-tubulina y yoduro de propidio para visualizar la organización meiótica del huso. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig08large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig09.jpg"> Figura 9: Reorganización de la cromatina en ovocitos GV. La disposición de la cromatina en los ovocitos GV después de la formación del antro se examinó mediante tinción de ADN con Hoechst 33342 (50 ng/mL). Los folículos representativos se cosecharon de las perlas de AH mediante un pipeteo suave. Las células de la granulosa se extrajeron con hialuronidasa. A continuación, los ovocitos GV se tiñeron durante 15 min. (Ver protocolo de Monti et al.38). Las imágenes se tomaron con un aumento de 40x. (A) Ovocito GV mostrado el día 1 al inicio del cultivo que exhibe el patrón de tinción de cromatina no rodeada (NSN). (B) Ovocito GV de folículo en crecimiento con antro mostrado el día del desencadenante de la hCG. La cromatina se condensó y formó un anillo perinuclear alrededor del nucléolo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig09large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Parámetro</td>
			<td colspan="2">Ovario fresco</td>
			<td>Ovario congelado</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>FL-Aislado</td>
			<td>FL-Cluster (Cúmulo de flores)</td>
			<td>FL-Cluster (Cúmulo de flores)</td>
		</tr><tr><td>Folículos observados durante la VCI</td>
			<td>130</td>
			<td>154</td>
			<td>69</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">Ovulación después de la HCG (%)</td>
			<td>71%</td>
			<td>66%</td>
			<td>93%</td>
		</tr><tr><td>(92/130)</td>
			<td>(101/154)</td>
			<td>(64/69)</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">GVBD (%)</td>
			<td>30%</td>
			<td>28%</td>
			<td>52%</td>
		</tr><tr><td>(28/92)</td>
			<td>(28/101)</td>
			<td>(33/64)</td>
		</tr><tr><td>Formación de ovocitos MII (%)</td>
			<td>59%</td>
			<td>55%</td>
			<td>*34%</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>(54//92)</td>
			<td>(56/101)</td>
			<td>(22/64)</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 1: Resultados con folículos incrustados en HA de ovarios frescos y vitrificados. Los folículos y la FL-C de ovarios frescos se maduraron in vitro después de la encapsulación en gel de AH. El gel de AH también se probó en folículos de ovarios vitrificados utilizando un protocolo EG/DMSO39. Con los ovarios frescos, se recolectaron folículos individuales (FL) y grupos de folículos (FL-C) después de la digestión con colagenasa. En el caso de los ovarios vitrificados, la exposición a la colagenasa fue, de hecho, perjudicial para los folículos. El mejor enfoque con los ovarios criopreservados fue aislar los grupos de FL en lugar de los folículos individuales y utilizar únicamente la disección mecánica con agujas. La tabla contrasta los resultados entre las perlas de AH sembradas con folículos en grupos de 4 a 6 frente a las perlas con un solo FL-C que contiene de 6 a 10 folículos. *La tasa de maduración con FL-C de ovarios criopreservados fue significativamente menor (p = 0,008; Análisis de Chi-cuadrado para probar la significación).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2">Portador</td>
			<td>RI</td>
			<td>CL</td>
		</tr><tr><td>(Cerrado)</td>
			<td>(Abierto)</td>
		</tr><tr><td>Supervivencia (%)</td>
			<td>100% (24/24)</td>
			<td>100% (41/41)</td>
		</tr><tr><td>Formación de antros* (%)</td>
			<td>25.0% (6/24)</td>
			<td>75.6% (31/41)*</td>
		</tr><tr><td>Tasa de ovulación (%)</td>
			<td>66.7% (16/24)</td>
			<td>87.8% (36/41)</td>
		</tr><tr><td>Tasa de maduración (% MIIs)</td>
			<td>81.3% (13/16)</td>
			<td>69.4% (25/36)</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 2: Resultados después de la criopreservación de folículos aislados en dos dispositivos de vitrificación diferentes. Se lograron altas tasas de maduración tanto con el dispositivo CL abierto como con el portador RI cerrado, con su menor velocidad de enfriamiento. La formación de antro fue la única medida de resultado observada como significativa, pero no afectó la tasa de maduración general (p &lt; 0,05; Análisis de Chi-cuadrado para probar la significación).

Aplicación de un nuevo hidrogel de hialuronano para el cultivo tridimensional de folículos y metodología para la criopreservación de folículos ováricos de ratón

The 3-D architecture of the ovarian follicle and the complex interactions between somatic cell components and the oocyte that are necessary for ...

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Investigación

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Biology

Biología

Un nuevo método para la encapsulación de los folículos ováricos en 3D de fibrina-alginato red interpenetrante se describe. Este sistema combina un soporte estructural a la degradación proteolítica de apoyar el desarrollo de folículos inmaduros para producir ovocitos maduros. Este método puede ser aplicado a los agregados de cultivo celular para mantener contactos célula-célula, sin limitar la expansión.

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

Cultivo de células normales en sus tres dimensiones contexto representa un método alternativo para estudiar los primeros eventos necesarios para la transformación celular y tumorigénesis. Este método se utiliza para producir los ovarios normales y las células del oviducto para estudiar los eventos tempranos en la formación de cáncer de ovario.

Los hidrogeles de alginato para la cultura del órgano en tres dimensiones de los ovarios y oviductos

Este protocolo describe el cultivo primario / co-cultivo de tejido ovárico ratón, utilizando los ovarios de ratones recién nacidos y los folículos ováricos individuales de ratones prepúberes. Las técnicas de cultivo de apoyar el desarrollo de una manera altamente fisiológica, lo que permite la investigación del efecto de los agentes extrínsecos en el ovario, y de las interacciones entre los folículos ováricos.

Cultura y Co-cultura de ratón ovarios y los folículos ováricos

Una técnica muy prometedora para generar tejido construye sin utilizar la matriz es a células en cultivo en condiciones de microgravedad simulada. Usando un sistema de cultivo rotatorio, examinamos crecimiento del folículo ovárico y la maduración de ovocitos en términos de supervivencia del folículo, morfología, crecimiento y función de ovocitos bajo la condición de microgravedad simulada.

In Vitro Crecimiento de los folículos Preantral ratón bajo microgravedad simulada

Cultivos de tejido ováricos se puede utilizar como modelos de la atresia de desarrollo, la ovulación y el folículo folículo e indicar mecanismos reguladores de procesos dinámicos de ovarianos.

Cultivo de tejido ovárico para visualizar fenómenos en ovario de ratón

Aquí se presentan dos protocolos para la encapsulación de ovocitos porcinos en condiciones de cultivo 3D. En el primero, los complejos cúmulos-oocitos (COC) se encapsulan en perlas de fibrina-alginato. En el segundo, se encierran con partículas fluoradas de etileno propileno propileno (microbiorreos). Ambos sistemas garantizan condiciones óptimas para mantener su organización 3D.

Hidrogeles de Alginato degradados proteolíticamente y microbiorreactores hidrófobos para encapsulación de oocitos porcinos

Aquí, describimos un protocolo que describe cómo aislar los folículos ováricos humanos del tejido cortical congelado-descongelado para realizar análisis de expresión génica.

Análisis de expresión génica en folículos humanos

Describimos métodos para cultivar folículos ováricos en un novedoso molde de agarosa sin andamios que complementan la gametogénesis in vitro .

Producción y uso de moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios

Describimos una plataforma basada en el chip para el cultivo en tres dimensiones de las células de micro-biorreactores. Un chip puede albergar hasta 10 millones de euros. células que pueden ser cultivadas bajo condiciones definidas con precisión en lo que respecta al flujo de fluidos, etc tensión de oxígeno en un asa estéril, cerrado de circulación.

Basada en el chip tridimensional de cultivo celular en perfundido Micro-biorreactores

Se presentan dos procesos de microfabricación de chips de polímero poroso para el cultivo de células en tres dimensiones. El primero es el estampado en caliente combinado con un proceso de soldadura vapores de disolventes. El segundo utiliza un proceso desarrollado recientemente microthermoforming combinada con la tecnología de iones de la pista que conduce a una simplificación significativa de la fabricación.

Microfabricación de chip del tamaño de andamios para el cultivo de células en tres dimensiones

Aprenda a cultivar folículos ováricos en 3D usando un hidrogel de hialuronano con tejido de ratón. Este método mejora la maduración de ovocitos y ofrece técnicas avanzadas de criopreservación para aplicaciones en biología reproductiva.

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