Name: Generación de esferoides/organoides tridimensionales a partir de cultivos celulares bidimensionales utilizando un novedoso dispositivo de estampado (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Aprende a generar esferoides y organoides tridimensionales mediante un sistema de micropocillos en moldes de agarosa. Este método rentable mejora las interacciones celulares y reduce la variabilidad experimental en cultivos 3D.

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<ol><li>Lian, J., Yue, Y., Yu, W., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosenescence%3A+a+key+player+in+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Immunosenescence: a key player in cancer development.</a> J Hematol Oncol. 13 (1), 151(2020).</li>
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<li>Bialkowska, K., Komorowski, P., Bryszewska, M., Milowska, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroids+as+a+type+of+three-dimensional+cell+cultures-examples+of+methods+of+preparation+and+the+most+important+application%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Spheroids as a type of three-dimensional cell cultures-examples of methods of preparation and the most important application.</a> Int J Mol Sci. 21 (17), 6225(2020).</li>
<li>Razian, G., Yu, Y., Ungrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+large+numbers+of+size-controlled+tumor+spheroids+using+microwell+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of large numbers of size-controlled tumor spheroids using microwell plates.</a> J Vis Exp. (81), e50665(2013).</li>
<li>Andersen, T., Auk-Emblem, P., Dornish, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+Cell+culture+in+alginate+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Microarrays+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">3D Cell culture in alginate hydrogels.</a> Microarrays (Basel). 4 (2), 133-161 (2015).</li>
<li>Hou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+development+of+primary+pancreatic+organoid+tumor+models+for+high-throughput+phenotypic+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Discov%22%5BJournal%5D)">Advanced development of primary pancreatic organoid tumor models for high-throughput phenotypic drug screening.</a> SLAS Discov. 23 (6), 574-584 (2018).</li>
<li>Napolitano, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-free+three-dimensional+cell+culture+utilizing+micromolded+nonadhesive+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Scaffold-free three-dimensional cell culture utilizing micromolded nonadhesive hydrogels.</a> Biotechniques. 43 (4), 494-500 (2007).</li>
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<li>Mantovani, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+primary+cultures+of+insulin-releasing+human+pancreatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Immobilization of primary cultures of insulin-releasing human pancreatic cells.</a> Islets. 1 (3), 224-231 (2009).</li>
<li>Wassmer, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+primary+pancreatic+islet+cell+spheroids+for+three-dimensional+culture+or+transplantation%3A+a+methodological+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Engineering of primary pancreatic islet cell spheroids for three-dimensional culture or transplantation: a methodological comparative study.</a> Cell Transplant. 29, 963689720937292(2020).</li>
<li>Stuart, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+low-cost+scaffold-free+cartilage+tissue+engineering+using+human+cartilage+progenitor+cell+spheroids+formed+by+micromolded+nonadhesive+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Successful low-cost scaffold-free cartilage tissue engineering using human cartilage progenitor cell spheroids formed by micromolded nonadhesive hydrogel.</a> Stem Cells Int. 2017, 7053465(2017).</li>
<li>Charelli, L. E., Dernowsek, J. A., Balbino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue+spheroids+via+a+3D+printed+stamp-like+device%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue spheroids via a 3D printed stamp-like device.</a> J Vis Exp. (188), e63814(2022).</li>
<li>Micromold for the production of cellular spheroids and use. , Patent BR 10 2019 027360 7 A2 (2019).</li>
<li>Riffle, S., Pandey, R. N., Albert, M., Hegde, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+hypoxia%2C+DNA+damage+and+proliferation+in+multicellular+tumor+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Linking hypoxia, DNA damage and proliferation in multicellular tumor spheroids.</a> BMC Cancer. 17, 338(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Microondas 31L</td><td>Electrolux</td><td>78965840 6699 9</td><td>Equipo utilizado para calentar la solución de agarosa, facilitando su disolución y asegurando una mayor homogeneidad. Permite que la solución alcance el estado líquido ideal para la formación de los pozos.</td></tr><tr><td>Resina 3D fotosensible opaca gris 3DFila Resina</td><td></td><td></td><td>polimérica curable por UV Impresora</td></tr><tr><td>3D - Creality Halot One</td><td>Creality</td><td>N/A</td><td>Impresora 3D utilizada para imprimir el dispositivo de sellos</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>UNISCIENCE</td><td>UNI-R10111</td><td>Para formar el gel, disuelva del 1 al 2% en tampón de fosfato salino (PBS) o medio apropiado.</td></tr><tr><td>Autodesk Fusion 360</td><td></td><td></td><td>Modelado 3D</td></tr><tr><td>BB15 CO2 Incubadora</td><td>Thermo Fisher 51023121</td><td></td><td>Equipo utilizado para incubar células cultivadas en un entorno adecuado y controlado.</td></tr><tr><td>Chitubox</td><td>Chitubox N</td><td>/A</td><td>Software utilizado para el corte de la pieza para impresión</td></tr><tr><td>Cabina de Seguridad Biológica Clase II</td><td>Grupo VECO</td><td>N/A</td><td>Garantiza un ambiente estéril para la realización del cultivo celular dentro de los parámetros y protocolos establecidos.</td></tr><tr><td>Medio de cultivo</td><td>USBiológico/Ciencias de la Vida</td><td>C5900-03A</td><td>Contiene aditivos para el correcto cultivo celular.</td></tr><tr><td>Placas de cultivo (P6)</td><td>SARSTEDT</td><td>1023221</td><td>Se utiliza para dar forma a la agarosa y cultivar las células.</td></tr><tr><td>Matraz Erlenmeyer (25 mL)</td><td>Laborglas</td><td>91 216 14</td><td>Un recipiente utilizado para disolver 1&ndash; 2% de agarosa en solución salina tamponada con fosfato (PBS) u otro medio adecuado, generalmente calentado en un microondas.</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de poliestireno Falcon 15 mL</td><td>Corning</td><td>352099</td><td>Se utiliza para mantener las células en suspensión y realizar posibles diluciones.</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Vitrocell Embriolife</td><td>005/19</td><td>Aditivo para medio de cultivo.</td></tr><tr><td>Solución PBS (tampón de fosfato salino)</td><td>Hecho en laboratorio</td> N<td>/A</td><td>diluido 1x con agua ultrapura MiliQ. Se utiliza para disolver la agarosa del 1 al 2% y para lavar los pocillos ya producidos.</td></tr><tr><td>Frasco de reactivo con tapón azul - Schott</td><td>Laborglas</td><td>21801545</td><td>Se utiliza para preparar y almacenar el medio de cultivo.</td></tr><tr><td>Dispositivo de sellos</td><td>NUCEL Group</td><td>N/A</td><td>Link: este enlace proporciona acceso al archivo .stl del dispositivo de sellos. Basta con cortarlo con el software adecuado e imprimirlo con una impresora 3D compatible. https://drive.google.com/drive/folders/1gTYComnJWzHpN6ZKOyK EChKS3Qns0rOA?usp=sharing</td></tr><tr><td>Matraz de cultivo tratado con filtro 25 cm&sup2;</td><td>Corning 430639</td><td></td><td>Se utiliza para el cultivo y mantenimiento de células adherentes.</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Merck</td><td>07-07-9002</td><td>Para la disociación de las células antes de la siembra.</td></tr><tr><td>Luz ultravioleta (UV)</td> N<td>/A</td><td>N/A</td><td>Se utiliza para esterilizar el sello y las placas.</td></tr></tbody></table>

generación de esferoides/organoides tridimensionales a partir de cultivos celulares bidimensionales utilizando un novedoso dispositivo de estampado

Generation of Three-Dimensional Spheroids/Organoids from Two-Dimensional Cell Cultures Using a Novel Stamp Device

El cultivo celular utilizado en este estudio se derivó de islotes pancreáticos porcinos. La preparación de los islotes utilizada en este estudio tuvo una pureza del 80 ± 5% basada en la tinción con ditizona, y una viabilidad de las células de los islotes del &gt;80% basada en la detección de diacetato de fluoresceína en células vivas o yoduro de propidio en células muertas (el método fluorescente Live/Dead). Asegúrese de que la preparación de los islotes pancreáticos porcinos tenga al menos un 80 % de pureza (por ejemplo...

Generación de esferoides/organoides tridimensionales a partir de cultivos celulares bidimensionales utilizando un novedoso dispositivo de estampado

Three-dimensional (3D) cell cultures provide a more accurate representation of the in vivo microenvironment than conventional two-dimensional (2D) ...

generation-three-dimensional-spheroidsorganoids-from-two-dimensional

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Se describe un método simple, rápido de generación de 3D, como los tejidos esferoides y su potencial aplicación para cuantificar las diferencias en las interacciones célula-célula.

Una simple gota colgante celular Cultura Protocolo para la generación de esferoides 3D

Los esferoides son un tipo de modelo de cultivo celular en 3D que se utiliza para representar con mayor precisión el entorno de una célula en comparación con los modelos monocapa de cultivo celular en 2D. En el protocolo de ejemplo, veremos a los científicos generar esferoides a partir de una línea celular de cáncer colorrectal y aplicar imágenes de células vivas para rastrear el crecimiento de los esferoides.

Generación de esferoides a partir de líneas celulares: un método de cultivo celular tridimensional (3D)

Este video demuestra la transformación de células madre pluripotentes humanas (hPSCs) en organoides cerebrales esféricos. Mediante el uso de inhibidores específicos, las hPSCs son guiadas para diferenciarse hacia un linaje neuronal, formando colonias neuroectodérmicas. A continuación, se introducen factores de crecimiento especiales, que fomentan la autoorganización y la proliferación de las colonias, lo que en última instancia conduce a la formación de organoides cerebrales esféricos.

Generación de esferoides a partir de células madre pluripotentes humanas

Presentamos un dispositivo microfluídico centrífugo motorizado que puede cultivar esferoides celulares. Usando este dispositivo, los esferoides de uno o varios tipos de células podrían ser fácilmente cocultivos bajo condiciones de alta gravedad.

Plataforma Lab-on-a-CD para generar esferoides tridimensionales multicelulares

Aquí, proporcionamos protocolos detallados, robustos y complementarios para realizar imágenes de tinción y resolución subcelular de modelos de cultivo celular tridimensionales fijos que van desde 100 μm hasta varios milímetros, lo que permite la visualización de su morfología, composición de tipo celular e interacciones.

Tinción e imágenes de alta resolución de modelos organoides y esferoides tridimensionales

El protocolo describe la generación de esferoides de alto rendimiento para la bioimpresión utilizando el análisis multiparamétrico de su oxigenación y muerte celular en un microscopio de fluorescencia estándar. Este enfoque se puede aplicar para controlar la viabilidad de los esferoides y realizar la estandarización, lo cual es importante en el modelado de tejido 3D, el microambiente tumoral y la biofabricación (micro) tisular exitosa.

Biofabricación asequible asistida por microscopía de oxígeno de esferoides multicelulares

Aquí, describimos la producción a gran escala de esferoides estromales /células madre (ASC) derivados de tejido adiposo utilizando un sistema de pipeteo automatizado para sembrar la suspensión celular, asegurando así la homogeneidad del tamaño y la forma del esferoide. Estos esferoides ASC se pueden utilizar como bloques de construcción para enfoques de bioimpresión 3D.

Producción automatizada a gran escala de esferoides de células madre derivadas de tejido adiposo para bioimpresión 3D

El presente protocolo describe una técnica para producir esferoides tisulares a gran escala de forma rentable utilizando un dispositivo similar a un sello impreso en 3D.

Generación de esferoides de tejido a través de un dispositivo similar a un sello impreso en 3D

Este artículo presenta un protocolo de fabricación para un nuevo tipo de sustrato de cultivo con cientos de microcontenedores por mm2, en el que los organoides pueden ser cultivados y observados utilizando microscopía de alta resolución. También se detallan los protocolos de siembra celular e inmunotinción.

Una plataforma de alto rendimiento para el cultivo y la obtención de imágenes 3D de organoides

El presente estudio describe metodologías para cultivar, congelar, descongelar, procesar, teñir, etiquetar y examinar esferoides y organoides completos bajo varios microscopios, mientras permanecen intactos en un hidrogel dentro de un dispositivo multipropósito.

Cultivo, congelación, procesamiento e imágenes de organoides y esferoides completos mientras aún están en un hidrogel

Aprende a generar esferoides y organoides tridimensionales mediante un sistema de micropocillos en moldes de agarosa. Este método rentable mejora las interacciones celulares y reduce la variabilidad experimental en cultivos 3D.

Generación de esferoides/organoides tridimensionales a partir de cultivos celulares bidimensionales utilizando un novedoso dispositivo de estampado (Video) | JoVE Journal

Generación de esferoides/organoides tridimensionales a partir de cultivos celulares bidimensionales utilizando un novedoso dispositivo de estampado

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