Name: Protocolo de inyección directa del nervio vago para ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Aprende el protocolo de inyección directa en el nervio vago de ratas para terapia génica. Este método permite la administración precisa de vectores AAV9 en estudios preclínicos del sistema nervioso autónomo.

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<ol><li>Fischer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+injection+into+the+dorsal+root+ganglion%3A+Technical%2C+behavioral%2C+and+histological+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct injection into the dorsal root ganglion: Technical, behavioral, and histological observations.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 43-55 (2011).</li>
<li>O'donnell, M., Fontaine, A., Caldwell, J., Weir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+dorsal+root+ganglia+%28drg%29+injection+in+mice+for+analysis+of+adeno-associated+viral+%28AAV%29+gene+transfer+to+peripheral+somatosensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct dorsal root ganglia (drg) injection in mice for analysis of adeno-associated viral (AAV) gene transfer to peripheral somatosensory neurons.</a> J Neurosci Methods. 411, 110268(2024).</li>
<li>Puljak, L., Kojundzic, S. L., Hogan, Q. H., Sapunar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+pharmacological+agents+into+rat+dorsal+root+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of pharmacological agents into rat dorsal root ganglion.</a> J Neurosci Methods. 177 (2), 397-402 (2009).</li>
<li>Rueter, L. E., Kohlhaas, K. L., Curzon, P., Surowy, C. S., Meyer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+and+central+sites+of+action+for+a-85380+in+the+spinal+nerve+ligation+model+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Peripheral and central sites of action for a-85380 in the spinal nerve ligation model of neuropathic pain.</a> Pain. 103 (3), 269-276 (2003).</li>
<li>Ulusoy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-to-neuron+alpha-synuclein+propagation+in+vivo+is+independent+of+neuronal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Neuron-to-neuron alpha-synuclein propagation in vivo is independent of neuronal injury.</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 13(2015).</li>
<li>Helwig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+propagation+of+transduced+alpha-synuclein+involves+non-fibrillar+protein+species+and+is+enhanced+in+alpha-synuclein+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Brain propagation of transduced alpha-synuclein involves non-fibrillar protein species and is enhanced in alpha-synuclein null mice.</a> Brain. 139 (Pt 3), 856-870 (2016).</li>
<li>Chiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+suprachoroidal-to-optic-nerve+%28scone%29+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Development of a novel suprachoroidal-to-optic-nerve (scone) drug delivery system.</a> Drug Deliv. 31 (1), 2379369(2024).</li>
<li>Ferrari, L. F., Cunha, F. Q., Parada, C. A., Ferreira, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+to+perform+direct+intraganglionar+injections+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel technique to perform direct intraganglionar injections in rats.</a> J Neurosci Methods. 159 (2), 236-243 (2007).</li>
<li>Yuan, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+injection+of+lumbar+dorsal+root+ganglia+under+direct+vision%3A+Relevant+anatomy%2C+protocol%2C+and+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rapid injection of lumbar dorsal root ganglia under direct vision: Relevant anatomy, protocol, and behaviors.</a> Front. Neurol. 14, 1138933(2023).</li>
<li>Mason, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+AAV+serotypes+for+gene+delivery+to+dorsal+root+ganglion+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Comparison of AAV serotypes for gene delivery to dorsal root ganglion neurons.</a> Mol Ther. 18 (4), 715-724 (2010).</li>
<li>Arjomandnejad, M., Dasgupta, I., Flotte, T. R., Keeler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+recombinant+adeno-associated+virus+%28AAV%29+vectors+for+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22BioDrugs%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of recombinant adeno-associated virus (AAV) vectors for gene transfer.</a> BioDrugs. 37 (3), 311-329 (2023).</li>
<li>Ertl, H. C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+and+toxicity+of+AAV+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity and toxicity of AAV gene therapy.</a> Front Immunol. 13, 975803(2022).</li>
<li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+permanent+distal+middle+cerebral+with+common+carotid+artery+occlusion+in+aged+rats+to+study+cortical+ischemia+with+sustained+disability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing permanent distal middle cerebral with common carotid artery occlusion in aged rats to study cortical ischemia with sustained disability.</a> J Vis Exp. (108), e53106(2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD&nbsp; Jeringa de tuberculina con desmontable 25 G x 5/8". Aguja</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>SKU:309626</td><td>Se utiliza para conectar con una aguja curva para tirar del nervio vago y sostenerlo en el momento de la inyección.</td></tr><tr><td>Inyección de clorhidrato de bupivacaína al 0,5%</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409-1162-19</td><td>Anestésicos locales utilizados para anestesiar el tejido local.</td></tr><tr><td>100 mL 0.9% Cloruro de Sodio Irrigación USP</td><td>Stericare Solutions</td><td>Artículo #6240</td><td>Solución salina normal, utilizada para rehidratar ratas y tejidos.</td></tr><tr><td>20 puntas romos, retractoras, 7.5 mm</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5018</td><td>Se utiliza para separar y sostener tejidos en el momento de la cirugía.</td></tr><tr><td>Jeringa BD-Luer-Lok de 3 ml, estéril, de un solo uso&nbsp;</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>SKU # 309657</td><td>Se utiliza para inyectar solución salina en ratas y llenar la solución salina en el tubo de polietileno.</td></tr><tr><td>AK-Fluor10%</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-253-10</td><td>Colorante de fluoresceína visible dentro del nervio. Se utiliza para rastrear la fidelidad de la inyección.</td></tr><tr><td>Báscula para animales</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SCL 4000</td><td>Se utiliza para medir el peso corporal de la rata.</td></tr><tr><td>Guantes quirúrgicos Ansell ENCORE Perry Style 42 PF Guante</td><td>estéril Ansell</td><td>ASTM D3577</td>, <td>es utilizado en el momento de la cirugía por un cirujano.</td></tr><tr><td>Ungüento para lágrimas artificiales 3.5g</td><td>Pivetal</td><td>NDC 46066-753-55</td><td>Se utiliza en los ojos para prevenir la sequedad excesiva de los ojos.</td></tr><tr><td>Hemostático Baby-Myxter&nbsp;</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>13013-14</td><td>Se utiliza para detener el sangrado en caso de emergencia. También se utiliza para doblar la aguja de 25 G x 5/8".</td></tr><tr><td>Tubo de PE BD Intramedic</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>14-170-12A</td><td>Se utiliza en el sistema de configuración de inyección para conectar con la aguja Hamilton y las agujas NanoFil. También contiene la mezcla de inyección.</td></tr><tr><td>Aguja deslizante BD Precison, 25 G x 5/8"</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>Se utiliza para inyectar solución salina en ratas y para hacer una aguja curva.</td></tr><tr><td>Aguja deslizante BD Precisionn, 27 G x &frac12; "</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#301629</td><td>Se utiliza para llenar solución salina estéril en el tubo BD Intradérmico.</td></tr><tr><td>Benchmark Accuris " SiguientePette" El set de inicio de pipeta de volumen variable Micro incluye 4 pipetas: 10/20/200/1000 &mu; L, más soporte</td><td>MilliporeSigma</td><td>BMSP7700S1</td><td>Se utiliza para pipetear la solución estéril.</td></tr><tr><td>Betadine, Povidina Yodada 10%&nbsp;</td><td>Honestmed</td><td>67618015017</td><td>Se utiliza para desinfectar el área quirúrgica.</td></tr><tr><td>Carprofeno Solución inyectable 50 mg/ml</td><td>Suministrado por Covtrus (6451506845)</td><td>SKU 591149</td><td>En nuestro caso, utilizamos carprofeno diluido a la dosis de 5 mg/kg proporcionada por el Centro de Recursos Animales del Centro Médico Southwestern de la Universidad de Texas.</td></tr><tr><td>Aguja curva (hecha a medida)</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>BD PrecisionGlide 25 G x 5/8" en la aguja está curvada a 90 grados con la ayuda de un hemostático. La punta de la aguja se roma. Debe esterilizarse antes de su uso. Se utiliza para enganchar el nervio vago y sujetarlo en el momento de la separación y la inyección.</td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Motic&nbsp;</td><td>SMZ-171-BLED (binocular con luces)</td><td>Se utiliza para ampliar el área anatómica crítica en el momento de la separación del nervio vago, la inyección y para verificar la fuga de la inyección.</td></tr><tr><td>Sábana de cortina&nbsp;</td><td>Dynarex</td><td>Reorder#8122</td><td>Utilizado como cortina después de la esterilización.</td></tr><tr><td>Aplicadores de punta de algodón Dukal, no estériles</td><td>Dukal</td><td>Artículo 9003</td><td>Se utiliza para suavizar la separación de tejidos, necesita esterilizar antes de usar.</td></tr><tr><td>Dumont #7 - Fórceps finos</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11274-20</td><td>Se utiliza para separar el nervio vago izquierdo de la arteria carótida común. Es curvo por lo que es fácil de usar.</td></tr><tr><td>Ethicon PDS II Sutura de monofilamento sin teñir - SUTURA, 4/0 18 PDS II CLR MONO PS</td><td>Ethicon</td><td>VA - Z682G</td><td>Se utiliza para suturar la herida.</td></tr><tr><td>Sutura de Nylon Ethilon Monofilamento Negro</td><td>Ethicon</td><td>1856G</td><td>Se utiliza para suturar la herida si se utiliza sutura no absorbente. También se usa para enganchar el diente de rata para fijar la nariz dentro del cono de la nariz.</td></tr><tr><td>Fórceps finos - Acabado de espejo</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11412-11</td><td>Utilizado en el momento de la separación del nervio vago de la arteria carótida común. Esto es directo.</td></tr><tr><td>Tijeras finas - Sharp</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td>Ued para cortar tejido.</td></tr><tr><td>Solución de limpieza</td><td>Hamilton Hamilton</td><td>HT18311</td><td>Se utiliza para limpiar el Hamilton después de su uso.</td></tr><tr><td>Aguja Hamilton, 27G, Aguja RN de cubo pequeño, 2", PT3, 6/PK</td><td>Hamilton</td><td>7762-01</td><td>Utilizado para conectar BD Intramedic&trade; Tubería de PE.</td></tr><tr><td>Jeringa Hamilton, 710RN&nbsp;</td><td>Hamilton</td><td>7638-01</td><td>Se utiliza para sostener el fármaco en el momento de la inyección del nervio vago.</td></tr><tr><td>Jeringa de insulina</td><td>EXEL INT, punto de confort</td><td>REF 26027</td><td>Se utiliza para inyectar carprofeno y anestésicos locales.</td></tr><tr><td>Lidocaína 2% Inyección</td><td>Covetrus</td><td>Reorder#002468</td><td>Se utiliza para mezclar con bupivacaína e inyectar en el sitio de la incisión.</td></tr><tr><td>Luxol Fast Blue MBSN</td><td>Acros Organics</td><td>212170250</td><td>tinte visible dentro del nervio, utilizado para mezclar con el medicamento para que la mezcla de inyección sea visible.</td></tr><tr><td>Esterilizador de microperlas con perlas de vidrio</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>Artículo No. 18090-46</td><td>Se utiliza para esterilizar herramientas quirúrgicas entre la cirugía de ratas.</td></tr><tr><td>Agujas NanoFil-NF35BV-2&nbsp;</td><td>Instrumento de precisión mundial</td><td>NC9708956</td><td>Se utiliza para inyectar una mezcla de drogas y tintes dentro del nervio vago.</td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Porta agujas con cortadores de sutura</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>12002-12</td><td>Utilizado en sutura de heridas.</td></tr><tr><td>Película de envoltura de laboratorio Parafilm M, 4 pulgadas x 125 pies, 1 rollo por caja, 12 unidades</td><td>Honestmed</td><td>PM#996</td><td>Se utiliza para sostener los 5 uL de mezcla de fármaco-colorante para que la carga de la mezcla de fármaco-colorante en el tubo intradérmico BDTM sea precisa.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Almohadillas de preparación con alcohol PDI</td><td>Honestmed</td><td>NDC 10819-3914-2</td><td>Se utilizan para desinfectar el área quirúrgica.</td></tr><tr><td>Esponjas de gasa tipo VII estériles de Premium Care, 8 capas, 2" x 2"</td> <td>Artículo Dukal</td><td>C5119</td><td>Usado como cushon debajo del cuello de la rata en el momento de la cirugía.</td></tr><tr><td>Prensa' n Película adhesiva de sellado</td><td>Glad</td><td></td><td>Se usa para cubrir una rata en el momento de la cirugía como una cortina.</td></tr><tr><td>Juego de retractor de ratas</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5002</td><td>Se utiliza para mantener la incisión abierta para que sea fácil separar el nervio vago de la arteria carótida.</td></tr><tr><td>RightTemp Jr.</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td></td><td>20,3 cm de ancho x 25,4 cm de largo (8 pulgadas de ancho x 10 pulgadas de largo), utilizado para mantener calientes a las ratas.</td></tr><tr><td>S& T Fórceps - Puntas SuperGrip</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>00632-11</td><td>Se utilizan en el momento de la sutura para sujetar el tejido sin dañarlo.</td></tr><tr><td>S& Pinzas para atar suturas T</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>00272-13</td><td>Se utiliza para apretar la sutura.</td></tr><tr><td>Hoja de bisturí #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td>Se utiliza para hacer una incisión en la piel en el lado ventral del cuello.</td></tr><tr><td>Mango de bisturí-#7</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>10007-12</td><td>Se utiliza para sostener la hoja del bisturí.</td></tr><tr><td>Bomba de jeringa</td><td> KD Scientific</td><td>78-81-8052GL</td><td>&nbsp; La #D107034 en serie, modelo # LEGATO-180, es una bomba programable que puede bombear un pequeño volumen de mezcla bajo un programa.</td></tr><tr><td>Boquilla de filtro TipOne Sistemas de recarga de recarga de sistemas</td><td>de inicio USA Scientific</td><td>Artículo #1120-3510</td><td>Utilizado para pipetear la mezcla de fármaco y tinte.</td></tr><tr><td>Vaporizador para isoflurano, lleno de embudo</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Vetflow 1231</td><td>Utilizado para anestesiar ratas.</td></tr><tr><td>Adhesivos tisulares Vetbond</td><td>3M Science Applied to Life</td><td>ID B00016067</td><td>Se utiliza para sellar tejido en el sitio de la herida cortada si la sutura no es perfecta.</td></tr><tr><td>Kit de cortadora inalámbrica profesional Wahl BravMini+</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>CL7300-Kit</td><td>Utilizado para cortar el pelo de rata.</td></tr></tbody></table>

protocolo de inyección directa del nervio vago para ratas

Direct Vagus Nerve Injection Protocol For Rats

En el presente estudio se utilizaron seis ratas adultas (3 machos y 3 hembras). De las seis, una rata fue inyectada varias veces para demostrar una condición de falla en la inyección que muestra una difusión de tinte alrededor del sitio de inyección Figura 5A. Todas las demás ratas mostraron una inyección suave y tinción nerviosa, como se muestra en la Figura 4B y la Figura 5B.
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Protocolo de inyección directa del nervio vago para ratas

There is a relative abundance of strategies and methodologies to facilitate drug delivery to the central nervous system. However, drug delivery directly ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

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