Name: Método novedoso y eficiente para la tinción de fluorescencia cardíaca de Drosophila con criosección (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Aprende un método optimizado de inmunohistoquímica fluorescente para corazones de Drosophila mediante criosección. Esta técnica mejora la preservación tisular y la resolución de imagen, facilitando la detección de múltiples proteínas cardíacas.

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<ol><li>Baker, K. D., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+larvae+and+obese+flies-emerging+studies+of+metabolism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Diabetic larvae and obese flies-emerging studies of metabolism in Drosophila.</a> Cell Metab. 6 (4), 257-266 (2007).</li>
<li>Bhide, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+autophagy+and+blocking+Nrf2+suppress+laminopathy-induced+age-dependent+cardiac+dysfunction+and+shortened+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Increasing autophagy and blocking Nrf2 suppress laminopathy-induced age-dependent cardiac dysfunction and shortened lifespan.</a> Aging Cell. 17 (3), e12747(2018).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342 (1), 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R., Venkatesh, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+development+in+Drosophila+and+vertebrates%3A+conservation+of+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genet%22%5BJournal%5D)">Heart development in Drosophila and vertebrates: conservation of molecular mechanisms.</a> Dev Genet. 22 (3), 181-186 (1998).</li>
<li>Gill, S., Le, H. D., Melkani, G. C., Panda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-restricted+feeding+attenuates+age-related+cardiac+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Time-restricted feeding attenuates age-related cardiac decline in Drosophila.</a> Science. 347 (6227), 1265-1269 (2015).</li>
<li>Melkani, Y., Pant, A., Guo, Y., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+assessment+of+cardiac+dynamics+in+aging+and+dilated+cardiomyopathy+Drosophila+models+using+machine+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated assessment of cardiac dynamics in aging and dilated cardiomyopathy Drosophila models using machine learning.</a> Commun Biol. 7 (1), 702(2024).</li>
<li>Ocorr, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+potassium+channel+mutations+cause+cardiac+arrhythmias+in+Drosophila+that+mimic+the+effects+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (10), 3943-3948 (2007).</li>
<li>Piazza, N., Wessells, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+of+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila models of cardiac disease.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 100, 155-210 (2011).</li>
<li>Wolf, M. J., Rockman, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+genetic+screens%2C+and+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Drosophila, genetic screens, and cardiac function.</a> Circ Res. 109 (7), 794-806 (2011).</li>
<li>Lee, J. H., Bassel-Duby, R., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart-and+muscle-derived+signaling+system+dependent+on+MED13+and+Wingless+controls+obesity+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Heart-and muscle-derived signaling system dependent on MED13 and Wingless controls obesity in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci. 111 (26), 9491-9496 (2014).</li>
<li>Adams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+sequence+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The genome sequence of Drosophila melanogaster.</a> Science. 287 (5461), 2185-2195 (2000).</li>
<li>Rotstein, B., Paululat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+morphology+of+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Dev+Dis%22%5BJournal%5D)">On the morphology of the Drosophila heart.</a> J Cardiovasc Dev Dis. 3 (2), 15(2016).</li>
<li>Alayari, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+labeling+of+Drosophila+heart+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Fluorescent labeling of Drosophila heart structures.</a> J Vis Exp. (32), e1423(2009).</li>
<li>Guo, Y., Abou Daya, F., Le, H. D., Panda, S., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+expression+of+Dgat2+induced+by+time%E2%80%90restricted+feeding+maintains+cardiac+health+in+the+Drosophila+model+of+circadian+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Diurnal expression of Dgat2 induced by time‐restricted feeding maintains cardiac health in the Drosophila model of circadian disruption.</a> Aging Cell. 23 (7), e14169(2024).</li>
<li>Melkani, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huntington%27s+disease-induced+cardiac+amyloidosis+is+reversed+by+modulating+protein+folding+and+oxidative+stress+pathways+in+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Huntington's disease-induced cardiac amyloidosis is reversed by modulating protein folding and oxidative stress pathways in the Drosophila heart.</a> PLoS Genet. 9 (12), e1004024(2013).</li>
<li>Hartley, P. S., Coward, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+podocyte+biology+using+Drosophila+nephrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Modeling podocyte biology using Drosophila nephrocytes.</a> Methods Mol Biol. 2067, 11-24 (2020).</li>
<li>Watson, J. R., Roth, J., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+cryosectioning+of+Drosophila+heads+for+enhanced+Brain+Fluorescence+Staining+and+Immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Direct cryosectioning of Drosophila heads for enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining.</a> J. Vis. Exp. , Press e67791(2025).</li>
<li>Kelso, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flytrap%2C+a+database+documenting+a+GFP+protein%E2%80%90trap+insertion+screen+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Flytrap, a database documenting a GFP protein‐trap insertion screen in Drosophila melanogaster.</a> Nuc Acids Res. 32 (suppl_1), D418-D420 (2004).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Mery, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+muscle+LIM+protein%2C+Mlp84B%2C+is+essential+for+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function.</a> J Exp Biol. 211 (1), 15-23 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 y micro; L Pipeta</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 &micro; L Puntas de pipeta</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>Etanol de 200 pruebas</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Solución salina tamponada</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877. K2</td><td>pH = 7.4</td></tr><tr><td>Vidrio estabilizador</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina de suero bovino</td><td>Fisher</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga 1,5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos cargados</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>Moldes de criosección</td><td>Fisher</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S Cuchillas</td><td></td></tr><tr><td>de criostato</td><td>C.L. Sturkey</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>Hielo seco</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzas finas</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla para moscas</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr><td>Endurecimiento Medios de montaje con Dapi</td><td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Temperatura óptima de corte compuesto</td><td>Fisher</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído 20%</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Faloidina 594</td><td>Abnova</td><td>U0292</td><td></td></tr><tr><td>Hojas de afeitar</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Fisher</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

método novedoso y eficiente para la tinción de fluorescencia cardíaca de drosophila con criosección

Novel And Efficient Method for Drosophila Heart Fluorescence Staining with Cryosectioning

El método descrito anteriormente facilita el estudio del corazón de Drosophila mediante imágenes de fluorescencia sin disección tediosa. Este es el principal beneficio de este método, ya que el método convencional de disección cardíaca requiere el desarrollo de habilidades motoras complejas. Como se ilustra en la Figura 1, el método es más accesible que la disección cardíaca para los nuevos investigadores y permite la flexibilidad del experimento. Alternativamente, utilizando el alm...

Método novedoso y eficiente para la tinción de fluorescencia cardíaca de Drosophila con criosección

Drosophila heart models are widely employed in studying cardiac aging and modeling&#160;human cardiac diseases. However, the dissection of Drosophila ...

Mi laboratorio de investigación utiliza el modelo de Drosophila para estudiar el envejecimiento y los trastornos metabólicos, explorando la alimentación restringida en el tiempo y el ejercicio como intervención para las enfermedades metabólicas, cardíacas, del sueño y otras enfermedades del envejecimiento. El aprendizaje automático y la ómica con estrategia fisiológica, genética y nutricional están optimizando el ensayo de Drosophila utilizando dispositivos impresos en 3D y enfoques de aprendizaje automático. La inmunohistoquímica fluorescente de los corazones de Drosophila permite la detección de múltiples proteínas en todos los genotipos y edades, pero se enfrenta a desafíos como disecciones complejas, preservación de tejidos e imágenes de alta resolución de patrones de expresión de proteínas específicas.Este protocolo mejora la preservación de tejidos, la penetración de anticuerpos y la resolución de las imágenes, lo que permite una mejor visualización de los marcadores de proteínas cardíacas. Aborda desafíos como la disección compleja, el daño tisular y la resolución limitada en el método tradicional de montaje de corazón entero. Este protocolo mejora la accesibilidad a la inve

novel-efficient-method-for-drosophila-heart-fluorescence-staining

Research

Investigación

JoVE Journal

Genetics

Genética

Aquí se describe un protocolo básico para el marcaje fluorescente de diferentes elementos de los tubos de corazón de la larva y el...

Marcaje fluorescente de Drosophila Estructuras del Corazón

Se describe un proceso para la fijación, inclusión, corte, y las imágenes de la etapa...

Preparación de embriones para Microscopía Electrónica de la Drosophila Tubo cardíaco embrionario

Se describe un protocolo eficiente para la generación de "filete" los preparativos de los embriones de Drosophila de genotipos específicos. Este protocolo permite la ejecución eficiente de una variedad de exámenes genéticos. También permite una excelente visualización de las estructuras en el embrión tarde.

La disección en vivo de Drosophila Los embriones: métodos simplificados para la detección colecciones mutantes tinción con anticuerpos

Identificación de los mecanismos que subyacen a daño muscular es crucial. Aquí se presenta la técnica histológica para la preparación de parafina y las secciones congeladas de los músculos torácicos Drosophila. Esto permite el análisis de la morfología del músculo y la localización de las proteínas y otros componentes de la célula muscular.

Las secciones incluidas en parafina y congeladas de Drosophila Los músculos de Adultos

Aquí se describe un fluorescente de todo el...

Todo el monte ARN fluorescente<em&gt; In situ</em&gt; La hibridación de<em&gt; Drosophila</em&gt; Los embriones

La inmunotinción es una técnica eficaz para visualizar tipos específicos de células y proteínas dentro de los tejidos. Al utilizar la sonicación, el protocolo descrito aquí alivia la necesidad de diseccionar tejidos de Drosophila melanogaster de embriones y larvas en fase avanzada antes de la inmunotinción. Proporcionamos una metodología eficiente para la inmunotinción de larvas enteras fijadas en formaldehído.

La sonicación-facilitado Inmunofluorescencia tinción de etapa tardía embrionario y larval<em&gt; Drosophila</em&gt; Tejidos<em&gt; In Situ</em

Describimos un protocolo para obtener imágenes volumétricas de células marcadas con proteínas fluorescentes en el interior de corazones embrionarios y postnatales intactos. Utilizando métodos de limpieza de tejidos en combinación con la tinción de montaje completo, se pueden obtener imágenes claras y precisas de células marcadas con proteínas fluorescentes individuales dentro de un corazón embrionario o posnatal.

Borrado de imágenes embrionario y postnatal Corazones en la Resolución de celda única

Aquí, describimos un protocolo para la detección y localización de la proteína embrionaria de Drosophila y el ARN desde la recolección hasta la preincrustación e incrustación, la inmunotinción y la hibridación in situ de ARNm.

Un protocolo para la inmunohistoquímica y la distribución in situ de ARN dentro del embrión temprano de Drosophila

La hibridación in situ iterativa de fluorescencia asistida por expansión (EASI-FISH) es una técnica robusta que combina la microscopía de expansión con la hibridación in situ de fluorescencia (FISH) para detectar la expresión de múltiples genes en tejido grueso. Este protocolo describe los avances recientes en el método y su adaptación para etiquetar el sistema nervioso central intacto de Drosophila.

Detección múltiple de la expresión génica en el cerebro intacto de Drosophila mediante hibridación in situ de fluorescencia iterativa asistida por expansión

Este estudio presenta un protocolo simplificado para el procesamiento de tejidos que involucra decapitación, fijación, criosección, tinción de fluorescencia, inmunotinción e imágenes, que puede extenderse a imágenes confocales y multifotónicas. El método mantiene una eficacia comparable a las disecciones complejas, evitando la necesidad de habilidades motoras avanzadas. El análisis cuantitativo de imágenes ofrece un amplio potencial de investigación.

Criosección directa de cabezas de Drosophila para mejorar la tinción de fluorescencia cerebral y la inmunotinción

Aprende un método optimizado de inmunohistoquímica fluorescente para corazones de Drosophila mediante criosección. Esta técnica mejora la preservación tisular y la resolución de imagen, facilitando la detección de múltiples proteínas cardíacas.

Método novedoso y eficiente para la tinción de fluorescencia cardíaca de Drosophila con criosección

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