Name: Análisis de Expresión Oncogénica con Alteraciones en el pH en una Línea Celular Ductal Pancreática (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Aprende cómo el pH alterado afecta la expresión de oncogenes en células ductales pancreáticas mediante análisis de RNA-seq. Este método revela vínculos entre ambientes ácidos y oncogénesis en adenocarcinoma ductal pancreático.

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<ol><li>Franck, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%3A+Moving+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Advanced pancreatic ductal adenocarcinoma: Moving forward.</a> Cancers (Basel). 12 (7), 1955(2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubos de centrífuga graduados de 15 mL (Falcon) &nbsp;</td><td>Tarsons&nbsp;</td><td>500031</td><td>utiliza para la preparación de muestras&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga graduados de 50 mL (Falcon)</td><td>Tarsons&nbsp;</td><td>500041</td><td>utiliza para la preparación de muestras&nbsp;</td></tr><tr><td>Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer</td><td>Agilent</td><td>Agilent G2938A</td><td>Instrumento para la evaluación de la calidad del ARN&nbsp;</td></tr><tr><td>Solución antibiótica antimicótica 100x líquido</td><td>Himedia</td><td>A002-100 mL</td><td>Se utiliza para prevenir la contaminación&nbsp;</td></tr><tr><td>Raspador de células con cuchilla giratoria</td><td>Himedia&nbsp;</td><td>TCP223</td><td>Raspado y recogida de las células</td></tr><tr><td>CO2 incubadora&nbsp;</td><td>New Brunswick</td><td>Galaxy 170 S</td><td>Utilizado para incubar el cultivo&nbsp;</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), alto contenido de glucosa&nbsp;</td><td>Himedia</td><td>AL007S-500 mL</td><td>Medio utilizado para el cultivo de las células</td></tr><tr><td>Fosfato de Dulbecco Solución salina tamponada 1x</td><td>Himedia</td><td>TL1006-500mL lavado de</td><td>células</td></tr><tr><td>Galaxy&nbsp;</td><td>(https://usegalaxy.org)</td><td></td><td>Herramienta en línea para el procesamiento de datos de NSG&nbsp;</td></tr><tr><td>HI FBS (origen: Australia)</td><td>Gibco</td><td>10100-147</td><td>Utilizado para el crecimiento de células&nbsp;</td></tr><tr><td>Línea celular epitelial ductal pancreática humana (HPDEC/ H6C7)</td><td>Addex Bio T0018001</td><td></td><td>línea celular ductal pancreática</td></tr><tr><td>Ion Total RNA-Seq Kit v2</td><td>Thermo fisher Scientific</td><td>4475936</td><td>Kit de preparación de muestras de ARN</td></tr><tr>Flujo <td></td><td></td><td></td>de<td>aire laminar</td></tr><tr><td>Na2HPO4 Diabasic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3264-250G</td><td>Fosfato de sodio Preparación de tampones&nbsp;</td></tr><tr><td>NaH2PO4 Monobásico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3139-250G</td><td>Preparación de tampón de fosfato de sodio&nbsp;</td></tr><tr><td>Secuenciador de 3376672 NovaSeq 6000</td><td>Illumina</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Nunclon Delta Surface (placa de 6 pocillos)</td><td>Thermo Scientific</td><td>140675</td><td>Cultivo de las células&nbsp;</td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada de sobremesa</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>Sorvall ST 8R</td><td>Se utiliza para la centrifugación</td></tr><tr><td>RiboMinus Eukaryote System v2</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>A15026</td><td>rRNA depletion kit&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit Rneasy Mini&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>Kit para aislar el ARN total de las células&nbsp;</td></tr><tr><td>Termociclador</td><td>Eppendorf</td><td>E950040025</td><td>reacción PCR&nbsp;</td></tr><tr><td>Baño de agua&nbsp;</td><td>Equitron</td><td>#8406M</td><td>Descongelación de la muestra</td></tr></tbody></table>

análisis de expresión oncogénica con alteraciones en el ph en una línea celular ductal pancreática

Oncogene Expression Analysis with Alterations in pH in a Pancreatic Ductal Cell Line

Cambios morfológicos La incubación de células ductales pancreáticas humanas en un medio ácido alteró la morfología de las células. Un patrón celular confluente y muy apretado dio como resultado células dispersas en condiciones ácidas, y la muerte celular se vuelve prominente con el tiempo. En comparación con las células normales que contienen medio, las células ductales se encogieron y disminuyeron de tamaño. Se observó un cambio drástico en la tasa de mortalidad después de 6 h de incubación. Después ...

Análisis de Expresión Oncogénica con Alteraciones en el pH en una Línea Celular Ductal Pancreática

The fourth leading cause of cancer-related death, pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), has a 12% five-year survival rate. This disease has a poor ...

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Investigación

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Cancer Research

Investigación del cáncer

Una mejor comprensión de la biología del cáncer de páncreas es una necesidad vital para permitir el desarrollo de mejores opciones terapéuticas para el tratamiento de cáncer de páncreas. Para hacer frente a esta necesidad, se demuestra un modelo ortotópico de cáncer de páncreas que permite la monitorización no invasiva de la progresión del cáncer...

Modelo ortotópico bioluminiscente de la progresión del cáncer de páncreas

A continuación, describimos un método para el aislamiento de células en el microambiente de páncreas, tejido de ratón neonatal y adulto embrionario, centrándose en el aislamiento de las células mesenquimales. Este método permite que los perfiles de expresión génica de células y la secreción de proteínas con el fin de dilucidar las señales extrínsecas que regulan el desarrollo del páncreas, la función y la tumorigénesis.

Aislar y analizar células del páncreas mesénquima por Citometría de Flujo

Aislamiento primario de la célula acinar, la modulación de actividad o expresión de la proteína, cultura y últimas aplicaciones son muy útiles en el ex estudio vivo de metaplasia acinar ductal (ADM), un evento temprano en el desarrollo de cáncer de páncreas.

Imitando y manipulando Metaplasia pancreática Acinar Ductal en cultivo celular 3-dimensional

Este protocolo utiliza una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) basada en sondas en tiempo real, un ensayo de sulforhodamine B (SRB), 3' regiones no traducidas (3' UTR) clonación, y un ensayo de luciferasa para verificar los genes diana de un miRNA de interés y para entender las funciones de los miRNAs.

Un protocolo in vitro para evaluar los niveles, funciones y genes objetivo asociados de MicroRNA en células tumorales

Este artículo describe un método para identificar alteraciones clonales y subclonales entre diferentes especímenes de un paciente dado. Aunque los experimentos descritos aquí se centran en un tipo de tumor específico, el enfoque es ampliamente aplicable a otros tumores sólidos.

Análisis comparativo de lesiones a través de un enfoque de secuenciación dirigida

Aquí presentamos un protocolo para probar la eficacia de las terapias dirigidas seleccionadas en base a la composición genómica de un tumor. El protocolo describe la identificación y validación de reordenamientos estructurales del ADN, injerto de tumores de los pacientes en ratones y pruebas de respuestas a los fármacos correspondientes.

Pruebas de terapias dirigidas en cáncer mediante análisis de alteración estructural del ADN y xenoinjertos derivados del paciente

El jugo pancreático es una fuente preciosa de biomarcadores para el cáncer de páncreas humano. Describimos aquí un método para el procedimiento de recolección intraoperatoria. Para superar el desafío de adoptar este procedimiento en modelos murinos, sugerimos una muestra alternativa, el líquido intersticial tumoral, y describimos aquí dos protocolos para su aislamiento.

Aislamiento de líquidos proximales para investigar el microambiente tumoral del adenocarcinoma pancreático

Las células metaplásicas pancreáticas son precursoras de células malignas que dan lugar a tumores pancreáticos. Sin embargo, aislar células pancreáticas viables intactas es un desafío. Aquí, presentamos un método eficiente para la disociación del tejido pancreático. A continuación, las células pueden utilizarse para la secuenciación de ARN unicelular (scRNA-seq) o para el cocultivo bidimensional o tridimensional.

Disección de tejido pancreático para aislar células individuales viables

El objetivo de este protocolo es determinar los niveles autofágicos en el cáncer de páncreas y las células acinares pancreáticas a través de la inmunofluorescencia LC3 y la cuantificación de puntos LC3.

Evaluación de los niveles de autofagia en dos modelos diferentes de células pancreáticas utilizando inmunofluorescencia LC3

El presente protocolo describe la reprogramación del adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) y las células epiteliales ductales pancreáticas normales en células madre pluripotentes inducidas (iPSC). Proporcionamos un procedimiento optimizado y detallado, paso a paso, desde la preparación de lentivirus hasta el establecimiento de líneas estables de iPSC.

Reprogramación del adenocarcinoma ductal de páncreas a pluripotencia

El cáncer de páncreas sigue siendo uno de los cánceres más difíciles de tratar. Por lo tanto, es fundamental que los modelos preclínicos que evalúan la eficacia del tratamiento sean reproducibles y clínicamente relevantes. Este protocolo describe un procedimiento simple de cocultivo para generar esferoides desmoplásticos reproducibles y clínicamente relevantes.

Cultivo de esferoides desmoplásicos tridimensionales de cáncer de páncreas a partir de cocultivo

Aprende cómo el pH alterado afecta la expresión de oncogenes en células ductales pancreáticas mediante análisis de RNA-seq. Este método revela vínculos entre ambientes ácidos y oncogénesis en adenocarcinoma ductal pancreático.

Análisis de Expresión Oncogénica con Alteraciones en el pH en una Línea Celular Ductal Pancreática

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