Modelo murino de periodontitis avanzada inducida por ligadura de nylon en el segundo molar superior

El alcance de nuestra investigación es estudiar los factores celulares y moleculares que favorecen la periodontitis, para lo cual utilizamos un modelo murino de periodontitis inducida por ligadura.

Investigaciones recientes han establecido la importancia de la inflamación. La disbiosis y las enfermedades sistémicas son factores determinantes en el desarrollo de la periodontitis.

La tecnología utilizada recientemente en periodoncia incluye modelos animales, algunos buscan diferentes moléculas, secuenciación proteómica, citometría de flujo e histología, entre otros.

Los desafíos experimentales actuales están relacionados con la comprensión de la interacción entre las enfermedades sistémicas y la periodontitis.

Utilizamos un modelo murino de periodontitis ligada para demostrar que la citoquina proinflamatoria A y S está involucrada en el desarrollo de la periodontitis durante el embarazo.

[Narrador] Para comenzar, coloque un mouse anestesiado en una mesa de trabajo hacia arriba con la cabeza dirigida hacia el operador. Tire suavemente de cada pierna sin tensión y asegúrelas con cinta microporosa para evitar movimientos involuntarios repentinos. Cubra al ratón con una manta o gasa para mantener su calor corporal. Coloque un extremo de un elástico de ortodoncia alrededor de los incisivos superiores y asegure el otro extremo a un soporte superior sin aplicar tensión. Luego coloque un segundo elástico de ortodoncia alrededor de los incisivos inferiores y asegúrelo a un soporte inferior con una banda elástica. Ahora inserte los separadores de mejillas y mueva con cuidado la lengua hacia un lado para mejorar la visibilidad. Coloque el microscopio para visualizar los molares superiores utilizando el objetivo de aumento más bajo. Una vez localizado, aumento aumentado para optimizar la comodidad y el enfoque para el operador. Cuando la imagen sea clara, identifique el molar M1 más grande y proximal, el siguiente molar M2 y el molar M3 más pequeño y distal. Use una sutura de nailon 6-0 para la colocación de ligaduras, ya que causa menos daño mecánico en comparación con las suturas más anchas. Con pinzas de tejido, sostenga la punta distal de la sutura de nailon 6-0 y colóquela en la base de la papila desde el lado palatino en la parte distal de M2. Aplique una ligera presión a través de la base del espacio palatino interproximal para avanzar hacia la superficie bucal. Cuando la sutura se cruce, tire de ella a través del espacio interproximal hacia el lado bucal. Ahora, coloque la punta de la sutura en la base del área interproximal en la superficie mesial de M2 desde el lado bucal. Empújelo suavemente para cruzar el espacio interproximal y páselo de regreso a través del espacio bucal hasta el palatino. Tire suavemente de la sutura de nailon 6-0. Sostenga la punta con pinzas de tejido ajustadas alrededor de M2 y asegure la sutura con tres nudos simples. Luego corta la sutura con unas tijeras finas. Para liberar el ratón, primero, retire el elástico alrededor de los incisivos inferiores y luego los separadores de las mejillas. Luego retire el elástico alrededor de los incisivos superiores y la cinta de microporos de las piernas. Ahora retire el ratón de la mesa de trabajo y mantenga la lengua hacia un lado para mantener las vías respiratorias abiertas y evitar la obstrucción. Envuelve el ratón en una gasa o tela y colócalo boca arriba. Mantenga al animal caliente, cubierto con un paño o gasa y bajo observación hasta que esté completamente despierto. Aplique una gota de hipromelosa en cada ojo hasta que el ratón pueda parpadear normalmente. Luego, devuélvalo a su jaula habitual. Para comprobar la permanencia de la ligadura, tome el ratón. Sostenga su cabeza y cuerpo con firmeza y use fórceps de tejido para abrir la boca. Bajo la luz de la lámpara, observe la sutura de nailon 6-0 alrededor de M2. Para la confirmación de la formación de biopelículas mediante histología, coseche los maxilos de animales sacrificados después de 30 días. Lave los pañuelos en una solución de cloruro de sodio al 0,9% y colóquelos en tubos de microcentrífuga etiquetados. Fije las muestras en una solución de paraformaldehído al 4% durante dos horas bajo agitación. Luego, lave las muestras fijadas con agua del grifo durante dos horas. A continuación, descalcificamos las muestras en 20 volúmenes de EDTA al 4% a pH 7,3 durante 20 días, cambiando el EDTA cada cuatro días. A continuación, incruste las muestras en parafina. Corte cinco secciones micrométricas del área M2 y tiña con hematoxilina y eosina. Observe las secciones teñidas bajo un microscopio óptico para describir los cambios en el epitelio del surco, las fibras gingivales y periodontales, la altura y la integridad de la cresta alveolar. Mida la pérdida de inserción determinando la distancia entre la unión del esmalte del cemento y el punto más alto de la cresta ósea utilizando un programa de edición digital. Después del análisis histométrico, analice los datos de los grupos de control y tratamiento periodontal utilizando la prueba U de Mann-Whitney. La periodontitis induce la pérdida de tejido en ratones, inflamación, sangrado y formación de bolsas periodontales en el margen gingival al día 30, en contraste con el grupo de control. El análisis histológico confirmó un daño estructural significativo en el grupo PT, con presencia de bolsas periodontales, desprendimiento de fibras y migración apical del epitelio. También se observó pérdida de núcleos celulares en la encía y el hueso de los lados bucal y palatino. Por el contrario, el grupo CTL mostró una histología saludable. El análisis cuantitativo reveló un aumento significativo de la pérdida de inserción en el grupo PT con pérdida del lado bucal de aproximadamente 209 micrómetros y del lado palatino de aproximadamente 254 micrómetros.