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Uso de ensamblaje in vivo para la construcción de plásmidos de alta eficiencia
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JoVE Journal Bioengineering
Use of In Vivo Assembly for High-efficiency Plasmid Construction

Uso de ensamblaje in vivo para la construcción de plásmidos de alta eficiencia

Full Text
1,548 Views
06:25 min
February 7, 2025

DOI: 10.3791/67870-v

Hannah G. Braun1, Jenny-Lee Thomassin1

1College of Medicine, Department of Biochemistry, Microbiology, and Immunology,University of Saskatchewan

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

El ensamblaje in vivo es un método de clonación independiente de la ligadura que se basa en enzimas intrínsecas de reparación del ADN en bacterias para ensamblar fragmentos de ADN por recombinación homóloga. Este protocolo es rentable y rentable, ya que se requieren pocos reactivos y la eficiencia de la clonación puede ser de hasta el 99 %.

Mi investigación doctoral se centra en el estudio de las proteínas que son secretadas por las bacterias. En concreto, quiero saber si algunas de estas proteínas secretadas son importantes para causar infecciones humanas. Un desafío importante al trabajar con bacterias clínicas recientemente aisladas es su resistencia a los antibióticos, lo que dificulta las técnicas de genética molecular que se basan en la selección de antibióticos, como las deleciones de genes y la complementación genética.

Este protocolo de clonación es más rápido y rentable, ya que IVA elimina la necesidad de enzimas especializadas y reacciones enzimáticas secuenciales para el ensamblaje de plásmidos antes de la transformación de E. coli. Para empezar, inicie un software especializado en análisis de ADN en un sistema informático. Ensamble artificialmente el plásmido deseado.

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Ensamblaje in vivo IVA clonación molecular construcción de plásmidos fragmentos de ADN Escherichia Coli reparación independiente de RecA métodos rentables subclonación marcadores de resistencia a antibióticos protocolo de ensamblaje

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