Name: Predicción de la importancia de los anticuerpos contra los glóbulos rojos mediante el ensayo de monocitos y macrófagos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Aprende el ensayo de monocitos y macrófagos para predecir la relevancia clínica de anticuerpos contra glóbulos rojos. Este método mejorado ofrece mayor sensibilidad que el ensayo tradicional de monocapas.

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<ol><li>Tong, T. N., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monocyte+monolayer+assay+to+evaluate+Fc%CE%B3+receptor-mediated+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of a monocyte monolayer assay to evaluate Fcγ receptor-mediated phagocytosis.</a> J Vis Exp. (119), e55039(2017).</li>
<li>Tong, T. N., Cen, S., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+monolayer+assay%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">The monocyte monolayer assay: Past, present and future.</a> Transfus Med Rev. 33 (1), 24-28 (2019).</li>
<li>Frias Boligan, K., Sandhu, G., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+the+potential+clinical+significance+of+antibodies+to+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate the potential clinical significance of antibodies to red blood cells.</a> Curr Protoc. 2 (8), e504(2022).</li>
<li>Lemay, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+case+of+severe+acute+hemolytic+transfusion+reaction+caused+by+anti-Sc2%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The first case of severe acute hemolytic transfusion reaction caused by anti-Sc2.</a> Transfusion. 58 (11), 2506-2512 (2018).</li>
<li>Tong, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+a+monocyte+monolayer+assay+in+the+assessment+of+intravenous+immunoglobulin-associated+hemolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The utility of a monocyte monolayer assay in the assessment of intravenous immunoglobulin-associated hemolysis.</a> Transfusion. 60 (12), 3010-3018 (2020).</li>
<li>Srivastava, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCAR%3A+the+high-prevalence+antigen+013.008+in+the+Scianna+blood+group+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">SCAR: the high-prevalence antigen 013.008 in the Scianna blood group system.</a> Transfusion. 61 (1), 246-254 (2021).</li>
<li>Branch, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+clinically+significant+anti-Dib+identified+by+monocyte+monolayer+assay+before+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Potentially clinically significant anti-Dib identified by monocyte monolayer assay before transfusion.</a> Transfusion. 61 (1), 331-332 (2021).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514(2014).</li>
<li>Mills, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages%3A+Oracles+of+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages: Oracles of health and disease.</a> Crit Rev Immunol. 32 (6), 463-488 (2012).</li>
<li>Atri, C., Guerfali, F. Z., Laouini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+macrophage+polarization+in+inflammation+during+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of human macrophage polarization in inflammation during infectious diseases.</a> Int J Mol Sci. 19 (6), 1801(2018).</li>
<li>Bertani, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+M1%2FM2-polarized+human+macrophages+by+label-free+hyperspectral+reflectance+confocal+microscopy+and+multivariate+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Classification of M1/M2-polarized human macrophages by label-free hyperspectral reflectance confocal microscopy and multivariate analysis.</a> Sci Rep. 7, 8965(2017).</li>
<li>Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Cohn, C., Delaney, M., Johnson, S. T., Katz, L. M., Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohn%2C+C+%22Technical+Manual%22">Technical Manual</a>. , 21st Ed, American Association for the Advancement of Blood and Biotherapeutics. Maryland, USA. (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1X PBS, pH 7.4, sin Ca2+/Mg2+</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>311-425-CL</td><td>Almacenar a 4 grados o temperatura ambiente&nbsp;</td></tr><tr><td>Tecnologías AccutaseTM</td><td>STEMCELL&nbsp;</td><td>7920</td><td>Solución de desprendimiento de células</td></tr><tr><td>ACK Lysis Buffer&nbsp;</td><td>Tecnologías STEMCELL&nbsp;</td><td>07850, 07800</td><td>Almacenar a 4 grados</td></tr><tr><td>Globulina antihumana</td><td>NOVACLONE, Immunocor.</td><td>N/A</td><td>NOVACLONE Anti-igG para pruebas de IAT&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-Rh(D) (WinRho. SDF CDN)</td><td>Saol Therapeutics&nbsp;</td><td>1003092</td><td>Cualquier fuente comercial de inmunoglobina Rh será suficiente&nbsp;</td></tr><tr><td>Raspador de células</td><td>UofT Medstore</td><td>83.395</td><td>desprendimiento de células&nbsp;</td></tr><tr><td>Filtro de celdas 70uM nylon</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>filtro de células&nbsp;</td></tr><tr><td>Corredera de cámara Nunc. Lab-TekTM II con cubierta, portaobjetos de vidrio RS estéril&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>154534</td><td>portaobjetos de cámara para MMA&nbsp;</td></tr><tr><td>Cubreobjetos&nbsp;</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td>24 x 50 mm</td></tr><tr><td>Cytiva Ficoll Paque Plus, densidad 1.077 g/L</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>17-1440-03</td><td>Separación de PBMCS a partir de sangre entera; medio de gradiente de densidad</td></tr><tr><td>Elvanol Medio de montaje</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Dulbecco' s PBS (D-PBS) sin Ca2+/Mg2+, 15% (p/v) de resina de polivinilo y 30% (v/v) de glicerina.</td></tr><tr><td>Sangre entera fresca (tubo ACD) o capa Buffy</td><td>Servicios Canadienses de Sangre</td><td></td><td>Puede descansar a temperatura ambiente hasta por 36 horas&nbsp;</td></tr><tr>Tecnologías de células madre <td>recombinantes humanas GM-CSF</td><td>&nbsp;</td><td>78015.1</td><td>Citocina para la polarización de macrófagos M1 Tecnologías de</td></tr><tr>células madre de<td>IFN-gamma recombinantes</td><td>humanas&nbsp;</td><td>78020</td><td>Citocina para la polarización de macrófagos M1</td></tr><tr><td>IL-4 recombinante humana</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>78045.1</td><td>Citocina para la polarización de macrófagos M2 Tecnologías de</td></tr><tr>células madre<td>m-CSF recombinantes</td><td>humanas&nbsp;</td><td>78057.1</td><td>Citocina para la polarización de macrófagos M2</td></tr><tr><td>ID-CellStab</td><td>Bio-Rad</td><td>005650 05740</td><td>Solución de almacenamiento/estabilización de células RBC&nbsp;</td></tr><tr><td>Medio de aislamiento&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PBS Libre de Ca2+ y Mg2+ + FBS 2% + 1mM EDTA</td></tr><tr><td>Lipopolisaaracida (LPS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3024-5MG</td><td>Citoquina para la polarización de macrófagos M1</td></tr><tr><td>Metanol (100%)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Fijación de portaobjetos&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit de aislamiento de monocitos Kit de enriquecimiento de monocitos humanos EasySep sin depleción de CD16&nbsp;</td><td>Tecnologías STEMCELL&nbsp;</td><td>19058</td><td>Aislamiento de monocitos de PBMCs</td></tr><tr><td>Poly-D-ysina&nbsp;</td><td>UofT Medstore &nbsp;</td><td>P6407</td><td>Solución de fijación de celdas&nbsp;</td></tr><tr><td>Rh(D) R2R2 positivo RBC Canadian</td><td>Blood Services</td><td>N/A</td><td>También disponible comercialmente</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>350-000-CL</td><td>suplementado con 10% de FBS inactivado por calor, 1 mM de suplemento de GlutaMAX, 1 mM de HEPES y 1% de penicilina/estreptomicina. Almacenar a 4 grados.</td></tr><tr><td>Solución de Trypan Blue &nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15250061</td><td>Solución de recuento de células&nbsp;</td></tr></tbody></table>

predicción de la importancia de los anticuerpos contra los glóbulos rojos mediante el ensayo de monocitos y macrófagos

Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay

Los resultados de la Figura 1 son consistentes con la literatura e indican una polarización exitosa de los macrófagos desde su estado M0 hasta su estado M1/M2 posterior. Los macrófagos M1 y M2 se cultivaron durante 8 días (6 días con factores de crecimiento y 2 días de polarización) y se probaron glóbulos rojos opsonizados anti-D o anti-k (Figura 2). Los macrófagos M2 muestran un alto índice fagocítico en comparación con los M1 con glóbulos rojo...

Predicción de la importancia de los anticuerpos contra los glóbulos rojos mediante el ensayo de monocitos y macrófagos

Derived from monocytes in the bone marrow, macrophages are large, innate immune cells that play a major role in clearing dead cells, debris, tumor cells, ...

prediction-red-blood-cell-antibody-significance-using-monocyte

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video muestra un ensayo de monocapa de monocitos que utiliza monocitos primarios de sangre periférica para evaluar la fagocitosis mediada por el receptor Fcγ con glóbulos rojos R2R2 opsonizados con anticuerpos poli D.

Un ensayo para el estudio de la fagocitosis impulsada por el receptor Fcγ en monocapas de monocitos

Macrófagos derivados de monocitos son células importantes del sistema inmune innato. A continuación, describimos un fácil de...

Un<em&gt; In vitro</em&gt; Modelo para estudiar la heterogeneidad de diferenciación de los macrófagos humanos y polarización

Este protocolo describe el uso de la espectrometría de masas MALDI-TOF de células enteras en células eucariotas. Aquí, ilustramos la precisión de esta técnica mediante el análisis de los múltiples estados de activación de los macrófagos en respuesta a su microentorno.

La espectrometría de masas MALDI-TOF de célula completa es un método preciso y rápido para analizar diferentes modos de activación de macrófagos

Aquí se describen dos ensayos para medir la activación del complemento inducida por anticuerpos contra las células rojas de la sangre. La principal ventaja sobre los ensayos actuales es su naturaleza cuantitativa y fácil de interpretar.

Los métodos para la detección cuantitativa de anticuerpos inducida por la activación del complemento en los glóbulos rojos

Se presenta un protocolo simple y eficiente para la generación de macrófagos humanos. Buffy abrigos son procesados ​​por doble centrifugación en gradiente de densidad y monocitos aislados se diferencian a continuación, a los macrófagos en bolsas de cultivo de células de teflón. Esto maximiza el rendimiento de los macrófagos y facilita la recolección de células para los experimentos posteriores.

Aislamiento de monocitos humanos por doble centrifugación en gradiente y su diferenciación a macrófagos en Bolsos Cultivo Celular recubiertos de teflón

El ensayo de monocapa de monocitos (MMA) es un ensayo in vitro que utiliza monocitos primarios aislados obtenidos de sangre periférica entera de mamíferos para evaluar la fagocitosis mediada por el receptor Fcγ (FcγR).

El uso de una monocapa de monocitos Ensayo para evaluar la fagocitosis mediada por el receptor Fc gamma

Este protocolo proporciona un análisis de las subpoblaciones de macrófagos en el sistema nervioso central del ratón adulto mediante citometría de flujo y es útil para el estudio de múltiples marcadores expresados ​​por estas células.

Análisis de microglia y macrófagos derivados de monocitos del sistema nervioso central por citometría de flujo

Aquí presentamos un protocolo para la caracterización de subconjuntos de monocitos por citometría de flujo de sangre. Esto incluye delineando cómo los subconjuntos de la puerta y evaluar su expresión de marcadores de superficie y dando un ejemplo de la evaluación de la expresión de marcadores de M2 (antiinflamatorio) y M1 (inflamatoria).

Caracterización de subconjuntos de monocitos humanos de sangre análisis de citometría de flujo

Aquí presentamos un protocolo para cuantificar la actividad quimiotáctica de los monocitos sanguíneos en modelos de ratón, para evaluar los efectos de las intervenciones nutricionales, farmacológicas y genéticas en los monocitos sanguíneos y para caracterizar los monocitos sanguíneos derivados de los macrófagos en modelos de ratón utilizando tapones de gel de membrana de sótano cargados de monocitos-quimioattractant-1 (MCP-1).

Cuantificación de la actividad quimiotáctica monocitos en Vivo y caracterización de los macrófagos derivados de monocitos sanguíneos

El uso de reactivos de referencia para el ensayo de liberación de citocinas permite obtener perfiles de seguridad in vitro más reproducibles y estandarizados de los anticuerpos monoclonales inmunoterapéuticos. En este artículo describimos cómo se pueden utilizar los ensayos de liberación de citocinas junto con un panel de reactivos de referencia para predecir la seguridad de algunos anticuerpos monoclonales terapéuticos.

Uso de reactivos de referencia para confirmar la solidez de los ensayos de liberación de citocinas para la predicción de la seguridad de los anticuerpos monoclonales

Los monocitos y macrófagos son células inmunitarias muy plásticas y reprogramables cruciales para la salud y la enfermedad. Perciben y responden a una amplia gama de estímulos mediante la adopción de programas de diferenciación y fenotipos específicos. Hemos estandarizado un modelo in vitro para estudiar la polarización y reprogramación de los macrófagos, proporcionando una herramienta valiosa para la investigación.

Modelo de reprogramación de macrófagos derivados de monocitos humanos para ensayos in vitro

Aprende el ensayo de monocitos y macrófagos para predecir la relevancia clínica de anticuerpos contra glóbulos rojos. Este método mejorado ofrece mayor sensibilidad que el ensayo tradicional de monocapas.

Predicción de la importancia de los anticuerpos contra los glóbulos rojos mediante el ensayo de monocitos y macrófagos

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