Name: Prueba de deslizamiento de laboratorio de seguridad priónica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprenda el método de hisopado con RT-QuIC para detectar priones en superficies de laboratorio. Este protocolo permite evaluar la contaminación priónica y verificar la eficacia de la descontaminación con lejía de manera confiable.

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<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Bolton, D. C., McKinley, M. P., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+protein+that+purifies+with+the+scrapie+prion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a protein that purifies with the scrapie prion.</a> Science. 218 (4579), 1309-1311 (1982).</li>
<li>Oesch, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+gene+encodes+scrapie+PrP+27-30+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular gene encodes scrapie PrP 27-30 protein.</a> Cell. 40 (4), 735-746 (1985).</li>
<li>Caughey, B., Raymond, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie-associated+form+of+PrP+is+made+from+a+cell+surface+precursor+that+is+both+protease-+and+phospholipase-sensitive%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The scrapie-associated form of PrP is made from a cell surface precursor that is both protease- and phospholipase-sensitive.</a> J Biol Chem. 266 (27), 18217-18223 (1991).</li>
<li>Deleault, N. R., Harris, B. T., Rees, J. R., Supattapone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+native+prions+from+minimal+components+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Formation of native prions from minimal components in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (23), 9741-9746 (2007).</li>
<li>Gajdusek, D. C., Zigas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degenerative+disease+of+the+central+nervous+system+in+New+Guinea%3A+the+endemic+occurrence+of+%26%2334%3Bkuru%26%2334%3B+in+the+native+population%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Degenerative disease of the central nervous system in New Guinea: the endemic occurrence of &#34;kuru&#34; in the native population.</a> N Engl J Med. 257, 974-978 (1957).</li>
<li>Centers for Disease Control. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+degenerative+neurologic+disease+in+patients+who+received+pituitary-derived+human+growth+hormone%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Fatal degenerative neurologic disease in patients who received pituitary-derived human growth hormone.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 34, 359-361 (1985).</li>
<li>Duffy, P., Wolf, J., Collins, G., DeVoe, A. G., Streeten, B., Cowen, D. Letter: possible person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+P+%22N+Engl+J+Med%22">N Engl J Med</a>. 290 (12), 692-693 (1974).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iatrogenic+Creutzfeldt-Jakob+disease+at+the+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Iatrogenic Creutzfeldt-Jakob disease at the millennium.</a> Neurology. 55 (8), 1075-1081 (2000).</li>
<li>Huillard d'Aignaux, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+period+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+in+human+growth+hormone+recipients+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Incubation period of Creutzfeldt-Jakob disease in human growth hormone recipients in France.</a> Neurology. 53 (6), 1197-1201 (1999).</li>
<li>Marzewski, D. J., Towfighi, J., Harrington, M. G., Merril, C. R., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+pituitary-derived+human+growth+hormone+therapy%3A+a+new+American+case%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following pituitary-derived human growth hormone therapy: a new American case.</a> Neurology. 38, 1131-1133 (1988).</li>
<li>Hannah, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+receipt+of+a+previously+unimplicated+brand+of+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after receipt of a previously unimplicated brand of dura mater graft.</a> Neurology. 56 (8), 1080-1083 (2001).</li>
<li>Shimizu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+with+florid-type+plaques+after+cadaveric+dura+mater+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease with florid-type plaques after cadaveric dura mater grafting.</a> Arch Neurol. 56 (3), 357-362 (1999).</li>
<li>Antoine, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+after+extracranial+dura+mater+embolization+for+a+nasopharyngeal+angiofibroma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease after extracranial dura mater embolization for a nasopharyngeal angiofibroma.</a> Neurology. 48 (5), 1451-1453 (1997).</li>
<li>Esmonde, T., Lueck, C. J., Symon, L., Duchen, L. W., Will, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+and+lyophilised+dura+mater+grafts%3A+report+of+two+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease and lyophilised dura mater grafts: report of two cases.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 56, 999-1000 (1993).</li>
<li>Willison, H. J., Gale, A. N., McLaughlin, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creutzfeldt-Jakob+disease+following+cadaveric+dura+mater+graft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Creutzfeldt-Jakob disease following cadaveric dura mater graft.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 54, 940(1991).</li>
<li>Diringer, H., Braig, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+unconventional+viruses+in+dura+mater%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Infectivity of unconventional viruses in dura mater.</a> Lancet. 334, 439-440 (1989).</li>
<li>Peden, A. H., Head, M. W., Ritchie, D. L., Bell, J. E., Ironside, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+vCJD+after+blood+transfusion+in+a+PRNP+codon+129+heterozygous+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Preclinical vCJD after blood transfusion in a PRNP codon 129 heterozygous patient.</a> Lancet. 364 (9433), 527-529 (2004).</li>
<li>Will, R. G., Matthews, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+case-to-case+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Evidence for case-to-case transmission of Creutzfeldt-Jakob disease.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 45, 235-238 (1982).</li>
<li>el Hachimi, K. H., Chaunu, M. P., Cervenakova, L., Brown, P., Foncin, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+neurosurgical+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+with+analysis+of+donor+and+recipient%3A+agent+strains%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+III%22%5BJournal%5D)">Putative neurosurgical transmission of Creutzfeldt-Jakob disease with analysis of donor and recipient: agent strains.</a> C R Acad Sci III. 320 (4), 319-328 (1997).</li>
<li>Alper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+agent+of+scrapie+replicate+without+nucleic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Does the agent of scrapie replicate without nucleic acid.</a> Nature. 214, 764-766 (1967).</li>
<li>Casassus, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((France+halts+prion+research+amid+safety+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">France halts prion research amid safety concerns.</a> Science. 373 (6554), 475-476 (2021).</li>
<li>Brandel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+Creutzfeldt-Jakob+disease+diagnosed+7.5+years+after+occupational+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Variant Creutzfeldt-Jakob disease diagnosed 7.5 years after occupational exposure.</a> N Engl J Med. 383 (1), 83-85 (2020).</li>
<li>Flechsig, E., Hegyi, I., Enari, M., Schwarz, P., Collinge, J., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+scrapie+by+steel-surface-bound+prions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Transmission of scrapie by steel-surface-bound prions.</a> Mol Med. 7 (10), 679-684 (2001).</li>
<li>Zobeley, E., Flechsig, E., Cozzio, A., Enari, M., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectivity+of+scrapie+prions+bound+to+a+stainless+steel+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Infectivity of scrapie prions bound to a stainless steel surface.</a> Mol Med. 5 (4), 240-243 (1999).</li>
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<li>Bernoulli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danger+of+accidental+person-to-person+transmission+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+by+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Danger of accidental person-to-person transmission of Creutzfeldt-Jakob disease by surgery.</a> Lancet. 309 (8009), 478-479 (1977).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Green, E. M., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chemicals%2C+heat%2C+and+histopathologic+processing+on+high-+infectivity+hamster-adapted+scrapie+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Effect of chemicals, heat, and histopathologic processing on high- infectivity hamster-adapted scrapie virus.</a> J Infect Dis. 145 (5), 683-687 (1982).</li>
<li>Brown, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+disinfection+of+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Chemical disinfection of Creutzfeldt-Jakob disease virus.</a> N Engl J Med. 306, 1279-1282 (1982).</li>
<li>Dickinson, A. G., Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+scrapie+agent+to+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Resistance of scrapie agent to decontamination.</a> N Engl J Med. 299, 1413-1414 (1978).</li>
<li>Hunter, G. D., Millson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+heat+stability+and+chromatographic+behavior+of+the+scrapie+agent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Studies on the heat stability and chromatographic behavior of the scrapie agent.</a> J Gen Microbiol. 37, 251-258 (1964).</li>
<li>Pattison, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+the+scrapie+agent+to+formalin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Resistance of the scrapie agent to formalin.</a> J Comp Pathol. 75, 159-164 (1965).</li>
<li>Fraser, H., Farquhar, C., McConnell, I., Davies, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+scrapie+disease+process+is+unaffected+by+ionising+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Clin+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">The scrapie disease process is unaffected by ionising radiation.</a> Prog Clin Biol Res. 317, 653-658 (1989).</li>
<li>Yuan, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+chronic+wasting+disease+prions+recovered+from+environmentally+relevant+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Int%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of chronic wasting disease prions recovered from environmentally relevant surfaces.</a> Environ Int. 166, 107347(2022).</li>
<li>Simmons, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+determination+of+residual+prion+infectivity+from+prion-decontaminated+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive determination of residual prion infectivity from prion-decontaminated surfaces.</a> mSphere. 9, e00504-e00524 (2024).</li>
<li>Orru, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+of+pathological+seeds+of+alpha-synuclein%2C+tau+and+prion+protein+on+solid+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection of pathological seeds of alpha-synuclein, tau and prion protein on solid surfaces.</a> PLoS Pathog. 20 (4), e1012175(2024).</li>
<li>Wilham, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+end-point+quantitation+of+prion+seeding+activity+with+sensitivity+comparable+to+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Rapid end-point quantitation of prion seeding activity with sensitivity comparable to bioassays.</a> PLoS Pathog. 6 (12), e1001217(2010).</li>
<li>Srivastava, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+quantitation+of+pathological+alpha-synuclein+in+patient+biospecimens+by+RT-QuIC+seed+amplification+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Enhanced quantitation of pathological alpha-synuclein in patient biospecimens by RT-QuIC seed amplification assays.</a> PLoS Pathog. 20 (9), e1012554(2024).</li>
<li>Hughson, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+prions+and+amyloid+seeds+with+hypochlorous+acid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Inactivation of prions and amyloid seeds with hypochlorous acid.</a> PLoS Pathog. 12 (9), e1005914(2016).</li>
<li>Williams, K., Hughson, A. G., Chesebro, B., Race, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+chronic+wasting+disease+prions+using+sodium+hypochlorite%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inactivation of chronic wasting disease prions using sodium hypochlorite.</a> PLoS One. 14 (10), e0223659(2019).</li>
<li>Taylor, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoclaving+standards+for+Creutzfeldt-Jakob+disease+agent+%5Bletter%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Autoclaving standards for Creutzfeldt-Jakob disease agent [letter].</a> Ann Neurol. 22 (4), 557-558 (1987).</li>
<li>Brown, P., Rohwer, R. G., Gajdusek, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newer+data+on+the+inactivation+of+scrapie+virus+or+Creutzfeldt-Jakob+disease+virus+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Newer data on the inactivation of scrapie virus or Creutzfeldt-Jakob disease virus in brain tissue.</a> J Infect Dis. 153 (6), 1145-1148 (1986).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Hisopos de espuma PurSwab</td><td>Marca Fisher</td><td>Catálogo #14-960-3E</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q IQ 7005 Sistema de agua ultrapura</td><td>MilliporeSigma</td><td>Q7005T0C</td><td></td></tr><tr><td>Minicentrífuga, 6000 rpm</td><td>Southern Labware</td><td>MLX-306</td><td></td></tr><tr><td>Lector de placas Omega</td><td>BMG Labtech</td><td>FLUOstar Omega lector</td><td></td>de placas</tr><tr><td>Q700 sonicador</td><td>QSonica</td><td>Q700-110</td><td></td></tr><tr><td>Proteína priónica recombinante para hámster</td><td></td><td>MNPRO MNPROteína-Hámster</td><td>hámster sirio, aminoácidos 90-231</td></tr><tr><td>Savant speedvac&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SPD1030-230</td><td></td></tr><tr><td>Nanoesferas de sílice (50 nm)</td><td>nano Composix&nbsp;</td><td>SISN50-25M</td><td></td></tr></tbody></table>

prueba de deslizamiento de laboratorio de seguridad priónica

Prion Safety Laboratory Swipe Test

Descripción escrita de los resultados positivos y negativos (incluyendo controles positivos/negativos en placa e hisopo)
Los hisopos de control negativo se incluyen en el hisopado de vigilancia para monitorear la posible contaminación priónica que podría introducirse durante el proceso de hisopado, extracción y concentración. La primera placa RT-QuIC realizada para una vigilancia mensual determinada debe incluir los controles de hisopado positivos y negativos. Los controles negativos exitosos no logran cruzar el umbral de fluorescencia positiva (Figura 6A). Este resultado indicaría que no se ha introducido contaminación durante los procedimientos experimentales. Los extractos de hisopos de control positivo exitosos exhibirían una siembra positiva en todos los pocillos replicados para una muestra dada (los hisopos de control positivo estaban contaminados con el homogeneizado cerebral de la cepa de encefalopatía de visón transmisible Hyper (HY TME) adaptado a hámster. La inclusión de una serie de dilución de control positivo permite determinar la sensibilidad de la detección de priones para un experimento determinado (Figura 6A).
Al examinar muestras de extracto de hisopo de superficie, las superficies que no muestran siembra por encima del umbral de fluorescencia positivo predeterminado pueden considerarse priónicas negativas (Figura 6B). Por el contrario, los extractos de hisopos de superficie contaminados con priones mostrarán capacidades de siembra por encima del umbral de fluorescencia positiva, aunque la relación de punto máximo (MPR) y el tiempo hasta la fluorescencia pueden variar en comparación con el control de placa positiva incluido (Figura 6B). La capacidad del método para evaluar una desinfección adecuada se pone de manifiesto por las superficies contaminadas con priones tratadas con lejía, que ahora no siembran RT-QuIC (Figura 6B).
Es importante destacar que, si bien nuestro laboratorio define una muestra positiva como una muestra que supera el umbral de fluorescencia positiva establecido en al menos la mitad de los pocillos replicados, es necesario que cada laboratorio establezca sus propios estándares. La tasa de formación de amiloide (RAF) y el tiempo hasta la fluorescencia también se pueden utilizar para ayudar a establecer umbrales específicos de laboratorio para la positividad.
Hemos observado resultados de artefactos de superficie que superan el umbral de fluorescencia positivo pero con curvas cinéticas alteradas y después de un tiempo anormalmente largo hasta la fluorescencia en comparación con las muestras de control positivas (Figura 6C). Estos resultados deben interpretarse con cautela, ya que pueden ser causados por la presencia de polvo o productos químicos residuales presentes en una superficie. Estos hallazgos ponen de manifiesto la necesidad de una limpieza general del laboratorio, así como los criterios para diferenciar entre la siembra de verdaderos positivos y falsos positivos.
La eliminación de los desechos sólidos y líquidos de riesgo biológico debe realizarse siguiendo las pautas actuales de eliminación de riesgo biológico de una institución determinada. Las técnicas comunes de desinfección de priones incluyen el tratamiento con hidróxido de sodio, hipoclorito de sodio (lejía) o autoclave a 134 °C durante 18 min 43,44,45,46.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig01.jpg"> 
Figura 1: Vista general esquemática de la prueba de deslizamiento del laboratorio de seguridad priónica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig02.jpg"> 
Figura 2: Ejemplo de diseño del sitio de hisopado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig03.jpg"> 
Figura 3: Diseño de experimento de muestra para controles de hisopo incluido en la prueba de deslizamiento de laboratorio de seguridad priónica. (A) Diseño de la muestra para controles de extracto de hisopo negativos y positivos. (B) Los controles de extracto de hisopo negativos y positivos deben resuspenderse con 50 μL deH2O. Se debe generar una dilución de 10 veces del extracto de hisopo resuspendido diluyéndolo en una solución de dilución tisular. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig04.jpg"> 
Figura 4: Diseño de experimento de muestra para extractos de hisopos de superficie de la prueba de deslizamiento del laboratorio de seguridad priónica. (A) Diseño de muestra para extractos de hisopos de superficie. (B) Las muestras de extracto de hisopo de superficie deben resuspenderse con 20 μL de solución de dilución de tejido. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig05.jpg"> 
Figura 5: Prueba mensual de laboratorio de seguridad priónica. Diagrama de flujo utilizado para interpretar los resultados y determinar la respuesta adecuada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67889/67889fig06.jpg"> 
Figura 6: Experimento representativo de hisopado de superficie. (A) Placa de control de hisopo de superficie que contiene controles de extracto de hisopo negativos por triplicado (DPBS, homogeneizado de cerebro de hámster no infectado 10-4 y 10-10) y controles de extracto de hisopo positivos por triplicado (homogeneizado de cerebro HY 10-3). (B) Extractos de hisopos representativos para superficies de sobremesa, vidrio y acero inoxidable (SS) que se tomaron muestras antes de la contaminación, después de la contaminación con HY 10-3 y después del tratamiento con lejía de las superficies contaminadas. (C) Comparación de rastreo de fluorescencia del homogeneizado cerebral no infectado 10-4, el homogeneizado cerebral HY 10-3 y el extracto de hisopo de la mesa de trabajo recubierto con una fina película de polvo. Los controles de placa negativa para los paneles A y B incluyen un blanco (solución de dilución de tejido) y un homogeneizado de cerebro de hámster no infectado 10-4. El panel B incluye la adición de homogeneizado cerebral no infectado 10-4 y el control de placa positiva del homogeneizado cerebral HY 10-3. Se determinó que un umbral de fluorescencia positivo (ilustrado por una línea discontinua roja) estaba en 2. La relación de punto máximo (MPR) informada es la fluorescencia máxima dividida por la lectura de fluorescencia inicial obtenida por el lector de placas. Cada punto representa un pozo técnico replicado para un tipo de muestra determinado. Se presentan la media y la desviación estándar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/67889fig06large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla 1: Ejemplo de formulario de documentación mensual del sitio de hisopado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Table%201.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Figura complementaria 1: Plantilla de diseño del sitio de hisopado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>
Figura complementaria 2: Formulario de documentación mensual del sitio de hisopado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67889/Supplementary%20Figure%202.pdf" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Prueba de deslizamiento de laboratorio de seguridad priónica

Transmission of iatrogenic prion disease has occurred from contaminated neurosurgical tools, transplant materials, and occupational exposure to ...

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

A continuación se describe un ensayo de novela de Vigilancia de la aceptación de priones y el tráfico por las células inmunes inmediatamente después de la inoculación intraperitoneal de purificación y el etiquetado fluorescente barras de agregados de priones a partir de material cerebral infectado entonces el seguimiento de su consumo y el movimiento del punto de inyección y la caracterización de las células mediadoras de estos eventos.

Monitoreo células inmunes Tráfico Varillas fluorescente priones horas de la infección intraperitoneal

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Los carroñeros tienen potencial para trasladar infecciosas priones de encefalopatía espongiforme transmisible en sus heces a las zonas libres de la enfermedad. Nos detalle los métodos utilizados para determinar si priones de scrapie adaptados-ratón permanecen infecciosa después del paso a través del tracto digestivo de cuervos americanos (Corvus brachyrhynchos), un consumidor común de animales muertos.

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Medir la barrera a la transmisión entre especies de enfermedades priónicas es un desafío y generalmente implica desafíos con animales o ensayos bioquímicos. Aquí, presentamos un ensayo de conversión de proteínas priónicas in vitro con la capacidad de predecir barreras de especies.

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Detección de proteína priónica anormal por inmunohistoquímica

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Prueba de deslizamiento de laboratorio de seguridad priónica

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