Name: Administración de anestésicos volátiles a larvas de pez cebra para observación del comportamiento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: Aprende a administrar anestésicos volátiles en larvas de pez cebra para experimentos de comportamiento en cámaras herméticas. Este método accesible permite estudiar farmacología anestésica sin equipos costosos.

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<ol><li>Wasilczuk, A. Z., Maier, K. L., Kelz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+as+a+model+organism+for+assessing+anesthetic+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The mouse as a model organism for assessing anesthetic sensitivity.</a> Methods Enzymol. 602, 211-228 (2018).</li>
<li>Shortal, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+brain+target-controlled+infusion+of+propofol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of brain target-controlled infusion of propofol in mice.</a> PLoS One. 13, 1-14 (2018).</li>
<li>Halbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yolk+sac+of+zebrafish+embryos+as+backpack+for+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Yolk sac of zebrafish embryos as backpack for chemicals.</a> Environ Sci Technol. 54 (16), 10159-10169 (2020).</li>
<li>Bedell, V. M., Meng, Q. C., Pack, M. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vertebrate+model+to+reveal+neural+substrates+underlying+the+transitions+between+conscious+and+unconscious+states%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A vertebrate model to reveal neural substrates underlying the transitions between conscious and unconscious states.</a> Sci Rep. 10, 1-10 (2020).</li>
<li>Stetter, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+anesthesia+in+amphibians%3A+Comparison+of+five+application+methods%5BTitle%5D)+AND+%22In+American+Association+of+Zoo+Veterinarians%22%5BJournal%5D)">Isoflurane anesthesia in amphibians: Comparison of five application methods.</a> In American Association of Zoo Veterinarians. , Puerto Vallarta, Mexico. 255-257 (1996).</li>
<li>Woll, K. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+to+identify+anesthetic+ligands+using+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening to identify anesthetic ligands using Xenopus laevis tadpoles.</a> Methods Enzymol. 602, 177-187 (2018).</li>
<li>Meyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zur+Theorie+der+Alkoholnarkose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Exp+Pathol+Pharmakol%22%5BJournal%5D)">Zur Theorie der Alkoholnarkose.</a> Arch Exp Pathol Pharmakol. 46, 338-346 (1901).</li>
<li>Downes, H., Courogen, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+effects+of+anesthetics+in+tadpole+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Contrasting effects of anesthetics in tadpole bioassays.</a> J Pharmacol Exp Ther. 278, 284-296 (1996).</li>
<li>Kalueff, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+comprehensive+catalog+of+zebrafish+behavior+1.0+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond.</a> Zebrafish. 10, 70-86 (2013).</li>
<li>Abramova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+pregnanolone+glutamate+and+its+metabolites+on+GABAA+and+NMDA+receptors+and+zebrafish+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of pregnanolone glutamate and its metabolites on GABAA and NMDA receptors and zebrafish behavior.</a> ACS Chem Neurosci. 14, 1870-1883 (2023).</li>
<li>Germann, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+behavioral+effects+of+GABAergic+low-and+high-efficacy+neuroactive+steroids+in+the+zebrafish+larvae+assay%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Comparison of behavioral effects of GABAergic low-and high-efficacy neuroactive steroids in the zebrafish larvae assay.</a> ACS Chem Neurosci. 15, 909-915 (2024).</li>
<li>Hoyt, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photomotor+responses+in+zebrafish+and+electrophysiology+reveal+varying+interactions+of+anesthetics+targeting+distinct+sites+on+gamma-aminobutyric+acid+type+A+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Photomotor responses in zebrafish and electrophysiology reveal varying interactions of anesthetics targeting distinct sites on gamma-aminobutyric acid type A receptors.</a> Anesthesiology. 137, 568(2022).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+locomotor+activities+of+zebrafish+larvae+under+the+influence+of+various+neuroactive+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Characterization of the locomotor activities of zebrafish larvae under the influence of various neuroactive drugs.</a> Annals Trans Med. 6, 173(2018).</li>
<li>McCarroll, M. N., Gendelev, L., Kinser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavioural+profiling+identifies+GABA+and+serotonin+receptor+ligands+related+to+sedation+and+paradoxical+excitation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavioural profiling identifies GABA and serotonin receptor ligands related to sedation and paradoxical excitation.</a> Nat Commun. 10, 4078(2019).</li>
<li>Plasencia, D. M., Rodgers, L. H., Knighton, A. R., Eckenhoff, R. G., White, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+propofol+anesthesia+by+alkyl-fluorobenzene+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antagonism of propofol anesthesia by alkyl-fluorobenzene derivatives.</a> Sci Rep. 14, 15943(2024).</li>
<li>Dash, S. N., Lipika, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flight+for+fish+in+drug+discovery%3A+A+review+of+zebrafish-based+screening+of+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Lett%22%5BJournal%5D)">Flight for fish in drug discovery: A review of zebrafish-based screening of molecules.</a> Biology Lett. 19, 20220541(2023).</li>
<li>Nelson, J. C., Michael, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavior+as+a+gateway+to+nervous+system+assembly+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavior as a gateway to nervous system assembly and plasticity.</a> Development. 149, 177998(2022).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sevoflurane+postconditioning+ameliorates+cerebral+hypoxia%2Freoxygenation+injury+in+zebrafish+involving+the+Akt%2FGSK-3%CE%B2+pathway+activation+and+the+microtubule-associated+protein+2+promotion%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Sevoflurane postconditioning ameliorates cerebral hypoxia/reoxygenation injury in zebrafish involving the Akt/GSK-3β pathway activation and the microtubule-associated protein 2 promotion.</a> Biomed Pharmacother. 175, 116693(2024).</li>
<li>Abdallah, S. J., Thomas, B. S., Jonz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquatic+surface+respiration+and+swimming+behaviour+in+adult+and+developing+zebrafish+exposed+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Aquatic surface respiration and swimming behaviour in adult and developing zebrafish exposed to hypoxia.</a> J Exp Biol. 218, 1777-1786 (2015).</li>
<li>Targ, A. G., Yasuda, N., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solubility+of+I-653%2C+sevoflurane%2C+isoflurane%2C+and+halothane+in+plastics+and+rubber+composing+a+conventional+anesthetic+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Solubility of I-653, sevoflurane, isoflurane, and halothane in plastics and rubber composing a conventional anesthetic circuit.</a> Anesth Analg. 69, 218-225 (1989).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-selective+Anesthetic+insensitivity+of+zebrafish+lacking+%CE%B3-aminobutyric+acid+Type+A+receptor+%CE%B23+subunits%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Drug-selective Anesthetic insensitivity of zebrafish lacking γ-aminobutyric acid Type A receptor β3 subunits.</a> Anesthesiology. 131, 1276-1291 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Microplacas de vidrio de 96 pocillos</td><td>Zinsser Norteamérica</td><td>3600500</td><td>"Estas microplacas de vidrio están hechas de vidrio de borosilicato especial de alta pureza y resistente a la temperatura y las superficies están pulidas con ácido. Las placas son rectangulares en el tamaño estándar de la microplaca SBS (85 x 127 mm). Estas microplacas de reactor de vidrio están diseñadas principalmente para su uso con aplicaciones químicas y son resistentes a temperaturas de hasta 530&deg; C. Se pueden esterilizar en autoclave. Están mecanizados a partir de una lámina de vidrio homogénea y presentan una geometría y forma uniformes para proporcionar temperaturas constantes de pocillo a pocillo (dentro de los 0,2 grados C típicos)".</td></tr><tr><td>Viales transparentes, de gran apertura y rosca de 9 mm de 2,0 ml&nbsp;</td><td>Ciencias de la vida de Chemglass</td><td>CV-1150-1232</td><td>"Con una abertura un 40% más grande, estos viales están diseñados específicamente para funcionar en muestreadores automáticos de brazo robótico. También incorporan el diseño único de Step Vial que centra con precisión un inserto de volumen limitado en el cuello del vial. "</td></tr><tr><td>Cinta de doble cara 3M 9490LE</td><td>AbbVie Inc</td><td>24WG90</td><td>"La cinta de doble cara 3M 9490LE con adhesivo de laminación 3M 300LSE proporciona una alta fuerza de unión a la mayoría de las superficies, incluidos muchos plásticos de baja energía superficial, como el polipropileno y las pinturas con recubrimiento en polvo. El adhesivo acrílico también proporciona una excelente adhesión a superficies ligeramente contaminadas con aceite que se usa típicamente con piezas de máquinas. La cinta de doble cara 9490LE de 3M ofrece la característica adicional del adhesivo de laminación 3M 300MP en un lado para proporcionar una excelente fuerza de unión a una variedad de materiales de espuma y tela (6 pulgadas x 5 yardas)"</td></tr><tr><td>Cámara de observación DanioVision</td><td>Noldus</td><td>DVOC-0041</td><td>"DanioVision es un sistema completo, diseñado para las pruebas de alto rendimiento de larvas de pez cebra en placas de pocillos múltiples. Incluye la Cámara de Observación y el reconocido software de seguimiento de video EthoVision XT".</td></tr><tr><td>Unidad de control de temperatura DanioVision</td><td>Noldus</td><td>DVTCU-0011</td><td>"La unidad de control de temperatura DanioVision es un sistema de flujo continuo: el agua fluye uniformemente debajo de la placa del pocillo a la temperatura de su elección. La temperatura es la misma en toda la placa del pozo".</td></tr><tr><td>Software Ethovision XT16</td><td>Noldus</td><td>BASE NSE-EV</td><td>"EthoVision XT es el software de seguimiento de video más ampliamente aplicado que rastrea y analiza el comportamiento, el movimiento y la actividad de cualquier animal, marca registrada por Noldus"</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Cuidados críticos de Piramal</td><td>NDC # 66794-017-10</td><td>Líquido para inhalación, un anestésico inhalatorio no inflamable y no explosivo, que contiene 100 ml de isoflurano. Almacenado a temperatura ambiente controlada 20&ordm; a 25&ordm; C</td></tr><tr><td>Imprimación adhesiva instantánea Scotch-Weld AC79 Clear</td><td>3M</td><td>"62-3916-0860-1 (ID del producto) C2103N (Lote)"</td><td>"La imprimación adhesiva instantánea 3M Scotch-Weld AC79 está diseñada para su uso en elastómeros de baja energía superficial difíciles de unir, como EPDM, silicona y otros cauchos. La preparación y aplicación de la superficie son sencillas y la imprimación adhesiva se seca rápidamente para que los trabajos se muevan rápidamente".</td></tr><tr><td>Láminas de silicona de 0,5 mm de espesor</td><td>Varios proveedores</td><td>N/A</td><td>Las láminas de silicona translúcida se compraron a múltiples proveedores</td></tr><tr><td>Speedball Pop-in Hard Rubber Brayer con marco de plástico, 4 pulgadas"</td><td>Speedball</td><td>793728</td><td>"El Speedball Pop-In Hard Brayer tiene un rodillo que se despliega para facilitar la limpieza. Marco de plástico de una pieza con rodillo desmontable de 4 pulgadas de ancho. Hecho de caucho de goma natural puro con un acabado rectificado. El brayer de goma dura mide 4 pulgadas de ancho con un marco de plástico resistente y es ideal para la aplicación de pegamento"</td></tr><tr><td>Tapones de rosca SureSTART de 9 mm, aplicaciones de alto rendimiento de nivel 2, tipo: tapón de rosca AVCS PP negro, silicona blanca/PTFE rojo Septa 1,0 mm</td><td>Thermo Scientific</td><td>6ASC9ST1B</td><td>"Utilice tapones de rosca Thermo Scientific SureSTART de 9 mm con viales de rosca que tengan una abertura de 9 mm. Los tapones de nivel de rendimiento 2 se fabrican y prueban para garantizar un bajo sangrado, robustez y reproducibilidad de los resultados para los análisis rutinarios de GC-MS y LC-MS. Elija entre tapas de polipropileno con septos de silicona/PTFE de uso múltiple de varios valores de dureza diseñados para reducir los problemas de la aguja del muestreador automático. Nuestras tapas AVCS incorporan la tecnología Advanced Vial Closure System para garantizar una compresión de sellado óptima al cerrar un vial".</td></tr><tr><td>Ultane Sevoflurano</td><td>AbbVie Inc</td><td>NDC # 0074-4456-04</td><td>Líquido volátil para inhalación, se envasa en frascos de color ámbar que contienen 250 ml de sevoflurano. Almacenado a temperatura ambiente controlada 15&ordm; a 30&ordm; C</td></tr><tr><td>Frascos de centelleo líquido Wheaton, tapas unidas a viales, vidrio, lámina de metal / pulpa, 24-400, 20 mL&nbsp;</td><td>DWK Ciencias de la vida</td><td>986561</td><td>Viales de centelleo de 20 ml convertidos a partir de tubos de vidrio de borosilicato tipo I, PET o HDPE. Disponible con tapa adjunta.</td></tr></tbody></table>

administración de anestésicos volátiles a larvas de pez cebra para observación del comportamiento

Administration of Volatile Anesthetics to Zebrafish Larvae for Behavioral Observation

Comparación con la observación tradicional de pozos abiertos Con el fin de evaluar si el sellado adhesivo tiene algún efecto sobre el movimiento espontáneo, se realizó una comparación entre los controles en pozos abiertos versus sellados. Como se ve en la Figura 2A, no se observó una diferencia estadísticamente significativa en el movimiento entre estos grupos durante la duración estándar de ~ 30 minutos utilizada en los experimentos descritos en este artículo. Reconocien...

Administración de anestésicos volátiles a larvas de pez cebra para observación del comportamiento

This study describes a unique method for administering volatile anesthetics, such as isoflurane and sevoflurane, to larval zebrafish during behavioral ...

administration-volatile-anesthetics-to-zebrafish-larvae-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Demostramos inyección intraperitoneal en adultos de pez cebra. Nosotros usamos un 10 l microjeringa NanoFil controlado por un controlador Micro4 y III UltraMicroPump. Esta demostración incluye el uso de agua fría como un anestésico.

Inyección intraperitoneal en adultos de pez cebra

Source: Morsch, M.,  et. al., desencadenando el estrés y la muerte celular utilizando microscopía confocal convencional con láser UV. J. Vis. Exp. (2017) En este video, exploramos la técnica de ablación con láser UV de alta intensidad para apuntar y estudiar con precisión las neuronas individuales en el pez cebra transgénico. Demostramos cómo preparar, inmovilizar y visualizar las respuestas neuronales, destacando la dinámica celular de la lesión y la recuperación.

Ablación selectiva con láser de una sola neurona en una larva de pez cebra utilizando un microscopio confocal

Fuente: Schramm, P. et al. Obtención de imágenes in vivo de tejido cerebral completamente activo en larvas y juveniles de pez cebra despiertos mediante la extracción de cráneo y piel. J. Vis. Exp. (2021)Este video muestra la imagen in vivo de neuronas cerebelosas en larvas de pez cebra transgénicas, que expresan proteínas fluorescentes en neuronas de Purkinje. El proceso consiste en anestesiar las larvas, inmovilizarlas en agarosa y eliminar cuidadosamente la piel pigmentada para mejorar la...

Imágenes in vivo del cerebro de larvas de pez cebra para visualizar neuronas cerebelosas

Un método simple para registrar los potenciales de campo extracelular en el cerebro anterior de las larvas de pez cebra se describe. El método proporciona una...

Prosencéfalo electrofisiológico de grabación en larvas de pez cebra

Nuestro laboratorio ha desarrollado un sistema automatizado de imágenes de alto rendimiento novedoso que es útil para la detección de varios comportamientos diferentes en-7 días de edad, las larvas de pez cebra. El sistema se puede utilizar para detectar cambios sutiles en el comportamiento después de las larvas han sido expuestos a sustancias tóxicas ambientales o productos farmacéuticos.

Automatizados análisis de comportamiento de alto rendimiento en larvas de pez cebra

Las manipulaciones dirigidas para causar estrés dirigido o muerte en células individuales han sido relativamente difíciles de lograr. Aquí, se describe un enfoque de ablación de resolución de una sola célula para estresar selectivamente y matar células individuales en cultivos celulares y animales vivos basado en un láser UV confocal estándar.

Desencadenar el estrés celular y la muerte Uso convencional UV láser confocal Microscopía

Aquí, presentamos un método confiable, mínimamente invasivo y rentable para registrar e interpretar electrocardiogramas en peces de cebra adultos anestesiados vivos.

Electrocardiografía de superficie In Vivo para pez cebra adulto

Este artículo describe un método para montar embriones frágiles de pez cebra para microscopía confocal de lapso de tiempo extendido. Este método de bajo costo es fácil de realizar utilizando platos regulares de microscopía de fondo de vidrio para obtener imágenes en cualquier microscopio invertido. El montaje se realiza en capas de agarosa a diferentes concentraciones.

Un método de montaje en capas para la microscopía confocal de lapso de tiempo extendido de embriones enteros de pez cebra

La ablación láser es una tecnología ampliamente aplicable para el estudio de la regeneración en sistemas biológicos. El protocolo presentado describe el uso de un microscopio confocal de escaneo láser estándar para la ablación láser y la posterior imagen de lapso de tiempo de las células interneuromas regeneradoras en la línea lateral del pez cebra.

Ensayo de regeneración y ablación láser basado en microscopio confocal en células interneuromas de peces cebra

Aquí presentamos un método para obtener imágenes del cerebro embrionario del pez cebra in vivo hasta etapas larvales y juveniles. Este procedimiento microinvasivo, adaptado de enfoques electrofisiológicos, proporciona acceso a detalles celulares y subcelulares de neuronas maduras y se puede combinar con estudios optogenéticos y neurofarmacológicos para caracterizar la función cerebral y la intervención farmacológica.

Imágenes in vivo de tejido cerebral completamente activo en larvas y juveniles de pez cebra despiertos mediante la extirpación del cráneo y la piel

Aquí, presentamos un protocolo detallado para examinar la actividad neuronal en regiones cerebrales de pez cebra transgénico que expresan indicadores de calcio GCaMP utilizando microscopía confocal.

In vivo Imágenes de fluorescencia confocal de la actividad neuronal inducida por estimulación sensorial en larvas de pez cebra parcialmente restringidas

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