Name: Medición de la absorción del análogo de glucosa, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)amino)-6-desoxiglucosa, en retina neural murina intacta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Aprende a medir la absorción de glucosa en retina murina intacta ex vivo utilizando el análogo fluorescente 6-NBDG. Este método rápido y económico facilita el estudio de cambios metabólicos en enfermedades neurodegenerativas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
<li>Daniele, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+uptake+by+GLUT1+in+photoreceptors+is+essential+for+outer+segment+renewal+and+rod+photoreceptor+survival%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Glucose uptake by GLUT1 in photoreceptors is essential for outer segment renewal and rod photoreceptor survival.</a> FASEB J. 36 (8), e22428(2022).</li>
<li>Fernandes, R., Hosoya, K. -I., Pereira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+downregulate+glucose+transport+system+in+retinal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species downregulate glucose transport system in retinal endothelial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 300 (4), C927-C936 (2011).</li>
<li>Badr, G. A., Tang, J., Ismail-Beigi, F., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+downregulates+GLUT1+expression+in+the+retina+and+its+microvessels+but+not+in+the+cerebral+cortex+or+its+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes downregulates GLUT1 expression in the retina and its microvessels but not in the cerebral cortex or its microvessels.</a> Diabetes. 49 (6), 1016-1021 (2000).</li>
<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
<li>Winkler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLUT1+reductions+exacerbate+Alzheimer%27s+disease+vasculo-neuronal+dysfunction+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GLUT1 reductions exacerbate Alzheimer's disease vasculo-neuronal dysfunction and degeneration.</a> Nat Neurosci. 18 (4), 521-530 (2015).</li>
<li>Mosconi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypometabolism+exceeds+atrophy+in+presymptomatic+early-onset+familial+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypometabolism exceeds atrophy in presymptomatic early-onset familial Alzheimer's disease.</a> J Nucl Med. 47 (11), 1778-1786 (2006).</li>
<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
<li>Barros, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+validation+of+6-NBDG+as+a+probe+for+the+glucose+transporter+GLUT1+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic validation of 6-NBDG as a probe for the glucose transporter GLUT1 in astrocytes.</a> J Neurochem. 109 (s1), 94-100 (2009).</li>
<li>Hamilton, K. E., Bouwer, M. F., Louters, L. L., Looyenga, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+binding+and+uptake+of+fluorescent+glucose+analogs+2-NBDG+and+6-NBDG+occurs+independent+of+membrane+glucose+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Cellular binding and uptake of fluorescent glucose analogs 2-NBDG and 6-NBDG occurs independent of membrane glucose transporters.</a> Biochimie. 190, 1-11 (2021).</li>
<li>Feigenspan, A., Babai, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+horizontal+slices+of+adult+mouse+retina+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies.</a> J Vis Exp. 119, e55173(2017).</li>
<li>Lundgaard, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+glucose+uptake+heralds+activity-dependent+increases+in+cerebral+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal glucose uptake heralds activity-dependent increases in cerebral metabolism.</a> Nat Commun. 6 (1), 6807(2015).</li>
<li>Zou, C., Wang, Y., Shen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-NBDG+as+a+fluorescent+indicator+for+direct+glucose+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement.</a> J Biochem Biophys Methods. 64 (3), 207-215 (2005).</li>
<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td># 5 pinzas</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td><td>Utilizado para la disección de retina</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de 26 G x 5/8"</td><td>sol-M</td><td>112658</td><td>Se utiliza para perforar la córnea durante la disección</td></tr><tr><td>Tubos de 5 mL</td><td>MTC bio</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 50 mL</td><td>Avantor de VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>Análogo de gucosa fluorescente</td></tr><tr><td>Placas de 96 pocillos negras con fondo transparente</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>Anestésico Filtro de carbón Cannister</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>Utilizado en anestesia</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>Millipore Sigma</td><td>SML1774</td><td>Para la inhibición de GLUT1.</td></tr><tr><td>Centrífuga a 4 & grados; C</td><td>Eppendorf</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>Gas comprimido (5% dióxido de carbono, 95% oxígeno)</td><td>Airgas</td><td>UN3156</td><td>Utilizado en la configuración de anestesia</td></tr><tr><td>pinzas curvas</td><td>Roboz instrumento quirúrgico</td><td>RS-5137</td><td>Se utiliza para la disección</td></tr><tr><td>de retina DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>Se utiliza después del etanol para limpiar el sonicador entre muestras</td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Olympus</td><td>szX12</td><td>Se utiliza para la disección de retina</td></tr><tr><td>Etanol 200 proof</td><td>Decon laboratories</td><td>2701</td><td>Se utiliza para limpiar el sonicador entre muestras</td></tr><tr><td>Bastidor de tubos flotantes de espuma</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36-099-2328</td><td>Para tubos durante la incubación en pasos de baño de agua</td></tr><tr><td>Tijeras generales</td><td>Instrumento quirúrgico Roboz</td><td>RS-680</td><td>Utilizado para retina disección</td></tr><tr><td>Isoflurano 250 mL frasco</td><td>Piramal cuidados intensivos</td><td>NDC &nbsp; 6679401725</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Equipo de isoflurano</td><td>Vetequip vendido por VWR</td><td>89012-492</td><td>Se utiliza para anestesiar antes de la eutanasia</td></tr><tr><td>Toallitas Kim</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>Lector de microplacas Molecular</td><td>devices SpectraMax</td><td>M2 Lector de microplacas</td><td>Se utiliza para leer muestras</td></tr><tr><td>Neurobasal- A media</td><td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>Cono nasal (bajo máscara de anestesia de perfil)</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0801</td><td>Se utiliza para administrar anestesia</td></tr><tr><td>Objetivo en el microscopio de disección</td><td>Olympus</td><td>DF plapo 1x pf</td><td>Se utiliza para la disección de retina</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>Se utiliza durante la disección de retina</td></tr><tr><td>Reactivo de ensayo Pierce Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>1861426</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta P20</td><td>Olympus Plásticos</td><td>26-404</td><td></td>Puntas de</tr><tr><td>pipeta P200, P1000, P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150, 76322-154, 76322-132</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas Pipeman P200, P1000, P20, P10</td><td>VWR</td><td>F144055M, F144056M, F144058M, F144059M</td><td></td></tr><tr><td>Software SoftMax Pro en el ordenador</td><td>Dispositivos moleculares</td><td>Software SoftMax Pro 7</td><td>Software utilizado para leer muestras</td></tr><tr><td>Desmembrador sónico</td><td>Thermo Fisher Scientific FB50110</td><td></td><td>Muestra de sonicato (retina)</td></tr><tr><td>Pipetas de transferencia</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-9AM</td><td>Se utiliza para transferir retina de un tubo a otro</td></tr><tr><td>Tijeras de resorte Vannas</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>Se utiliza para la disección de retina</td></tr><tr><td>Baño de agua ajustado a 37 &deg; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Se utiliza para la incubación</td></tr></tbody></table>

medición de la absorción del análogo de glucosa, 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)amino)-6-desoxiglucosa, en retina neural murina intacta

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

La Figura 4 muestra mediciones representativas de fluorescencia de glucosa de retina de ratón WT incubada con 6-NBDG durante diferentes períodos de tiempo. Después de 30 min de incubación, los niveles de 6-NBDG fueron un promedio de 336 ± 27.91 UA, mientras que después de 60 min, los niveles de 6-NBDG aumentaron a un promedio de 616.3 ± 8.38 UA. Una incubación adicional de 30 min condujo a un nivel reducido de 6-NBDG (506,4 ± 5,3 UA). A los 60 min, la variabilidad en los resultados fue mínim...

Medición de la absorción del análogo de glucosa, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)amino)-6-desoxiglucosa, en retina neural murina intacta

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Un método sencillo y práctico para determinar el grado de acoplamiento marcador brecha unión entre neuronas de la retina se describe. Esta técnica le permite a uno para investigar la función de las sinapsis eléctricas entre las neuronas de la retina intacta bajo condiciones de iluminación diferentes y en diferentes momentos del día y de noche.

De corte de carga: una herramienta útil para examinar el grado de acoplamiento Marcador brecha unión entre las neuronas retinianas

En este video, demostramos una técnica ex vivo para medir el agotamiento del análogo de glucosa extracelular en órganos de ratón extraídos. Consiste en incubar el tejido del ratón en una solución que contiene desoxiglucosa marcada con fluorescencia, que es absorbida por las células. La absorción de análogos de glucosa se puede determinar indirectamente midiendo la fluorescencia del medio incubado.

Medición de la depleción de análogos de glucosa fluorescentes extracelulares: una técnica de medición sustitutiva para evaluar la absorción de glucosa en órganos de ratón ex vivo

Este video muestra la evaluación de la absorción de dopamina en sinaptosomas recolectados de cerebros de ratones. Describe los pasos para preparar los sinaptosomas para la absorción de dopamina a través de los transportadores de dopamina, tratarlos con concentraciones variables de dopamina radiomarcada, aislar los sinaptosomas y medir la radiactividad para cuantificar la absorción de dopamina.

Medición de la absorción de dopamina en sinaptosomas cerebrales de ratón utilizando dopamina radiomarcada

La actividad de las neuronas individuales de ratones adultos en edad puede ser estudiado por disociar las neuronas de regiones específicas del cerebro y el uso de membrana fluorescente potencial de formación de imágenes de colorante. Por respuestas de prueba a cambios en la glucosa, esta técnica se puede utilizar para estudiar la sensibilidad a la glucosa de las neuronas del hipotálamo ventromedial adultos.

Potencial de Membrana Tinte Imaging de ventromedial del hipotálamo neuronas de ratones adultos para el Estudio de la glucosa Sensing

Muchas enfermedades oculares visión-que amenaza se asocian a microvasos retiniana disfuncional. Por lo tanto, la medición de las respuestas de la arteriola retiniana es importante investigar los mecanismos fisiopatológicos subyacentes. Este artículo describe un protocolo detallado para ratón arteriola retiniana aislamiento y preparación para evaluar los efectos de sustancias vasoactivas en el diámetro vascular.

Pasos de preparación para la medición de la reactividad en ratón arteriolas retinianas Ex Vivo

Esta técnica describe la grabación en tiempo real del consumo de oxígeno y los tipos de acidificación extracelular en los tejidos retinianos explanted ratón utilizando un analizador de flujo extracelular.

Medición del metabolismo energético en el tejido retiniano Explanted utilizando el análisis de flujo extracelular

La absorción de glucosa aumenta en las neuronas motoras de Drosophila afectadas por la proteinopatía de unión al ADN TAR (TDP-43), según lo indicado por un sensor de glucosa codificado genéticamente basado en FRET.

Medición de la absorción de glucosa en modelos de Drosophila de proteinopatía por TDP-43

La vasculatura de la retina del ratón es particularmente interesante para comprender los mecanismos de formación de patrones vasculares. Este protocolo mide automáticamente el diámetro de los vasos de la retina del ratón a partir de imágenes de fondo de ojo de angiografía fluorescente a una distancia fija del disco óptico.

Medición del diámetro de los vasos retinianos a partir de imágenes de angiografía fluorescente de ratón

Se describe un método para visualizar repetidamente microglia murina y los monocitos...

Una delgada del cráneo ventana Técnica para la crónica de dos fotones En vivo Imágenes de la microglía murina en los modelos de la neuroinflamación

Este artículo describe la grabación de las células individuales de marcado con fluorescencia poblaciones neuronales en la retina del ratón intacto. Mediante el uso de excitación de dos fotones infrarrojos células transgenetically etiquetado fueron objeto de grabación de patch-clamp para estudiar la luz de sus respuestas, las propiedades de campo receptivo, y la morfología.

Caracterización electrofisiológica de las buenas prácticas agrarias que expresan las poblaciones de células en la retina intacta

Aprende a medir la absorción de glucosa en retina murina intacta ex vivo utilizando el análogo fluorescente 6-NBDG. Este método rápido y económico facilita el estudio de cambios metabólicos en enfermedades neurodegenerativas.

Medición de la absorción del análogo de glucosa, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)amino)-6-desoxiglucosa, en retina neural murina intacta (Video) | JoVE Journal

Medición de la absorción del análogo de glucosa, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)amino)-6-desoxiglucosa, en retina neural murina intacta

Explorar más videos