Name: Aislamiento rápido de vesículas extracelulares derivadas de la leche materna humana (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T12:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Aprende a aislar vesículas extracelulares de leche materna humana mediante filtración rápida, un método más eficiente que la ultracentrifugación. Esta técnica reduce el tiempo de aislamiento y mantiene alta pureza para aplicaciones terapéuticas.

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<ol><li>Galley, J. D., Besner, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+breast+milk-derived+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of breast milk-derived extracellular vesicles.</a> Nutrients. 12 (3), 745(2020).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk-derived+exosomes+attenuate+cell+death+in+intestinal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Human breast milk-derived exosomes attenuate cell death in intestinal epithelial cells.</a> Innate Immun. 24 (5), 278-284 (2018).</li>
<li>Hock, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+milk-derived+exosomes+promote+intestinal+epithelial+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Breast milk-derived exosomes promote intestinal epithelial cell growth.</a> J Pediatr Surg. 52 (5), 755-759 (2017).</li>
<li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nat Commun. 6, 7321(2015).</li>
<li>Lasser, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+saliva%2C+plasma%2C+and+breast+milk+exosomes+contain+RNA%3A+Uptake+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Human saliva, plasma, and breast milk exosomes contain RNA: Uptake by macrophages.</a> J Transl Med. 9, 9(2011).</li>
<li>Chan, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+interferon+sensing+unlocks+dormant+adipocyte+inflammatory+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Type I interferon sensing unlocks dormant adipocyte inflammatory potential.</a> Nat Commun. 11 (1), 2745(2020).</li>
<li>Miyake, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk+exosomes+attenuate+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Surg+Int%22%5BJournal%5D)">Human breast milk exosomes attenuate intestinal damage.</a> Pediatr Surg Int. 36 (2), 155-163 (2020).</li>
<li>Gao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+isolating+methods+for+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Recent developments in isolating methods for exosomes.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1100892(2022).</li>
<li>Patel, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+exosome+isolation+methods+using+culture+supernatant+for+optimum+yield%2C+purity+and+downstream+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of exosome isolation methods using culture supernatant for optimum yield, purity and downstream applications.</a> Sci Rep. 9 (1), 5335(2019).</li>
<li>Gandhi, J., Naik, M. N., Mishra, D. K., Joseph, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+Aspergillus+flavus+endophthalmitis-derived+extracellular+vesicles+in+an+in+vivo+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mycol%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of Aspergillus flavus endophthalmitis-derived extracellular vesicles in an in vivo murine model.</a> Med Mycol. 60 (9), myac064(2022).</li>
<li>Palinski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+purinergic+receptor+p2x4+regulates+neoangiogenesis+induced+by+microvesicles+from+sarcoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lysosome purinergic receptor p2x4 regulates neoangiogenesis induced by microvesicles from sarcoma patients.</a> Cell Death Dis. 12 (9), 797(2021).</li>
<li>Tantengco, O. aG., Radnaa, E., Shahin, H., Kechichian, T., Menon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+talk%3A+Trafficking+and+functional+impact+of+maternal+exosomes+at+the+feto-maternal+interface+under+normal+and+pathologic+statesdagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Cross talk: Trafficking and functional impact of maternal exosomes at the feto-maternal interface under normal and pathologic statesdagger.</a> Biol Reprod. 105 (6), 15621576(2021).</li>
<li>Caruso Bavisotto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+hsp60%3A+A+potentially+useful+biomarker+for+diagnosis%2C+assessing+prognosis%2C+and+monitoring+response+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Exosomal hsp60: A potentially useful biomarker for diagnosis, assessing prognosis, and monitoring response to treatment.</a> Expert Rev Mol Diagn. 17 (9), 815-822 (2017).</li>
<li>Feng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latest+trend+of+milk-derived+exosomes%3A+Cargos%2C+functions%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Latest trend of milk-derived exosomes: Cargos, functions, and applications.</a> Front Nutr. 8, 747294(2021).</li>
<li>Li, P., Kaslan, M., Lee, S. H., Yao, J., Gao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+exosome+isolation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Progress in exosome isolation techniques.</a> Theranostics. 7 (3), 789-804 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>(H+L) Anti-ratón conjugado con HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1721011</td><td></td></tr><tr><td>(H+L) Anti-conejo conjugado HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1706515</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de jeringuilla 0,20</td><td>Fisherbrand</td><td>09-719C</td><td></td></tr><tr><td>Colador de celda mmm 0,70</td><td>Corning</td><td>431751</td><td></td></tr><tr><td>1,5 m Tris HCL</td><td>Fabricado internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 15 mL</td><td>Halcón</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de extensión de filtro de 16 pulgadas</td><td>B-BRAUN</td><td>FE2012F</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris HCL</td><td>Teknova</td><td>T1068</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 50 mL</td><td>Halcón</td><td>353070</td><td></td></tr><tr><td>Amortiguador de muestra reductor 5x</td><td>Termo Científica</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Acilamida</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>BP1410-1</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Gibco</td><td>15290-018</td><td></td></tr><tr><td>Cámara AMT NanoSprint43 Mark-II</td><td>AMT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD63</td><td>Novusbio</td><td>NBP2-32830</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD9</td><td>Invitrogen</td><td>10626D</td><td></td></tr><tr><td>APS</td><td>Termo Científica</td><td>17874</td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensayo de proteínas BCA</td><td>Pierce</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Beckman</td><td>Beckman coulter&nbsp;</td><td>344059</td><td></td></tr><tr><td>BrightStar ECL Quimioluminiscente</td><td>Alkali Scientific</td><td>XR92</td><td></td></tr><tr><td>FBS agotado por exosomas</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0464480</td><td></td></tr><tr><td>Búfer de bloqueo rápido</td><td>Pierce</td><td>37575</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Tecnologías de la vida</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Hsp70</td><td>Invitrogen</td><td>MA3-006</td><td></td></tr><tr><td>Insulina humana</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno</td><td>Fisher Scientific</td><td>H325-500</td><td></td></tr><tr><td>IEC-6&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1592</td><td></td></tr><tr><td>JEOL 1400 FLASH TEM</td><td>JEOL USA Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amortiguador de muestra reducidor de marcadores de carril</td><td>Termo Científica</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Leche en polvo</td><td>Bioworld</td><td>30620074-1</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NS 300</td><td>Malvern Instruments Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulosa</td><td>Tecnologías vitales</td><td>88018</td><td></td></tr><tr><td>Aparato de descarga PELCO easiGlow</td><td>Ted Pella</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini comprimidos inhibidores de proteasa</td><td>Pierce</td><td>A32955</td><td></td></tr><tr><td>Amortiguador RIPA</td><td>Pierce</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Fisher Scientifc&nbsp;</td><td>BP2436-200</td><td></td></tr><tr><td>Matraz T-25</td><td>Termo Científica</td><td>156367</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td>Fabricado internamente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0801</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina EDTA</td><td>Gibso</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescentes 20</td><td>Termo Científica</td><td>J20605-AP</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento rápido de vesículas extracelulares derivadas de la leche materna humana

Rapid Isolation of Human Breast Milk-Derived Extracellular Vesicles

Aislamiento rápido de vesículas extracelulares derivadas de la leche materna humana

Extracellular vesicles (EVs), nanosized particles approximately 20-1000 nm in size, are rapidly garnering attention for their therapeutic potential. ...

rapid-isolation-of-human-breast-milk-derived-extracellular-vesicles

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Fuente: Watson, D. C., et.al. Aislamiento y purificación escalables de vesículas extracelulares de Escherichia coli y otras bacterias. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el aislamiento y la concentración de vesículas extracelulares (EV) derivadas de la membrana externa de bacterias modificadas genéticamente. El proceso consiste en cultivar las bacterias para liberar vehículos eléctricos, seguido de pasos secuenciales de centrifugación y filtración para eliminar células y desechos.

Aislamiento y enriquecimiento de vesículas extracelulares derivadas de la membrana externa de bacterias

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Separation and Enrichment of Extracellular Vesicles in the Presence of Virions

Este protocolo detalla un método para aislar vesículas extracelulares (SVE), pequeñas partículas membranosas liberadas de las células, a partir de tan poco como 10 muestras de suero l. Este enfoque evita la necesidad de ultracentrifugación, requiere sólo unos pocos minutos de tiempo de ensayo, y permite el aislamiento de los vehículos eléctricos a partir de muestras de volúmenes limitados.

Dispositivos basados ​​en papel para aislamiento y caracterización de extracelular vesículas

Este protocolo describe métodos para purificar, cuantificar y caracterizar vesículas extracelulares (EVs) / exosomas de células epiteliales mamarias no adherentes / mesenquimales y para usarlas para transferir la capacidad de formación de glándulas mamarias a células epiteliales mamarias luminales. Los EVs / exosomas derivados de células epiteliales mamarias de tipo tallo pueden transferir esta propiedad celular a células que ingieren los EVs / exosomas.

Transferencia de la capacidad de formación de glándulas mamarias entre las células epiteliales basales mamarias y las células lumminales mamarias mediante vesículas extracelulares / exosomas

Aquí, describimos a dos protocolos de aislamiento de vesículas extracelulares, ultrafiltración centrifugación y ultracentrifugación con centrifugación gradiente de densidad, para aislar las vesículas extracelulares de muestras de líquidos de lavado broncoalveolar murino. Las vesículas extracelulares derivadas del líquido de lavado broncoalveolar murino por ambos métodos se cuantifica y caracteriza.

Aislamiento de las vesículas extracelulares del líquido de lavado broncoalveolar murino utilizando una técnica de centrifugación ultrafiltración

Se describe un procedimiento paso a paso para la inmovilización sin etiquetas de exosomas y vesículas extracelulares a partir de muestras líquidas y sus imágenes mediante microscopía de fuerza atómica (AFM). Las imágenes AFM se utilizan para estimar el tamaño de las vesículas en la solución y caracterizar otras propiedades biofísicas.

Imagen de vesículas extracelulares mediante microscopía de fuerza atómica

Este protocolo aísla las vesículas extracelulares (EV) lejos de los viriones con alta eficiencia y rendimiento mediante la incorporación de precipitación EV, ultracentrifugación de gradiente de densidad y captura de partículas para permitir un flujo de trabajo simplificado y una reducción del inicio requisitos de volumen, lo que resulta en preparaciones reproducibles para su uso en todas las investigaciones de vehículos eléctrico.

Purificación de preparaciones de vesícula extracelular de alto rendimiento lejos del virus

El protocolo aquí demuestra que las vesículas extracelulares pueden separarse adecuadamente de los medios de cultivo celular condicionados utilizando cromatografía de exclusión de tamaño.

Cromatografía de exclusión de tamaño para separar vesículas extracelulares de medios de cultivo celular condicionados

Este protocolo demuestra cómo aislar pequeñas vesículas extracelulares de células madre mesenquimales derivadas del cordón umbilical humano (hUC-MSC-sEV) con un entorno de laboratorio simple. La distribución del tamaño, la concentración de proteínas, los marcadores de sEV y la morfología de los hUC-MSC-sEV aislados se caracterizan por el análisis de seguimiento de nanopartículas, el ensayo de proteínas BCA, el western blot y el microscopio electrónico de transmisión, respectivamente.

Un método simple de filtración de sobremesa para aislar pequeñas vesículas extracelulares de células madre mesenquimales humanas

Este estudio describe un método para aislar y purificar vesículas extracelulares bacterianas (BEV) enriquecidas a partir de heces humanas mediante centrifugación en gradiente de densidad (DGC), identifica las características físicas de los BEV a partir de la morfología, el tamaño de partícula y la concentración, y discute las posibles aplicaciones del enfoque DGC en la investigación clínica y científica.

Aislamiento y purificación de vesículas extracelulares bacterianas a partir de heces humanas mediante centrifugación en gradiente de densidad

Aprende a aislar vesículas extracelulares de leche materna humana mediante filtración rápida, un método más eficiente que la ultracentrifugación. Esta técnica reduce el tiempo de aislamiento y mantiene alta pureza para aplicaciones terapéuticas.

Aislamiento rápido de vesículas extracelulares derivadas de la leche materna humana

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