Name: Agotamiento rápido de macrófagos renales utilizando la herramienta de ablación celular humana CD59/Intermedilysin (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Aprende a ablar macrófagos renales usando la herramienta CD59/intermedilysin en ratones. Este método permite estudiar la regeneración celular y la vigilancia inmune tras lesión renal aguda mediante citometría de flujo y microscopía intravital.

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<ol><li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Nelson, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+renal+mononuclear+phagocytic+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The renal mononuclear phagocytic system.</a> J Am Soc Nephrol. 23 (2), 194-203 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Harris, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in renal disease.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (1), 21-27 (2011).</li>
<li>Islamuddin, M., Qin, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+macrophages+and+NLRP3+inflammasomes+in+kidney+diseases+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Renal macrophages and NLRP3 inflammasomes in kidney diseases and therapeutics.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 229(2024).</li>
<li>Ricardo, S. D., van Goor, H., Eddy, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+diversity+in+renal+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Macrophage diversity in renal injury and repair.</a> J Clin Invest. 118 (11), 3522-3530 (2008).</li>
<li>Mily, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+of+M1+and+M2+Human+Monocyte-Derived+Cells+and+Analysis+with+Flow+Cytometry+upon+Mycobacterium+tuberculosis+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polarization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Cells and Analysis with Flow Cytometry upon Mycobacterium tuberculosis Infection.</a> J Vis Exp. (163), e61807(2020).</li>
<li>Huen, S. C., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Renal+Injury+and+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Renal Injury and Repair.</a> Annu Rev Physiol. 79, 449-469 (2017).</li>
<li>Tang, P. M., Nikolic-Paterson, D. J., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%3A+versatile+players+in+renal+inflammation+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages: versatile players in renal inflammation and fibrosis.</a> Nat Rev Nephrol. 15 (3), 144-158 (2019).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+fate%2C+dynamics+and+niches+of+renal+macrophages+of+bone+marrow+or+embryonic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Distinct fate, dynamics and niches of renal macrophages of bone marrow or embryonic origins.</a> Nat Commun. 11 (1), 2280(2020).</li>
<li>Chew, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+resident+macrophages+have+distinct+subsets+and+multifunctional+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Kidney resident macrophages have distinct subsets and multifunctional roles.</a> Matrix Biol. 127, 23-37 (2024).</li>
<li>Cheung, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+macrophage+subpopulations+occupy+distinct+microenvironments+in+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Resident macrophage subpopulations occupy distinct microenvironments in the kidney.</a> JCI Insight. 7 (20), 161078(2022).</li>
<li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li>
<li>Feng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre-inducible+human+CD59+mediates+rapid+cell+ablation+after+intermedilysin+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cre-inducible human CD59 mediates rapid cell ablation after intermedilysin administration.</a> J Clin Invest. 126 (6), 2321-2333 (2016).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+conditional+targeted+ablation+of+cells+expressing+human+CD59+in+transgenic+mice+by+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid conditional targeted ablation of cells expressing human CD59 in transgenic mice by intermedilysin.</a> Nat Med. 14 (1), 98-103 (2008).</li>
<li>Giddings, K. S., Zhao, J., Sims, P. J., Tweten, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD59+is+a+receptor+for+the+cholesterol-dependent+cytolysin+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Human CD59 is a receptor for the cholesterol-dependent cytolysin intermedilysin.</a> Nat Struct Mol Biol. 11 (12), 1173-1178 (2004).</li>
<li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+learning-dependent+synapse+formation+through+brain-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia promote learning-dependent synapse formation through brain-derived neurotrophic factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li>
<li>Cao, Q., Harris, D. C., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+kidney+injury%2C+inflammation%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Macrophages in kidney injury, inflammation, and fibrosis.</a> Physiology. 30 (3), 183-194 (2015).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+macrophages+in+fibrosis+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">The role of macrophages in fibrosis of chronic kidney disease.</a> Biomed Pharmacother. 177, 117079(2024).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+cell+ablation+tools+and+their+applications+to+study+loss+of+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Versatile cell ablation tools and their applications to study loss of cell functions.</a> Cell Mol Life Sci. 76 (23), 4725-4743 (2019).</li>
<li>Yashchenko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cx3cr1+kidney+resident+macrophage+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cx3cr1 kidney resident macrophage heterogeneity.</a> Front Immunol. 14, 1082078(2023).</li>
<li>Duffield, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+and+immunologic+inflammation+of+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages and immunologic inflammation of the kidney.</a> Semin Nephrol. 30 (3), 234-254 (2010).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (2), 317-326 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Tissue+Repair%2C+Regeneration%2C+and+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Tissue Repair, Regeneration, and Fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Guo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+proximal+tubular+epithelial+cells+and+other+interstitial+cells+in+tubulointerstitial+fibrosis+after+renal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between proximal tubular epithelial cells and other interstitial cells in tubulointerstitial fibrosis after renal injury.</a> Front Endocrinol. 14, 1256375(2023).</li>
<li>Guillot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acid-activated+macrophages+promote+biliary+epithelial+cell+proliferation+through+integrin+%CE%B1v%CE%B26+upregulation+following+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Bile acid-activated macrophages promote biliary epithelial cell proliferation through integrin αvβ6 upregulation following liver injury.</a> J Clin Invest. 131 (9), 132305(2021).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+Death+Preferentially+Induces+Liver+Injury+and+Inflammation+Through+the+Activation+of+Chemokine+%28C-C+Motif%29+Receptor+2-Positive+Macrophages+and+Lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Adipocyte Death Preferentially Induces Liver Injury and Inflammation Through the Activation of Chemokine (C-C Motif) Receptor 2-Positive Macrophages and Lipolysis.</a> Hepatology. 69 (5), 1965-1982 (2019).</li>
<li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Atp6v1g3-Cre+mice+for+investigation+of+intercalated+cells+and+the+collecting+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Generation of Atp6v1g3-Cre mice for investigation of intercalated cells and the collecting duct.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 325 (6), F770-F778 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 &micro; Filtro de jeringa M</td><td>Millipore</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>4-15% de geles proteicos sin tinciones de TGX</td><td>Bio-Rad</td><td>4568084</td><td></td></tr><tr><td>6X Búfer de carga</td><td>Pescador</td><td>50-103-6570</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td>WWR Ciencias de la vida</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de lisis ACK (cloruro de amonio-potasio)</td><td>Gibco</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Perlas de resina Affinity</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>Solución de ampicilina sódica</td><td>Investigación Zymo</td><td>A1001-5</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD11b-PE-Cy7 (clon M1/70)</td><td>Invitrogen</td><td>25-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD16/32 (Fc&gamma; RIII/II, Clon 93)</td><td>eBiociencia</td><td>48-0161-80</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD45-e450 (clon 30-F11)</td><td>eBiociencia</td><td>48-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4 / 80-BV605 (clon BM8)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>123133</td><td></td></tr><tr><td>Anti-hCD59-PE (clon OV9A2)</td><td>Invitrogen</td><td>12-0596-42</td><td></td></tr><tr><td>Tinte Aqua Live/Dead</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; L34957A</td><td></td></tr><tr><td>Perlas (resina)</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>Nucleasa Benzonasa</td><td>Millipore</td><td>70664-10KUN</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de extracción de proteínas BugBuster</td><td>Millipore</td><td>70584-4</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga para microtubos</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga para tubos</td><td>Thermo Scientific</td><td>75-001-241</td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa tipo IV</td><td>Corporación Bioquímica de Worthington</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de maíz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8267</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonucleasa (ADNasa) I</td><td>Corporación Bioquímica de Worthington</td><td>LS002007</td><td></td></tr><tr><td>Columna de resina Detoxi-Gel</td><td>Millipore</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco' solución salina tamponada con fosfato)</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de EDTA</td><td>BD</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>FBS (suero fetal bovino)</td><td>Gibco</td><td>10082-139</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Pescador</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>HBSS (Hank' s Solución salina equilibrada)</td><td>Gibco</td><td>24020117</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropilo &beta;-D-1-tiogalactopiranósido)&nbsp;</td><td>Millipore-Sigma</td><td>206-703-0</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>VET uno</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>Medios LB</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRFortessa citómetro de flujo</td><td>BD Biociencias</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MES [ácido 2-(N-morfolino) etanosulfónico]</td><td>Pescador</td><td>50-488-796</td><td></td></tr><tr><td>MOPS [ácido 3-(N-morfolino) propanosulfónico]</td><td>Pescador</td><td>50-213-522</td><td></td></tr><tr><td>Medios de gradiente de densidad Percoll</td><td>Cytiva</td><td>17089101</td><td></td></tr><tr><td>Bomba peristáltica</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>Descontinuado ahora, use alternativa</td></tr><tr><td>PFA (Paraformaldehído)</td><td>Thermo Scientific</td><td>I28800</td><td></td></tr><tr><td>Columna de purificación</td><td>Millipore</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>Solución de rLysozyme</td><td>Novagen</td><td>20C71110</td><td></td></tr><tr><td>Baño de agua agitada&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>TSSB15</td><td></td></tr><tr><td>Kit de diálisis Slide-A-Lyzer</td><td>Termo</td><td>66107</td><td></td></tr><tr><td>Desoxicolato de sodio</td><td>Pescador</td><td>BP349-100</td><td>Recién hecho o menos de un mes</td></tr><tr><td>Colador de células estériles (40 &mu; m)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-547</td><td></td></tr><tr><td>Tamoxifeno</td><td>Sigma Aldrich</td><td>6734</td><td></td></tr><tr><td>Filtro ultracentrífugo</td><td>Millipore</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>Agua ultrapura</td><td>Termo</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Mezclador de vórtice</td><td>Fisher Scientific</td><td>2215365</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-ME (&beta;-mercaptoetanol)</td><td>Pescador</td><td>BP176-100</td><td></td></tr></tbody></table>

agotamiento rápido de macrófagos renales utilizando la herramienta de ablación celular humana cd59/intermedilysin

Rapid Depletion of Renal Macrophages Using Human CD59/Intermedilysin Cell Ablation Tool

La purificación de His-Tag recombinante ILY siguió el mismo protocolo descrito anteriormente en14. ILY se expresó con éxito en células BL21 (DE3) de E . coli , transformadas con un plásmido que codifica el gen ILY de Streptococcus intermedius. Tras la inducción con IPTG, la sobreexpresión de la proteína diana fue evidente. Después de la expresión, ILY se purificó mediante cromatografía de afinidad de níquel-NTA, explotando una etiqueta His C-terminal para la unión específica. La ...

Agotamiento rápido de macrófagos renales utilizando la herramienta de ablación celular humana CD59/Intermedilysin

Renal macrophages (RMs) are essential for kidney health, orchestrating immune surveillance, tissue homeostasis, and responses to injury. Previously, we ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Los macrófagos juegan un papel central en la homeostasis y la patología en muchos tejidos. El protocolo presentado aquí se describen métodos para agotar los...

El agotamiento y la reconstitución de los macrófagos en ratones

Los macrófagos son células plásticas del sistema hematopoyético que tienen un papel crucial en la inmunidad protectora y la homeostasis. En este informe se describen las técnicas in vitro optimizadas para caracterizar fenotípicamente y funcionalmente los macrófagos reguladores infiltrantes del injerto que se acumulan en el órgano trasplantado bajo condiciones tolerógenas.

Caracterización funcional de macrófagos reguladores que inhiben la inmunidad reactiva al injerto

Se necesitan técnicas fiables y eficientes para el aislamiento de las células inmunitarias renales para aplicaciones posteriores. Esto requiere el marcaje de anticuerpos de superficie de una pequeña cantidad de células inmunitarias renales. En este artículo, describimos un método conciso para el aislamiento de células inmunitarias renales que aparentemente logra este objetivo.

Fiable y de alta eficiencia de extracción de riñón de células inmunes

Este manuscrito describe un protocolo detallado para fenotípica y análisis cuantitativo de los macrófagos residentes de riñones de rata por citometría de flujo. Las células teñidas resultantes también se pueden utilizar para otras aplicaciones, incluyendo la clasificación de células, el análisis de la expresión génica o estudios funcionales, aumentando así la información obtenida en el modelo experimental.

Caracterización fenotípica de los macrófagos a partir de riñón de rata por Citometría de Flujo

Este protocolo permite un investigador aislar y caracterizar tejido residente macrófagos en varios sello inflamado los tejidos extraídos de modelos inducida por la dieta de los trastornos metabólicos.

Aislamiento, caracterización y purificación de los macrófagos de los tejidos afectados por la inflamación relacionados con la obesidad

En este sentido, describimos un microscopio de luz para visualizar el infiltrado de leucocitos CD45 + cardíaco en un modelo murino de miocarditis fulminante aséptica, que es inducido por el tratamiento de la toxina diftérica intratraqueal de ratones CD11c.DTR.

Visualización Cuantitativa del Infiltrado de Leucocitos en un Modelo Murino de Miocarditis Fulminante por Microscopía de Hoja Ligera

Este protocolo proporciona un enfoque rentable para aislar y caracterizar ratón primario células tubulares renales que posteriormente pueden cultivarse el evaluar funciones biológicas renal ex vivo, incluyendo bioenergética mitocondrial.

Aislamiento, caracterización y alto rendimiento análisis de flujo extracelular de ratón células epiteliales tubulares renales primarias

Aquí presentamos un protocolo para preparar los timocitos apopónticos y los macrófagos peritoneal y analizar la eficiencia de la efervocitosis y el bloqueo específico por inhibidores de los timocitos apopónticos. Este protocolo tiene una amplia aplicación en el aclaramiento mediado por células de otras partículas, incluyendo granos artificiales y bacterias.

Análisis experimental del engulfment de thymocyte Apopético por los macrófagos

Aquí presentamos un protocolo de disociación mecánica para aislar rápidamente los macrófagos del ganglio de la raíz dorsal para el fenotipado y el análisis funcional.

Aislamiento rápido de macrófagos de ganando de raíz dorsal

Dados los modelos de xenoinjerto limitados disponibles para estudiar las interacciones entre CART humano y células mieloides, establecimos modelos in vitro e in vivo para comprender los impactos de los macrófagos humanos en las células CART. Los hallazgos pueden generalizarse potencialmente para evaluar las funciones de los macrófagos en el microambiente tumoral y probar inmunoterapias dirigidas a macrófagos.

Estudio de las interacciones entre las células mieloides y las células T con CAR in vitro e in vivo

Utilizando un modelo explantado ex vivo , se cultivan pequeños fragmentos de la porción rostral del tejido adiposo visceral blanco de ratones magros durante 7–10 días, lo que permite inducir y estudiar la inflamación del tejido adiposo a medida que ocurre durante la alimentación rica en grasas.

Un modelo ratón ex vivo para inflamación del tejido adiposo con una dieta alta en grasas

Aprende a ablar macrófagos renales usando la herramienta CD59/intermedilysin en ratones. Este método permite estudiar la regeneración celular y la vigilancia inmune tras lesión renal aguda mediante citometría de flujo y microscopía intravital.

Agotamiento rápido de macrófagos renales utilizando la herramienta de ablación celular humana CD59/Intermedilysin

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