Name: Identificación de microglía y macrófagos infiltrantes periféricos en la médula espinal lesionada mediante citometría de flujo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-24T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Aprende a identificar microglía y macrófagos infiltrantes en médula espinal lesionada mediante citometría de flujo optimizada. Este método permite distinguir fenotipos M1 y M2 para estudiar neuroinflamación.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>1&veces; PBS</td><td>&nbsp; Solarbio</td><td>P1020</td><td></td></tr><tr><td>10&veces; PBS</td><td>&nbsp; Solarbio</td><td>P1022</td><td></td></tr><tr><td>18 ratones C57/BL6 hembras de ocho semanas de edad</td><td>Cavens Laboratory Animal Ltd, Chang Zhou, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rata antiratón CCR7 marcado con APC-eFluor 780 (IgG2b kappa)</td><td>Invitrogen</td><td>47-1971-82</td><td>0.25&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>Rata IgG2b marcada con APC-eFluor 780 Control de isotipos</td><td>Invitrogen</td><td>47-4321-82</td><td>0.25&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>Rata anti-ratón CD45 marcado con APC (IgG2b kappa)</td><td>Invitrogen</td><td>17-0451-82</td><td>0.125&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>Rata IgG2b etiquetada con APC Control de isotipos</td><td>Invitrogen</td><td>17-4031-82</td><td>0.125&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Lonsera</td><td>S711-001</td><td></td></tr><tr><td>Rata anti-ratón CD68 marcado con FITC (IgG2b kappa)</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; MA5-16676</td><td>0.25&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>Rata IgG2b etiquetada con FITC Control de isotipos</td><td>Invitrogen</td><td>11-4031-82</td><td>0.25&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>Paraformaldehido</td><td>Biosharp</td><td>23319084</td><td></td></tr><tr><td>Rata anti-ratón CD11b marcado con PE (IgG2b kappa)</td><td>Invitrogen</td><td>12-0112-81</td><td>0.25&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>Rata IgG2b marcada con PE kappa&nbsp; Control de isotipos</td><td>Invitrogen</td><td>12-4031-82</td><td>0.25&mu; g/prueba</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>&nbsp; Solarbio</td><td>P8370</td><td></td></tr><tr><td>Solución de tripsina</td><td>Biosharp</td><td>BL526A</td><td></td></tr></tbody></table>

identificación de microglía y macrófagos infiltrantes periféricos en la médula espinal lesionada mediante citometría de flujo

Identifying Microglia and Peripheral Infiltrating Macrophages in the Injured Spinal Cords Using Flow Cytometry

Las células inmunitarias del tejido de la médula espinal se separan mediante sílice coloidal recubierta con centrifugación en gradiente de densidad de polivinilpirrolidona. Durante el proceso de centrifugación, las células se distribuyen en diferentes capas de acuerdo con sus densidades de flotación, logrando así la separación celular (Figura 1). De arriba a abajo, la distribución es la siguiente: restos celulares, capa rica en células mononucleares, capa rica en linfocitos y, en la parte in...

Identificación de microglía y macrófagos infiltrantes periféricos en la médula espinal lesionada mediante citometría de flujo

In a healthy spinal cord, peripheral infiltrating macrophages are almost undetectable, and microglia (MG) participate in maintaining the stability of the ...

identifying-microglia-peripheral-infiltrating-macrophages-injured

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

El presente artículo describe un protocolo rápido para aislar eficazmente células mononucleares de tejidos de la médula espinal y el cerebro que puede ser efectivamente utilizado para el análisis de citometría de flujo.

Aislamiento de células del cerebro y la médula espinal mononucleares uso de gradientes de Percoll

La cuantificación de la inflamación celular en el SNC lesionado / patológica por citometría de flujo se ve complicada por los residuos de lípidos / mielina que puede tener un tamaño similar y la granulación de las células, disminuyendo la sensibilidad / precisión. Hemos avanzado un método de preparación de células para eliminar los restos de mielina y mejorar la detección de células por citometría de flujo en la médula espinal lesionada.

Evaluación cuantitativa de las células inmunes en el tejido de la médula espinal lesionada por citometría de flujo: un nuevo uso de un método de purificación celular

La microglía se macrófagos residentes que proporcionan la primera línea de defensa y de vigilancia inmune del sistema nervioso central. Los microARN son moléculas reguladoras que juegan un papel importante en muchos procesos fisiológicos, incluida la activación y diferenciación de los macrófagos. En este artículo se describe el método para la medición de los microRNAs en la microglía.

La detección de microARNs en la microglía por PCR en tiempo real en el SNC normal y durante la neuroinflamación

Cerebro células mieloides caracterización después del accidente cerebrovascular se puede realizar por estereología utilizando el método del fraccionador óptico, o por un análisis de citometría de flujo de cerebro leucocitos suspensiones. Ambas son técnicas útiles para realizar una distinción fenotípica precisa de los principales subconjuntos de células mieloides que se encuentran en el cerebro isquémico.

Estereológico y Citometría de Flujo Caracterización de leucocitos subpoblaciones en Modelos de transitorios o isquemia cerebral permanente

Las imágenes intravitales de dos fotones se pueden utilizar para investigar las interacciones entre diferentes tipos de células en la médula espinal en su entorno de tejido nativo en un animal quimérico de médula ósea con una lesión traumática por aplastamiento de la médula espinal en la columna dorsal.

Imaging intravital de axonales Interacciones con macrófagos y microglia en un ratón Dorsal Crush Columna Lesión

Este protocolo proporciona un análisis de las subpoblaciones de macrófagos en el sistema nervioso central del ratón adulto mediante citometría de flujo y es útil para el estudio de múltiples marcadores expresados ​​por estas células.

Análisis de microglia y macrófagos derivados de monocitos del sistema nervioso central por citometría de flujo

Análisis cuantitativo de contenido de la celda dentro del nervio ciático murino es difícil debido a la escasez del tejido. Este protocolo describe un método para la digestión del tejido y la preparación que proporciona suficientes células para el análisis de citometría de flujo de poblaciones de células inmunitarias de los nervios de los ratones.

Análisis de las células inmunes en solo de los nervios ciático y de ganglio de raíz Dorsal de un ratón mediante citometría de flujo

Aquí, presentamos un protocolo para aislar y purificar la microglía primaria en modelos animales de enfermedades desmielinizantes, utilizando la clasificación de células activadas magnéticamente columnares.

Aislamiento de la microglía primaria del ratón mediante clasificación celular activada magnéticamente en modelos animales de desmielinización

Aquí, presentamos un protocolo para evaluar la función de las células inmunitarias después de un accidente cerebrovascular isquémico utilizando el análisis de citometría de flujo en un modelo de mini-accidente cerebrovascular. Este método permite un examen detallado de las interacciones neuroinmunes y puede adaptarse para el estudio de otras enfermedades neurodegenerativas, mejorando nuestra comprensión de las respuestas inmunes en la patología del ictus.

Aislamiento y evaluación por citometría de flujo de las interacciones neuroinmunes en un modelo murino de mini-ictus

Este protocolo combina la citometría de flujo y la secuenciación de ARN unicelular para aislar y caracterizar los estados de las células microgliales en el cerebelo de los cerebros de ratones postnatales tempranos. Utiliza la disociación enzimática, la centrifugación de Percoll y la inmunotinción para revelar la heterogeneidad de la microglía y mejorar la comprensión de sus funciones en el desarrollo y la enfermedad del cerebelo.

Citometría de flujo y análisis unicelular para caracterizar la activación de la microglía en el desarrollo temprano del cerebro de ratón posnatal

Aprende a identificar microglía y macrófagos infiltrantes en médula espinal lesionada mediante citometría de flujo optimizada. Este método permite distinguir fenotipos M1 y M2 para estudiar neuroinflamación.

Identificación de microglía y macrófagos infiltrantes periféricos en la médula espinal lesionada mediante citometría de flujo

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