Name: Un protocolo de citometría de electroporación para microscopía de fluorescencia de células vivas utilizando el cultivo celular U2 OS (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprende citometría de electroporación para microscopía de fluorescencia en células vivas utilizando cultivos U2OS. Este protocolo permite experimentos continuos de hasta 72 horas para estudiar el ciclo celular.

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<ol><li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+electroporation-based+intracellular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">A review on electroporation-based intracellular delivery.</a> Molecules. 23 (11), 3044(2018).</li>
<li>Kandušer, M., Miklavčič, D. Electroporation in biological cell and tissue: An overview. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKandu%C5%A1er%2C+M+%22Electrotechnologies+for+extraction+from+food+plants+and+biomaterials.+Food+Engineering+Series%22">Electrotechnologies for extraction from food plants and biomaterials. Food Engineering Series</a>. , Springer. New York. (2009).</li>
<li>Cemazar, M., Sersa, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+electrochemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectricity%22%5BJournal%5D)">Recent advances in electrochemotherapy.</a> Bioelectricity. 1 (4), 204-213 (2019).</li>
<li>Iyengar, S. K., Iyengar, S., Srivathsan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+pulsed+field+ablation+and+the+challenges+ahead%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">The promise of pulsed field ablation and the challenges ahead.</a> Front Cardiovasc Med. 10, 1235317(2023).</li>
<li>Miklavčič, D., Mali, B., Kos, B., Heller, H., Serša, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemotherapy%3A+From+the+drawing+board+into+medical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Eng+Online%22%5BJournal%5D)">Electrochemotherapy: From the drawing board into medical practice.</a> Biomed Eng Online. 13 (1), 29(2014).</li>
<li>Ando, R., Sakaue-Sawano, A., Shoda, K., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+coral+fluorescent+proteins+of+distinct+colors+for+sharp+visualization+of+cell-cycle+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Two coral fluorescent proteins of distinct colors for sharp visualization of cell-cycle progression.</a> Cell Struct Funct. 48 (2), 132-144 (2023).</li>
<li>Nesmith, T., Vieira, C., Rackus, D., Gupta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electroporation+cytometry+system+for+long-term%2C+live+cell+cycle+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">An electroporation cytometry system for long-term, live cell cycle analysis.</a> Biomicrofluidics. 18 (4), 044105(2024).</li>
<li>Hulett, H. R., Bonner, W. A., Barrett, J., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sorting%3A+automated+separation+of+mammalian+cells+as+a+function+of+intracellular+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell sorting: automated separation of mammalian cells as a function of intracellular fluorescence.</a> Science. 166 (3906), 747-749 (1969).</li>
<li>Chao, H. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+the+human+cell+cycle+is+a+series+of+uncoupled%2C+memoryless+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Sys+Bio%22%5BJournal%5D)">Evidence that the human cell cycle is a series of uncoupled, memoryless phases.</a> Mol Sys Bio. 15 (3), e8604(2019).</li>
<li>Diehl, F. F., Sapp, K. M., Vander Heiden, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bidirectional+relationship+between+metabolism+and+cell+cycle+control%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">The bidirectional relationship between metabolism and cell cycle control.</a> Trends Cell Bio. 34 (2), 136-149 (2024).</li>
<li>Rems, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+electrofusion+using+nanosecond+electric+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Cell electrofusion using nanosecond electric pulses.</a> Sci Rep. 3, 3382(2013).</li>
<li>Klein, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+best+practices+for+controlling+mammalian+cell+culture+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Bio%22%5BJournal%5D)">Toward best practices for controlling mammalian cell culture environments.</a> Front Cell Dev Bio. 10, 788808(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Corredera de cámara (impresa en 3D/ensamblada)&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultivo (10 cm)</td><td>Sarstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Delta Vision</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td>También se pueden utilizar modelos de microscopios alternativos. Asegúrese de que el escenario y el sistema ambiental puedan acomodar la corredera de la cámara de electroporación (55 mm x &nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM &ndash; Gibco de alta glucosa</td><td></td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>suero fetal bovino&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>A5256701&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>i3 MK3S Impresora 3D</td><td>Prusa</td><td>N/A</td><td>Se pueden utilizar modelos de impresoras alternativos que pueden usar archivos STL.</td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>ThermoFisher</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato Tamponado Solución Salina</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>tFUCCI(CA)5</td><td>Addgene</td><td>153521</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-07-07</td><td></td></tr><tr><td>U2-OS Línea Celular</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td></td></tr></tbody></table>

un protocolo de citometría de electroporación para microscopía de fluorescencia de células vivas utilizando el cultivo celular u2 os

An Electroporation Cytometry Protocol for Live-Cell, Fluorescence Microscopy Using U2 OS Cell Culture

Utilizando el sistema FUCCI (Figura 2), se obtuvieron datos visuales del ciclo celular midiendo el tiempo durante el cual cada color fue expresado por la célula como resultado de la expresión de proteínas y la no biquitinación. Sobre la base de los resultados de los experimentos sincronizados y no sincronizados (Figura 3), se evidenció que la exposición al PEF en fase S reguló al alza el ciclo celular. Esto se evidenció por la disminución en la longitud promedio...

Un protocolo de citometría de electroporación para microscopía de fluorescencia de células vivas utilizando el cultivo celular U2 OS

Pulsed electric fields (PEFs) have a wide range of applications in medical research and clinical applications. A key area of research focuses on ...

an-electroporation-cytometry-protocol-for-live-cell-fluorescence

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

En este video se demuestra electrofusión eficiente de las...

Electrofusión de células visualiza con microscopía de fluorescencia

ARN polimerasa II cinética de transcripción se miden en genes específicos en células vivas. ARNm transcrito a partir del gen de interés están marcados con fluorescencia y el uso de recuperación de fluorescencia después de photobleaching (FRAP), la vivo en la cinética de la elongación de la transcripción se obtienen.

La medición de la cinética de la transcripción de ARNm en las células vivas solo

Fuente: Aigrain, L., et al. Internalización y observación de biomoléculas fluorescentes en microorganismos vivos mediante electroporación.  J. Vis. Exp. (2015)El vídeo demuestra la entrega de biomoléculas fluorescentes en células microbianas electrocompetentes mediante electroporación. El proceso comienza con la introducción de ADN o proteínas marcadas con fluoróforo en una suspensión celular refrigerada. A continuación, se aplica un pulso de alto voltaje para crear poros temporales de...

Entrega por electroporación de biomoléculas fluorescentes en células bacterianas

Este video describe BiFC-PALM, una combinación de microscopía de localización fotoactivada y complementación de fluorescencia bimolecular, para evaluar las interacciones proteína-proteína. BiFC implica la fusión de dos fragmentos de proteínas fluorescentes con dos proteínas de interés que interactúan. Cuando las dos proteínas interactúan, los fragmentos se acercan, lo que permite que las dos partes se unan y reconstituyan una proteína fluorescente funcional. La fluorescencia de un solo...

Microscopía de localización fotoactivada acoplada a la complementación de fluorescencia bimolecular

Este video muestra imágenes de células vivas de la topología inmunológica de la sinapsis, investigando las interacciones entre los linfocitos T y las células epiteliales portadoras de antígenos fluorescentes. La microscopía de fluorescencia revela un desplazamiento rojo del citoplasma y anillos amarillos en la membrana de las células endoteliales, lo que indica la formación de sinapsis inmunológicas.

Evaluación de la topología de la sinapsis inmunológica a través de imágenes de células vivas

Los estudios de biomoléculas in vivo son cruciales para comprender la función molecular en un contexto biológico. Aquí describimos un método novedoso que permite la internalización de biomoléculas fluorescentes, como el ADN o las proteínas, en microorganismos vivos. También se presenta y discute el análisis de datos in vivo registrados por microscopía de fluorescencia.

Internalización y Observación de fluorescente Biomoléculas en microorganismos que viven a través de electroporación

Las interacciones proteína-proteína se visualizan en células con resolución espacial nanométrica mediante la combinación de complementación de fluorescencia bimolecular (BiFC) con microscopía de localización fotoactivada (PALM). Aquí se describe el uso de BiFC-PALM para obtener imágenes de las interacciones Ras-Raf en células U2OS para visualizar la agrupación y difusión a nanoescala de complejos Ras-Raf individuales.

Fotoactivado Localización Microscopía con bimolecular fluorescencia Complementación (BiFC-PALM)

La electroporación doble en el útero permite apuntar a las poblaciones celulares que están separadas espacial y temporalmente. Esta técnica es útil para visualizar las interacciones entre las poblaciones celulares que utilizan proteínas fluorescentes en condiciones normales, pero también después de experimentos funcionales para perturbar los genes de interés.

Doble en electroporación de utero para apuntar a poblaciones celulares separadas temporal y espacialmente

Este protocolo describe las técnicas de microfabricación necesarias para construir un dispositivo de electroporación microfluídica de laboratorio en un chip. La configuración experimental realiza transfecciones controladas a nivel de una sola célula en un flujo continuo y se puede extender a rendimientos más altos con control basado en la población. Se proporciona un análisis que muestra la capacidad de monitorear eléctricamente el grado de permeabilización de la membrana celular en tiempo real.

La fabricación y operación de un sistema de microelectroporación de flujo continuo con detección de permeabilización

Para el estudio de las respuestas de las células excitables in vitro, el protocolo describe el seguimiento óptico de los cambios en la generación de potencial de acción debidos a la electroporación en un modelo simple de célula excitable simple de células HEK con spiging tet-on modificadas genéticamente, así como los cambios en el voltaje transmembrana con extracción automatizada de parámetros relevantes.

Monitoreo de cambios inducidos por electroporación en la generación de potencial de acción en celdas HEK de Tet-On Spiking diseñadas genéticamente

Este protocolo describe el procedimiento para realizar la microscopía de localización profunda de molécula única (SMLM) de célula entera utilizando un microscopio confocal de disco giratorio con reasignación óptica de fotones, permitiendo así la obtención de imágenes DNA-PAINT sin necesidad de óptica personalizada ni iluminación compleja.

Imagen de superresolución de célula completa mediante DNA-PAINT en un disco confocal giratorio con reasignación óptica de fotones

Aprende citometría de electroporación para microscopía de fluorescencia en células vivas utilizando cultivos U2OS. Este protocolo permite experimentos continuos de hasta 72 horas para estudiar el ciclo celular.

Un protocolo de citometría de electroporación para microscopía de fluorescencia de células vivas utilizando el cultivo celular U2 OS (Video) | JoVE Journal

Un protocolo de citometría de electroporación para microscopía de fluorescencia de células vivas utilizando el cultivo celular U2 OS

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