Name: Conjunto de biorreactor para el cultivo continuo de comunidades fecales complejas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Aprende a ensamblar mini-biorreactores para cultivar comunidades fecales complejas en condiciones anaeróbicas de flujo continuo. Este método permite examinar procesos microbianos con control experimental preciso y costos reducidos.

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<ol><li>Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+estimates+for+the+number+of+human+and+bacteria+cells+in+the+body%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Revised estimates for the number of human and bacteria cells in the body.</a> PLoS Biol. 14 (8), e1002533(2016).</li>
<li>Postler, T. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+holobiont%3A+how+microbial+metabolites+affect+human+health+and+shape+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Understanding the holobiont: how microbial metabolites affect human health and shape the immune system.</a> Cell Metab. 26 (1), 110-130 (2017).</li>
<li>Rooks, M. G., Garrett, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+metabolites+and+host+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, metabolites and host immunity.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 341-352 (2016).</li>
<li>Auchtung, J. M., Robinson, C. D., Farrell, K., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiniBioReactor+Arrays+%28MBRAs%29+as+a+tool+for+studying+C.+difficile+physiology+in+the+presence+of+a+complex+community%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">MiniBioReactor Arrays (MBRAs) as a tool for studying C. difficile physiology in the presence of a complex community.</a> Methods Mol Biol. 1476, 235-258 (2016).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+metabolomics+pipeline+for+the+mechanistic+interrogation+of+the+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A metabolomics pipeline for the mechanistic interrogation of the gut microbiome.</a> Nature. 595 (7867), 415-420 (2021).</li>
<li>Bilinski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fresh+versus+frozen+stool+for+fecal+microbiota+transplantation-assessment+by+multimethod+approach+combining+culturing%2C+flow+cytometry%2C+and+next-generation+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Fresh versus frozen stool for fecal microbiota transplantation-assessment by multimethod approach combining culturing, flow cytometry, and next-generation sequencing.</a> Front Microbiol. 13, 872735(2022).</li>
<li>Li, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+stool+sample+preservation+methods+on+gut+microbiota+biodiversity%3A+New+original+data+and+systematic+review+with+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Effects of stool sample preservation methods on gut microbiota biodiversity: New original data and systematic review with meta-analysis.</a> Microbiol Spectr. 11 (3), e0429722(2023).</li>
<li>Fouhy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+freezing+on+faecal+microbiota+as+determined+using+MiSeq+sequencing+and+culture-based+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The effects of freezing on faecal microbiota as determined using MiSeq sequencing and culture-based investigations.</a> PLoS One. 10 (3), e0119355(2015).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota-derived+metabolic+factors+reduce+Campylobacteriosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Microbiota-derived metabolic factors reduce Campylobacteriosis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (6), 1751-1763.e2 (2018).</li>
<li>He, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Campylobacter+jejuni+promotes+colorectal+tumorigenesis+through+the+action+of+cytolethal+distending+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Campylobacter jejuni promotes colorectal tumorigenesis through the action of cytolethal distending toxin.</a> Gut. 68 (2), 289-300 (2019).</li>
<li>Newsome, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bacterial+genera+associated+with+therapeutic+response+to+immune+checkpoint+PD-1+blockade+in+a+United+States+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Interaction of bacterial genera associated with therapeutic response to immune checkpoint PD-1 blockade in a United States cohort.</a> Genome Med. 14 (1), 35(2022).</li>
<li>Ziv, N., Brandt, N. J., Gresham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+chemostats+in+microbial+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of chemostats in microbial systems biology.</a> J Vis Exp. (80), e50168(2013).</li>
<li>Wille, J., Coenye, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+dispersion%3A+The+key+to+biofilm+eradication+or+opening+Pandora%27s+box%5BTitle%5D)+AND+%22Biofilm%22%5BJournal%5D)">Biofilm dispersion: The key to biofilm eradication or opening Pandora's box.</a> Biofilm. 2, 100027(2020).</li>
<li>Biagini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designs+and+methodologies+to+recreate+in+vitro+human+gut+microbiota+models%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-des+Manuf%22%5BJournal%5D)">Designs and methodologies to recreate in vitro human gut microbiota models.</a> Bio-des Manuf. 6 (3), 298-318 (2023).</li>
<li>Qi, Y., Yu, L., Tian, F., Zhao, J., Zhai, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+to+study+human+gut-microbiota+interactions%3A+Applications%2C+advances%2C+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro models to study human gut-microbiota interactions: Applications, advances, and limitations.</a> Microbiol Res. 270, 127336(2023).</li>
<li>Gościniak, A., Eder, P., Walkowiak, J., Cielecka-Piontek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+gastrointestinal+models+for+nutraceuticals+research-achievements+and+challenges%3A+A+practical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Artificial gastrointestinal models for nutraceuticals research-achievements and challenges: A practical review.</a> Nutrients. 14 (13), 2560(2022).</li>
<li>Marrero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut-on-a-chip%3A+Mimicking+and+monitoring+the+human+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Gut-on-a-chip: Mimicking and monitoring the human intestine.</a> Biosens Bioelectron. 181, 113156(2021).</li>
</ol>

La microbiota intestinal es una vasta red de microorganismos, entre los que se encuentran bacterias, hongos, arqueas y virus, que contienen un enorme repertorio genético y metabólico que supera en gran medida al de un huésped humano1. La rica capacidad metabólica del microbioma incluye metabolitos producidos a partir del procesamiento bacteriano de nutrientes dietéticos, metabolitos del huésped modificados químicamente por bacterias y metabolitos sintetizados únicamente por la microbiota2. La microbiota está implicada en casi todos los bioprocesos del huésped, pero también en estados patológicos como la enfermedad inflamatoria intestinal, el cáncer, los trastornos metabólicos e incluso los trastornos neurológicos 2,3. Diseccionar la contribución de la microbiota a la del huésped es esencial para comprender el papel de microorganismos específicos o comunidades complejas en la salud y la enfermedad. Un enfoque que permite esta disección es el uso de biorreactores microbianos, que cultivan diversas comunidades microbianas en condiciones dinámicas. Hay muchos biorreactores disponibles comercialmente que permiten el crecimiento de comunidades bacterianas fecales para casi cualquier propósito, incluido el cultivo de bioproductos a gran escala o el control preciso de factores nutritivos específicos para el estudio de los procesos metabólicos. Sin embargo, estos sistemas son enormemente costosos y requieren una preparación extensa, y no permiten examinar diversas condiciones experimentales en paralelo. Para un enfoque simplificado que sea menos costoso, más adaptable y permita muchas condiciones paralelas, presentamos aquí el protocolo para la configuración y el uso de un conjunto de mini-biorreactores bajo flujo continuo adaptado de Auchtung et al.4.
La configuración completa del sistema de mini-biorreactor se muestra en la Figura 1A. Este sistema de mini-biorreactor utiliza matrices de 6 pozos de reactor, que son completamente independientes entre sí y están configurados en una cámara anaeróbica bajo flujo peristáltico para permitir la entrega y eliminación continua de medios (Figura 1A). Cada conjunto de reactores se asienta sobre una placa de agitación magnética de 60 posiciones, con dos bombas peristálticas de 48 casetes que sostienen tubos de 2 paradas para el medio fuente y el flujo de desechos (Figura 1A). La cámara anaeróbica está equipada con un monitor anaeróbico CAM-12 para el contenido de oxígeno, una caja de catalizadores para eliminar oxígeno con capacidad de calentamiento y una columna de eliminación de sulfuro de hidrógeno para absorber el exceso de gas del metabolismo bacteriano. Cada pozo del reactor está equipado con una entrada de medio fuente, una salida de desechos y un puerto de muestreo, lo que permite la inoculación o el muestreo de cada pozo de reactor individual (Figura 1B).
Como se describe, el sistema de biorreactor permite el control dinámico de la temperatura, el consumo de medios y la disponibilidad de nutrientes para apoyar el cultivo y el mantenimiento de las comunidades fecales. La temperatura es modulada por una caja de catalizadores con capacidad calorífica, lo que permite implementar rápidamente cambios de temperatura en toda la cámara anaeróbica. El consumo de medios está regulado por los caudales de la bomba peristáltica, que se pueden modificar para cambiar la rotación de los medios en los reactores. La rotación de medios se puede personalizar para los tipos de comunidad que se cultivan en los reactores, por ejemplo, que se adaptan para cepas objetivo de crecimiento lento o muy rápido. Por último, la disponibilidad de nutrientes se puede modificar dinámicamente mediante la adición de componentes a través de los puertos de muestra individuales para cada pozo del reactor. Las condiciones estáticas que pueden modificarse al comienzo de un experimento, pero que no tienen control dinámico en el sistema, son el tipo de medio, el contenido de oxígeno y el número de reactores simultáneos. Los investigadores pueden optar por implementar cualquier medio de origen que deseen, y mientras se describe un medio aquí, se han implementado con éxito muchos otros tipos de medios de origen. Se pueden operar los reactores en condiciones aeróbicas o microaerófilas (dependiendo de la disponibilidad de una cámara microaerófila). Por último, se pueden instalar tantos o tan pocos reactores como sea necesario en función de las necesidades experimentales del investigador. Si bien los reactores están en grupos de seis dentro de una matriz, cada reactor funciona independientemente de los demás, y cada uno se puede conectar a una fuente diferente si se desea.
Este sistema de biorreactor modular se puede configurar completamente por alrededor de $ 25,000 (sin incluir la cámara anaeróbica o los componentes específicos de la cámara), y la única parte no reutilizable es la tubería que se puede reemplazar por menos de $ 100 por ejecución del sistema. El sistema está automatizado en su mayor parte, pero requiere una verificación diaria de los niveles de medios, ya que las botellas de fuentes de medios deberán cambiarse cuando estén vacías. Además, cualquier muestreo debe completarse manualmente, y cualquier cambio condicional dinámico en el sistema deberá iniciarse manualmente (por ejemplo, cambiar la temperatura). A partir del protocolo del sistema original publicado por Auchtung et al., se implementaron algunas modificaciones para mejorar el rendimiento general y la utilidad4. En primer lugar, el material para la impresión 3D de la matriz de biorreactores se modifica para que sea un plástico transparente translúcido similar al ABS para mejorar la integridad estructural del sistema mediante rondas repetidas de autoclave. Además, en lugar de la tubería de PTFE de 1/8 de pulgada (3,2 mm) de diámetro exterior, E-LFL, 2,06 mm de diámetro interior, se utiliza una tubería de 100 pies debido al material más resistente, que es más resistente al colapso, lo que causaría bloqueos en el flujo en el sistema. Por último, se utiliza un accesorio adicional que utiliza una rosca de 1/4 -28 mm a adaptadores macho de púas para reducir los cambios en el deslizamiento del tubo de las botellas de fuente de medios. De Han et al., la receta adaptada de medios MEGA proporciona un medio indefinido, complejo y altamente rico que permite el cultivo de microorganismos anaeróbicos exigentes5. El medio se modifica para utilizar una preparación alternativa del componente histidina-hematina, ya que el original ya no está disponible comercialmente. El hidróxido de sodio también se utiliza para pH del medio a 7.0 o cualquier pH deseado. En general, este sistema es económico y fácil de usar, optimizado y un excelente punto de entrada a los sistemas de cultivo de flujo continuo.
En este protocolo, describimos en detalle la configuración de este sistema de matriz de mini-biorreactores, incluidos los materiales, la esterilización del sistema y el uso posterior para el cultivo de muestras fecales murinas humanizadas intestinalmente. El objetivo general de este método es construir un sistema de biorreactor adaptable y rentable que pueda utilizarse para cultivar comunidades microbianas en condiciones controladas. En la Figura 2 se proporciona un esquema detallado del flujo de trabajo para el ensamblaje del sistema de mini-biorreactor y se hace referencia a él en los pasos apropiados dentro del protocolo. En nuestro ejemplo, inoculamos dos reactores con la misma muestra fecal de ratones intestinales humanizados y describimos la estructura de la comunidad microbiana bajo un flujo continuo de medios MEGA.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2.jpg"> 
Figura 1: Diagrama esquemático de la configuración del conjunto de mini-biorreactores en la cámara anaeróbica. (A) Vista completa de la configuración completa del conjunto de mini-biorreactores en la cámara anaeróbica. El conjunto de biorreactores de 6 pocillos está situado en la placa de agitación magnética de 60 posiciones. La red de tee luer de origen está conectada al medio de origen en el lado izquierdo a través de la tapa de botella de dos orificios. Dos bombas peristálticas sujetan la tubería de 2 paradas desde la fuente y las redes de residuos a la izquierda y a la derecha, respectivamente. La red de residuos se vacía en la botella de residuos del lado derecho. El equipo esencial para el funcionamiento de la cámara anaeróbica, incluido el monitor CAM-12, la caja de catalizador con capacidad de calentamiento y la columna de eliminación de sulfuro de hidrógeno, están dispuestos dentro de la cámara alrededor del sistema de matriz. (B) Vista superior de los puertos de fuente, muestra y desechos conectados a un pozo de reactor con medios a la altura adecuada en el reactor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2.jpg"> 
Figura 2: Diagrama esquemático del flujo de trabajo de ensamblaje de matrices de mini-biorreactores. (A) Vista de arriba hacia abajo del conjunto de mini-biorreactores, que muestra la orientación de la fuente, los desechos y los puertos de muestra. (B) Vista lateral del conjunto de mini-biorreactores con una vista que ilustra los pasos 2.3-2.4 del protocolo. El tubo y el accesorio de PTFE de 1/8 de pulgada (1) se conectan e insertan en los puertos de desechos y muestras. El accesorio (1) sin PTFE se inserta en el puerto de origen. (C) Vista lateral del conjunto de mini-biorreactores que ilustra los pasos 2.5-2.6 del protocolo. El accesorio (2) está conectado a los puertos de origen y desechos. El accesorio (3) se conecta al puerto de muestra, y a él, el accesorio (4) se inserta en la parte superior. (D) Vista lateral del conjunto de mini-biorreactores que ilustra los pasos 2.9-2.11. La tubería E-LFL de 2,06 mm está conectada a los puertos de origen y desagüe, y el otro extremo está conectado a los accesorios (5) y luego (6). A continuación, se conecta un tubo de 2 paradas del diámetro adecuado al accesorio (6). A continuación, la conexión inversa se repite en el extremo del tubo de 2 pasos, con el accesorio (6) conectándose al tubo de 2 pasos y el accesorio (5) conectándose a él. Por último, la tubería E-LFL de 2,06 mm se conectará al racor (5) para la conexión a la red de luer tee. (E) Vista arriba hacia abajo del conjunto de mini-biorreactores que muestra la fuente y la configuración de la red de aguas residuales descrita en los pasos 2.12-2.15. La tubería E-LFL de 2,06 mm que termina en el accesorio (5) se utiliza para conectar cada reactor a varios accesorios (7), cuya última abertura está conectada a la tapa de la fuente o botella de desecho. (F) Vista lateral del conjunto de tapas de botellas de dos orificios descrito en los pasos 2.16-2.17. Una abertura en la tapa está conectada a un tubo de PTFE que se coloca dentro de la botella. A esa abertura se inserta el accesorio (1), seguido del accesorio (2) y el tubo E-LFL de 2,06 mm conectado al accesorio (5). Este accesorio se conecta a la red de fuente o de residuos. En la abertura no conectada a la tubería de PTFE, se inserta el accesorio (1), seguido del accesorio (2), y el tubo E-LFL de 2,06 mm se conecta a otro accesorio (5). Este extremo se tapa con papel de aluminio durante la esterilización en autoclave para su futura conexión a un filtro de jeringa estéril de 0,22 μM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<table><tbody><tr><td>Jeringa de punta deslizante BD de 1 mL estéril, de un solo uso</td><td>Fisher Scientific</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>1/4-28 mm de rosca a adaptador macho con púas (3.2 mm), 5/paquete</td><td>Cole-Parmer</td><td>008NB32-KD5L</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 2 paquetes de</td></tr><tr><td>10M NaOH (Hidróxido de sodio)</td><td>Sigma</td><td>72068-100ML</td><td></td></tr><tr><td>2.0ml Tubo con tapa de rosca, sin moletear, con faldón, natural, E-Beam Tubo estéril con tapa adjunta</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-755-228</td><td></td></tr><tr><td>2mag MIXdrive 60 Agitación Drive</td><td>2mag</td><td>40060</td><td>Placa de agitación magnética de 60 posiciones (adición opcional de capacidad de calentamiento- cat# 40260)</td></tr><tr><td>Arrancado de reactor de 6 pocillos, plástico transparente translúcido similar al ABS</td><td>Protolabs</td><td>Custom</td><td>Consulte los archivos complementarios para el archivo .stl para impresión 3D</td></tr><tr><td>Absolute Ethanol (200 Proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético, glacial</td><td>Adaptador Sigma</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>, nylon, luer macho a rosca 1/4-28, 25/paquete</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-82</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pozos, necesita 6 (1 paquete)</td></tr> <tr><td>Papel de aluminio</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Cámara anaeróbica</td><td>Coy Lab Products</td><td>Tipo B</td><td></td></tr><tr><td>Bel-Art&nbsp; SP Scienceware Flea Micro Spinbar Barras de agitación magnéticas (1/pk)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-261679</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 6&nbsp;</td></tr><tr><td>Cabina de bioseguridad clase 2</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ácido butírico</td><td>Sigma</td><td>B103500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 &middot; 2H2O (Cloruro de calcio dihidratado)</td><td>Sigma</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>Toallitas germicidas Clorox Healthcare con lejía, sin perfume, 6" x 5", paquete de 150 toallitas</td><td>Office Depot</td><td>129202</td><td></td></tr><tr><td>D-(-)-Fructosa</td><td>Sigma</td><td>F0127-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Celobiosa</td><td>Sigma</td><td>C7252-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucosa</td><td>Sigma</td><td>G8270-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Maltosa monohidrato</td> Grifo de mano <td>Sigma</td><td>M5885-100G</td><td></td></tr><tr><td>Drill America Plug DWTP1/4-28</td><td>Home Depot</td><td>305699489</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco, 1X sin Ca y Mg, estéril</td><td>Genesee</td><td>25-508</td><td></td></tr><tr><td>Hembra luer &times; 1/16&Prime; adaptador de manguera de barb, Nylon, 25/paquete</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-00</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 24 (1 paquete)</td></tr> <tr><td>Luer hembra &times; 1/8&Prime; adaptador de manguera de púa, Nylon 25/paquete</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-04</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 6 (1 paquete)</td></tr> <tr><td>Luer hembra &tiempos; 3/32&Prime; adaptador de manguera de púa, Nylon, 25/ paquete</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-02</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 6 (1 paquete)</td></tr> <tr><td>Female luer tee, Nylon, 25/paquete</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-56</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 10 (1 paquete)</td></tr> <tr><td>FeSO4 &middot; 7H2O (Sulfato de hierro [II] Heptahidratado)</td> <td>Sigma</td><td>F8633</td><td></td></tr><tr><td>Hematin</td><td>Sigma</td><td>H3281</td><td></td></tr><tr><td>Histidina</td><td>Sigma</td><td>H7750</td><td></td></tr><tr><td>Ácido isovalérico</td><td>Sigma</td><td>129542</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 dibásico (fosfato de hidrógeno dipotásico)</td><td>Sigma</td><td>P2222-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4 monobásico (fosfato de dihidrógeno de potasio)</td><td>Sigma</td><td>P0662-500G</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta de orificio grande</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-134</td><td></td></tr><tr><td>Clorhidrato de L-cisteína</td><td>Sigma</td><td>C1276-10G</td><td></td></tr><tr><td>Luer macho con anillo de bloqueo y tiempos; 1/8&Prime; adaptador de manguera de púa, Nylon, 25/paquete</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-04</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 42 (2 paquetes)</td></tr> <tr><td>Extracto de carne</td><td>Sigma</td><td>70164-500G</td><td></td></tr><tr><td>Med Vet International&nbsp; Aguja Peel, 20G X 1", Hypodermic, 100/Caja, 26417</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-209-2532</td><td></td></tr><tr><td>Menadiona (Vitamina K3)</td><td>Sigma</td><td>M5625</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp; &middot; 7H2O (Sulfato de magnesio heptahidratado)</td><td>Sigma</td><td>M1880-500G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q agua</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl (cloruro de sodio)</td><td>Sigma</td><td>S9888-500G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3 (Bicarbonato de sodio)</td><td>Sigma</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Omnifi t Q-series tapa de botella de dos agujeros</td><td>Cole-Parmer</td><td>00945Q-2</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pozos, necesita 1</td></tr><tr><td>PMP IPC-N L 24CHNL 8RLR 115V</td><td>MasterFlex</td><td>ISM939C-115V</td><td>bomba peristáltica de 24 canales, requiere 1 para la fuente y 1 para los residuos</td></tr><tr><td>Sello de precisión septa de goma, blanco, tubo de vidrio de 7 mm de diámetro exterior (100/pk)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z553905-100EA</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 6 septos</td></tr><tr><td>Ácido propiónico</td><td>Sigma</td><td>P5561&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de bomba, 2 paradas, Tygon S3 E-Lab, 1.02 mm ID; 12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-28</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 6&nbsp; (1 paquete)</td></tr><tr><td>Tubo de bomba, 2 paradas, Tygon S3 E-Lab, 1.14 mm ID; 12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-30</td><td>Para construir 1 arreglo de 6 pocillos, necesita 6 (1 paquete)</td></tr> <tr><td>Puritan Cary-Blair Medium, 5 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-646</td><td></td></tr><tr><td>PYREX 2L Botellas redondas de almacenamiento de medios, con tapón de rosca GL45</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-414-1E</td><td></td></tr><tr><td>Cuchillas de afeitar</td><td>Genesee</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin, sal de sodio</td><td>ACROS Organics de ThermoFisher</td><td>AC41890-0010</td><td></td></tr><tr><td>Almidón soluble</td> Micro espátulas de acero inoxidable <td>Sigma</td><td>S9765-100G</td><td></td></tr><tr><td>, cuchilla similar a cuchara</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td></td></tr><tr><td>TBNG TYGON ELFL 2.06MMID 100'VWR</td><td></td> <td>MFLX06449-42</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 205.5 cm</td></tr><tr><td>de suplemento de minerales traza</td><td>ATCC</td><td>MD-TMS</td><td></td></tr><tr><td>Tripticasa Peptona (BBL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11921</td><td></td></tr><tr><td>Tubing, PTFE, 1/8&Prime; (3,2 milímetros) OD y tiempos; 1,5 mm de diámetro interior, 10 M</td><td>Cole-Parmer</td><td>008 T32-150-10</td><td>Para construir 1 matriz de 6 pocillos, necesita 300 mm</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P1754&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento vitamínico</td><td>ATCC</td><td>MD-VS</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de levadura (Bacto)</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0127-17-9</td><td></td></tr></tbody></table>

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Bioreactor Assembly for Continuous Culture of Complex Fecal Communities

Se recogieron muestras fecales de ratones colonizados con purín fecal humano 2 semanas después de la inoculación y se almacenaron a -80 °C. El sistema de biorreactor se configuró con flujo continuo de medios MEGA para dos pozos de reactores replicados (Figura 3A). La suspensión fecal se preparó a partir de los gránulos fecales de ratón de acuerdo con el protocolo descrito en el paso 6, y ambos reactores se inocularon por puerto de muestra con la suspensión f...

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Inmunología e Infección

A escala de laboratorio digestores anaeróbicos permitirá a los científicos para investigar nuevas formas de optimizar las aplicaciones existentes de la biotecnología anaeróbica y para evaluar el potencial de producción de metano de los diversos residuos orgánicos. Este artículo presenta un modelo generalizado para la construcción, la inoculación, la operación y el seguimiento de una escala de laboratorio se agita continuamente digestor anaeróbico.

Continuamente agitado digestor anaeróbico para convertir los desechos orgánicos en biogás: configuración del sistema y funcionamiento básico

Fuente: Ahmadi, S., et al. Un modelo de cultivo lotado in vitro para estimar los efectos de los regímenes intervencionistas sobre la microbiota fecal humana. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demuestra un método para modelar la fermentación microbiana intestinal incubando muestras de heces con fibra fermentable dietética bajo condiciones anaeróbias para estudiar la producción de metabolitos por microbiota intestinal.

In vitro Modelo de cultivo por lotes para imitar la fermentación del colon por microbiota intestinal humana

La regulación de nutrientes mediante la alimentación ajustada al crecimiento continuo mejora las tasas de crecimiento de los esferoides de células de mamíferos en comparación con la alimentación intermitente por lotes para cultivos en biorreactores de suspensión agitada.  Este estudio demuestra los métodos necesarios para establecer cultivos alimentados con tasa ajustada simple.

Nutriente Reglamento mediante la alimentación continua de expansión a gran escala de células de mamífero en esferoides

El comportamiento funcional de las células en cultivo puede ser mejorado por cultivo en más in vivo -como ambientes de cultivo 3-dimensionales 16-21. Este manuscrito describe la puesta en marcha y operación de un sistema de fibra hueca para el biorreactor -como el cultivo de tejidos en mamíferos in vivo.

Biorreactores de fibra hueca para<em&gt; En Vivo</em&gt; -como Cultivo de tejidos de mamíferos

Se presenta un novedoso diseño de reactor, denominado biorreactor de alta densidad (HDBR), para el cultivo y estudio de comunidades microbianas de alta densidad. Aquí, el HDBR se aplica con éxito en una configuración de fotobiorreactor (PBR) para el estudio del metabolismo del nitrógeno por parte de una comunidad mixta de algas de alta densidad.

Un biorreactor Novela de alta densidad de cultivo de diversas comunidades microbianas

Interacciones de host-microbio intestinal fueron evaluadas usando un nuevo enfoque que combina una comunidad oral sintético, en vitro la digestión gastrointestinal y un modelo del epitelio del intestino delgado. Presentamos un método que puede ser adaptado para evaluar invasión celular de patógenos y biofilms multiespecies, o incluso para probar la supervivencia de las formulaciones probióticas.

Evaluar la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz de Host-microbio In Vitro Gut

Aquí, presentamos un protocolo para el cultivo de la microbiota intestinal de la Colón in vitro, utilizando una serie de biorreactores que simulan las condiciones fisiológicas del tracto gastro intestinal.

La aplicación Advanced In Vitro cultivo tecnología para estudiar la Microbiota del intestino humano

Aquí, presentamos un protocolo para lograr la fabricación a gran escala de células adherentes a través de un sistema completamente cerrado basado en microportadores solubles de grado GMP. El cultivo de células madre mesenquimales humanas, células HEK293T y células Vero se validó y cumplió tanto con las demandas de cantidad como con los criterios de calidad para la industria de la terapia celular y génica.

Producción celular a gran escala basada en microportadores porosos solubles de grado GMP

El objetivo de este artículo es detallar las mejores prácticas para la fabricación de medios para microorganismos anaeróbicos exigentes adquiridos de un medio ambiente. Estos métodos ayudan a manejar los cultivos anaeróbicos y se pueden aplicar para apoyar el crecimiento de microorganismos no cultivados elusivos, la "materia oscura microbiana".

Un conjunto de formatos de medios simulados informados in situ para el cultivo de microorganismos anaeróbicos adquiridos en el medio ambiente

El Minibioreactor Array (MBRA) es un sistema de cultivo de flujo continuo, personalizable y de alto rendimiento que permite el cultivo de comunidades microbianas complejas, lo que respalda experimentos paralelos para estudiar la dinámica del microbioma, las interacciones terapéuticas y las respuestas microbianas a factores ambientales.

Protocolo actualizado para el montaje y uso de la matriz de minibiorreactores (MBRA)

Aprende a ensamblar mini-biorreactores para cultivar comunidades fecales complejas en condiciones anaeróbicas de flujo continuo. Este método permite examinar procesos microbianos con control experimental preciso y costos reducidos.

Conjunto de biorreactor para el cultivo continuo de comunidades fecales complejas

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