Modelo animal de infecciones asociadas a implantes en ratones

El establecimiento de un modelo animal estable nos proporciona plataformas confiables para probar terapias de infección asociadas a implantes mientras investigamos estadísticas patológicas y respuesta inmune dentro del microambiente de infección. En la lucha contra el tratamiento con IGP, los técnicos emergentes, como las imágenes de fluorescencia, el microscopio electrónico y la transcriptómica, ofrecen una poderosa opción para investigar los ciclos de vida y el futuro de las bacterias en PGI. Sin embargo, primero debemos establecer un modelo animal de PGI de alta calidad y reproducible.

El desafío ahora es construir un modelo estable y reproducible que imite el complejo microambiente in vivo, una realidad clínica para las infecciones asociadas a implantes. Superiores a los modelos de abscesos subcutáneos, los modelos de infección asociados a implantes ofrecen una mayor relevancia clínica, mantienen infecciones, mejoran la reproducibilidad y una mayor bioseguridad. Este método de modelado es altamente seguro y confiable, nos brinda una investigación exhaustiva de los mecanismos fisiopatológicos y estimula el desarrollo de criterios de diagnóstico con estiramientos terapéuticos específicos.

Para comenzar, obtenga cultivos de Staphylococcus aureus. Retire un bucle del cultivo con un asa de inoculación, raye la suspensión en una placa de agar de sangre e incube. Seleccione una colonia independiente única, redonda y lisa con pigmentación amarilla dorada y una zona de hemólisis clara.

Con un asa estéril, inocularlo en un tubo de centrífuga estéril de 15 mililitros que contenga cinco mililitros de caldo de soja tríptico estéril. Coloque el tubo en una incubadora agitadora a 37 grados Celsius y agite a 200 revoluciones por minuto durante 12 horas. Diluir la suspensión bacteriana con caldo de soja tríptico en una proporción de uno a 50 e incubar nuevamente.

Luego, use un espectrofotómetro para medir y registrar la densidad óptica a 600 nanómetros para confirmar que las bacterias han alcanzado la fase de crecimiento logarítmico. A continuación, pipetea tres mililitros de la suspensión bacteriana en un tubo. Mézclalo con tres mililitros de PBS estéril frío.

Centrifugar la mezcla a 3000 G durante 10 minutos a cuatro grados centígrados. Con una pipeta, deseche el sobrenadante y vuelva a suspender suavemente el gránulo bacteriano en PBS. Vuelva a suspender el gránulo bacteriano lavado en PBS para una mayor experimentación.

Divida aleatoriamente 20 ratones de tipo salvaje C57BL bar 6J en dos grupos del grupo de infección asociada al implante y el grupo de absceso subcutáneo. Aplique marcas auriculares distintas a cada ratón para una identificación individual. Después de anestesiar y preparar la piel de los animales, use cuchillas quirúrgicas estériles para hacer una incisión de un centímetro en la región dorsal de cada ratón.

Luego, inserte un implante de titanio estéril en el bolsillo subcutáneo creado por la incisión. Ahora, use una jeringa estéril de un mililitro para inyectar 100 microlitros de suspensión bacteriana de Staphylococcus aureus directamente sobre la superficie de titanio. Para el grupo de absceso subcutáneo, cree, desinfecte y suture la incisión directamente sin insertar el implante.

Inyecte 100 microlitros de suspensión de Staphylococcus aureus en el sitio de la incisión con una jeringa estéril de un mililitro. Para evaluar las infecciones en el tejido periférico, coloque la muestra de tejido recolectada en un tubo estéril. Agregue una masa igual de PBS estéril y tres perlas de molienda de acero estériles a cada tubo.

Homogeneice los tejidos en tres ciclos a 70 hercios durante 60 segundos cada uno con una pausa de 20 segundos entre ciclos. Después de la homogeneización, agite las muestras durante cinco minutos. Ahora, prepare diluciones seriadas del homogeneizado de tejido con PBS.

Con una micropipeta, deje caer 15 microlitros de cada homogeneizado diluido en las secciones designadas de las placas de agar sangre. Luego incube las placas de agar de sangre a 37 grados centígrados sin agitar durante 24 horas. El grupo de infección asociada al implante desarrolló una ruptura visible de la herida al tercer día.

El día 10, ambos grupos de ratones mostraron signos de recuperación de la herida, y el grupo de absceso subcutáneo mostró una recuperación más pronunciada que el grupo de infección asociada al implante el día 14. Los cultivos bacterianos de tejido infectado mostraron un alto crecimiento bacteriano sostenido en el grupo de infección asociada al implante en todos los puntos temporales, mientras que el grupo de absceso subcutáneo mostró una reducción progresiva de las colonias bacterianas desde el día tres hasta el día 14. La microscopía electrónica de barrido mostró una cobertura bacteriana cada vez más densa en las láminas de titanio en el grupo de infección asociada al implante desde el día tres hasta el día 14.

La tinción de Giemsa reveló una marcada disminución de bacterias en el grupo de absceso subcutáneo en el día 14, mientras que el grupo de infección asociada al implante mantuvo una alta presencia bacteriana durante todo el período. La tinción con hematoxilina y eosina demostró que la infiltración de células inflamatorias en el grupo de absceso subcutáneo disminuyó significativamente en el día 14, mientras que el grupo de infección asociada al implante mostró una infiltración celular persistentemente densa. El examen histológico de los tejidos del corazón, el hígado, el bazo, los pulmones y los riñones no mostró lesiones o anomalías visibles en el grupo de infección asociada al implante en comparación con el grupo de control.